潘建華,張 玲△,李艷紅,曾子良

1.廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心血液室,廣東廣州 510330;2.廣州醫(yī)科大學(xué)金域檢驗(yàn)學(xué)院,廣東廣州 510330

多發(fā)性骨髓瘤(MM)是惡性漿細(xì)胞病中最常見的一種類型，占惡性血液系統(tǒng)腫瘤的10%[1]，增生的漿細(xì)胞產(chǎn)生單克隆免疫球蛋白，即M蛋白。M蛋白是診斷漿細(xì)胞增殖疾病中的血清腫瘤標(biāo)志物。一般情況下，M蛋白的檢測主要靠血清蛋白電泳(SPE)法或者毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CE)法篩查，該方法可以將M蛋白從多克隆的免疫球蛋白背景中區(qū)分出來。通過瓊脂糖免疫固定或毛細(xì)管免疫分型方法可以驗(yàn)證并得知M蛋白的輕鏈、重鏈類型。血清游離輕鏈(sFLC)法則可以補(bǔ)充電泳技術(shù)對不分泌性多發(fā)性骨髓瘤(NSMM)的漏檢[2]。3種方法聯(lián)合檢測可為臨床診斷治療和療效評(píng)估提供指導(dǎo)依據(jù)[3]。本研究通過對10 287份標(biāo)本結(jié)果進(jìn)行回顧性分析，旨在了解廣東地區(qū)MM的發(fā)病情況。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 回顧性分析廣東地區(qū)2016年1月至2019年12月送往廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心篩查MM的10 287份標(biāo)本，其中男5 567例，女4 720例，年齡28～90歲，平均68.9歲。所有標(biāo)本均采用SPE法、血清免疫固定電泳(IFE)法及sFLC法進(jìn)行檢測分析。

1.2儀器與試劑 SPE、IFE和單克隆免疫球蛋白抗血清[IgG、IgA、IgM、Kappa輕鏈(輕鏈-κ)、Lambda輕鏈(輕鏈-λ)]采用美國Helena Laboratories全自動(dòng)快速電泳系統(tǒng)(spife-3000)及配套試劑盒。SPE批號(hào)11598975；IFE批號(hào)82-19-552559；抗血清批號(hào)8-19-551822。sFLC采用美國貝克曼庫爾特公司Immage 800全自動(dòng)特定蛋白分析儀檢測系統(tǒng)，試劑采用英國Binding Site公司FreelinteTMsFLC檢測試劑盒(κFLC 批號(hào)453705-C1，λFLC 批號(hào)424542-C1)；FreelinteTMsFLC配套校準(zhǔn)品(κFLC批號(hào)469277，λFLC 批號(hào)465406)；FreelinteTMsFLC配套質(zhì)控品(κFLC Control 批號(hào)453712，κFLC High Control批號(hào)453713，λFLC High Control 批號(hào)465408，λFLC Control 批號(hào)465409)。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本采集 空腹采集靜脈血3 mL，避免溶血和脂血,盡快離心并至少分離0.5 mL血清。清晨空腹采集靜脈血并分離血清，置于-20 ℃冰箱保存。

SPE法采用新鮮血清(樣品可以在2～8 ℃冷藏48 h，或在-20 ℃保存2周)。血清標(biāo)本不需要稀釋，取40 μL未稀釋標(biāo)本加到儀器樣品盤中的正確位置，在SPIFE3000電泳儀上按預(yù)先設(shè)置好的程序電泳條件下進(jìn)行加樣、電泳和烘干凝膠片，取出膠片放進(jìn)染色槽全自動(dòng)染色烘干，最后進(jìn)行成像掃描，血清蛋白水平和組分比例更表現(xiàn)出明顯的變化。

1.3.2SPE法 新鮮血清經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳可將血清蛋白分為5個(gè)條帶，從正極到負(fù)極依次為清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白區(qū)帶，同時(shí)對條帶進(jìn)行定性(M蛋白)和定量分析(測得條帶濃度百分比，根據(jù)總蛋白含量×M蛋白條帶百分比得到M蛋白水平)。

1.3.3IFE法 電泳時(shí)蛋白先分離出來，可溶解抗原與抗體發(fā)生反應(yīng)，可變?yōu)椴蝗芙獾某恋?，未反?yīng)的蛋白在清洗中清除，抗原抗體反應(yīng)物染色后，可以看到密集沉淀?xiàng)l帶。將蛋白條帶與免疫固定后的沉淀?xiàng)l帶進(jìn)行比較，得到M蛋白的鑒定與分型。

1.3.3sFLC法 利用散射免疫比濁法通過抗體與游離輕鏈上暴露的抗原決定簇發(fā)生特異性抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行定量檢測。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)采用SPSS19.0軟件進(jìn)行描述統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)或百分率表示。

2 結(jié) 果

2.1MM陽性各分型分布情況 10 287份標(biāo)本中共檢出1 996份M蛋白的標(biāo)本，檢出陽性率為19.4%,其中IgG型1 056份，占總檢數(shù)的10.3%,IgA型500份，占4.9%,IgM型96份，占0.9%,IgD型101份，占1.0%,輕鏈型242份，占2.4%。1 996份陽性標(biāo)本中，IgG型占所有陽性標(biāo)本的52.9%，其中以IgG-κ型所占比例最高，有651份，占IgG型的61.6%；IgA型占陽性標(biāo)本的25.1%，以IgA-λ型所占比例最高，有273份，占IgA型的54.6%；IgM型占陽性標(biāo)本中的4.8%，IgM-κ型所占比例最高，有74份，占IgM型的77.1%；IgD型占陽性標(biāo)本中的5.1%，IgD-λ型所占比例最高，有97份，占IgD型的96.0%；IgE型僅有1份，故不計(jì)入統(tǒng)計(jì)；輕鏈型占陽性標(biāo)本中的12.1%，輕鏈-λ所占比例最高，有182份，占輕鏈型的75.2%。

2.2MM陽性年齡分布情況 將1 996份陽性標(biāo)本分為<45歲，45～<60歲，60～<75歲，75～<90歲，≥90歲5個(gè)年齡段，89份標(biāo)本來自<45歲人群，579份標(biāo)本來自45～<60歲人群，982份標(biāo)本來自60～<75歲人群，331份標(biāo)本來自75～<90歲人群，14份標(biāo)本來自≥90歲人群。60～<75歲人群在IgG、IgA、IgM、輕鏈型中均占比最高，IgD型中45～<60歲人群占比最高，其次是60～<75歲人群。見表1。

表1 年齡分布情況

2.3MM陽性性別分布情況 MM陽性中，男性陽性數(shù)(1 138例)是女性陽性數(shù)(858例)的1.33倍。所有分型中，男性占比均高于女性，在IgG、IgA、IgM、IgD型中男性占比分別為54.3%、58.2%、77.1%、60.4%、57.0%，女性占比分別為45.7%、41.8%、22.9%、39.6%、43.0%。IgE型僅有1份，故不計(jì)入統(tǒng)計(jì)。

3 討 論

本研究中，M蛋白類型構(gòu)成比從高到低依次為IgG>IgA>輕鏈>IgD>IgM>IgE，輕鏈-κ>輕鏈-λ；MM在60～<75歲人群中發(fā)病率最高，其次是45～<60歲人群；男性發(fā)病率高于女性。值得注意的是，本研究中輕鏈型所占比例較高,且IgD型高于國外報(bào)道的2%[4]，提示廣東地區(qū)M蛋白輕鏈型和IgD型較西方國家人群高。有研究報(bào)道，M蛋白輕鏈分布中輕鏈-κ型較輕鏈-λ型明顯更多，但是本研究中輕鏈-λ型明顯多于輕鏈-κ型[4]，分析原因可能與IgD-λ型M蛋白較多和游離輕鏈型M蛋白有關(guān)。

MM是一種老年病，其中位診斷年齡為69歲，低于40歲的患者較為少見[5]。本研究中，患者發(fā)病年齡集中于45～<75歲，75～<90歲次之，40歲以下和≥90歲者少見。廣東地區(qū)MM陽性檢出年齡段分布略高于周愛花等[6]報(bào)道的發(fā)病年齡，是否由于標(biāo)本來源及區(qū)域性差異有待增加樣本量做進(jìn)一步統(tǒng)計(jì)分析。

MM發(fā)病率男性略多于女性，且受種族和遺傳因素的影響，其發(fā)病也受環(huán)境因素影響，如暴露于農(nóng)業(yè)及石化工業(yè)的化學(xué)品[7]，本研究結(jié)果顯示，廣東地區(qū)MM男性發(fā)病率為女性的1.33倍，男女發(fā)病率比例與周愛花等[6]和劉玉梅等[8]報(bào)道的相當(dāng)，表明廣東地區(qū)男女發(fā)病比例與西北蘭州地區(qū)相似。但是，廣東地區(qū)MM各分型男女陽性率明顯高于周愛花等[6]報(bào)道的數(shù)據(jù)，造成差異的原因可能與臨床檢測技術(shù)及方法的聯(lián)合應(yīng)用有很大關(guān)系，是否由于地域或經(jīng)濟(jì)條件及環(huán)境因素有待進(jìn)一步研究。本研究中，IgD和IgM型MM陽性率男性明顯高于女性，其他文獻(xiàn)對這兩種類型少有統(tǒng)計(jì)，尤其是IgM型MM，陽性率為4.8%，提示此型較少見。IgM分型除具有MM的一般臨床表現(xiàn)外，因其相對分子質(zhì)量較大，易形成五聚體而使血液黏滯性增高，易發(fā)生高黏滯性綜合征，其預(yù)后極差。因此，通過聯(lián)合檢測，提高M(jìn)M檢出率，降低MM的漏診、誤診率，及早發(fā)現(xiàn)、及早預(yù)防，對MM的預(yù)后治療具有重要意義。