朱思淵 王伏生 路曉慶 王浩宇 楊 芮 曲南坤 孔啟超 姚安琪

CorrelationbetweenLymphocyteSubsetsandLymphNodeMetastasisandVascularThrombusinBreastCancerPatients.ZhuSiyuan，WangFusheng，LuXiaoqing，etal.ShanxiMedicalUniversity,Shanxi030000,China

AbstractObjectiveTo study the predictive value of preoperative detection of peripheral blood lymphocyte subsets on the severity and prognosis of breast cancer patients by analyzing the correlation between peripheral blood lymphocyte subsets and the presence or absence of lymph node metastasis and vascular cancer embolus.MethodsBreast cancer patients admitted to the department of breast surgery of the second hospital of shanxi medical university for modified radical mastectomy from December 2018 to October 2019 were selected, and 75 patients were screened according to the inclusion criteria. Flow cytometry (FCM) was used to detect the peripheral blood lymphocyte subsets (CD3+T cells, CD4+T cells, CD8+T cells, CD4+T/CD8+T cells, NK cells, CD19+B cells) of the above patients before surgery, and a reasonable statistical method was used to analyze the correlation between lymph node metastasis and vascular cancer embolus.ResultsIn the patients with lymph node metastasis group, CD4+T and CD3+T levels were significantly lower than those in the non-metastasis group, with statistically significant differences (P<0.05).The levels of CD4+T and CD3+T were significantly lower in the group with vascular cancer embolus than in the group without vascular cancer embolus (P<0.05).The level of CD19+B was significantly higher than that of the control group (P<0.01). CD19+B can effectively predict the occurrence of lymph node metastasis in patients. The threshold value was 14.00, and the AUC was 0.631 (0.505-0.758).The sensitivity was 48.9%, and the specificity was 86.7%. CD19+B can effectively predict the occurrence of vascular cancer embolus in patients. The threshold value was 14.00, the AUC was 0.711 (0.592-0.830). The sensitivity was 53.7%, and the specificity was 88.2%.ConclusionBreast cancer patients have immune dysfunction. The lower the level of CD3+T cells and CD4+T cells in peripheral blood, the higher the level of CD19+B cells, the higher the degree of immune escape of breast cancer cells in vivo, which makes the patients more likely to have lymph node metastasis and vascular cancer embolus. Moreover, peripheral blood CD19+B lymphocyte level have certain predictive value for presence or absence lymph node metastasis and vascular cancer embolus in breast cancer patients.

KeywordsLymphocyte subsets； Breast cancer； Lymph node metastasis； Vascular cancer embolus

乳腺癌(BC)位居全球女性癌癥患者死因的第2位，每年造成約50萬女性死亡[1]。近年來，發(fā)展中國家乳腺癌的發(fā)生率和病死率呈現(xiàn)顯著上升的趨勢，占據(jù)了全球約52%的乳腺癌新增病例和約63%的乳腺癌死亡病例[1,2]。盡管人類在乳腺癌領(lǐng)域的研究、診斷及治療已經(jīng)取得了很大的進(jìn)步，但目前對于伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及脈管癌栓的乳腺癌治療效果仍然欠佳[3,4]。如何能在早期及時發(fā)現(xiàn)此類患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及伴有脈管癌栓傾向，成為研究的熱點(diǎn)。

隨著人類對腫瘤認(rèn)識的不斷加深，多項研究表明，免疫細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞之間的相互作用對乳腺腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有重要影響[5]。眾所周知，機(jī)體的免疫系統(tǒng)在正常情況下具有防御病原微生物的侵襲(免疫防御),消除體內(nèi)損傷或衰老、死亡的自身細(xì)胞(免疫穩(wěn)定),以及發(fā)現(xiàn)并及時清除體內(nèi)出現(xiàn)的少量異常或突變的細(xì)胞(免疫監(jiān)視)的功能。當(dāng)人體的免疫監(jiān)視功能降低時,就會導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸,從而引起腫瘤的形成和發(fā)展[6,7]。一旦機(jī)體有腫瘤形成,體內(nèi)存在的抗腫瘤免疫(包括細(xì)胞免疫和體液免疫)就會迅速發(fā)揮相應(yīng)作用。各功能淋巴細(xì)胞亞群在機(jī)體內(nèi)相互促進(jìn)而又相互制約，共同構(gòu)成了機(jī)體對抗腫瘤的免疫過程。來自亞洲癌癥預(yù)防中心的研究表明，乳腺癌患者外周血中的淋巴細(xì)胞亞群有著異于平常的狀態(tài)和完全失調(diào)的比例,而且在乳腺癌組織中可觀察到大量的淋巴細(xì)胞浸潤[8～10]。本研究旨在通過對乳腺癌患者外周血中淋巴細(xì)胞亞群與該患者是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及脈管癌栓的相關(guān)性進(jìn)行分析，以此探究術(shù)前檢測外周血淋巴細(xì)胞亞群對乳腺癌患者病情嚴(yán)重程度的評估價值及預(yù)后的預(yù)測價值。

材料與方法

1.一般資料：選取筆者醫(yī)院2018年12月～2019年10月收治并行改良根治術(shù)的乳腺癌患者。收集患者術(shù)前外周血淋巴細(xì)胞亞群(CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、CD4+T/CD8+T、NK細(xì)胞、CD19+B細(xì)胞)、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有無脈管癌栓等指標(biāo)。

2.納入與排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)納入標(biāo)準(zhǔn)：①筆者醫(yī)院2018年12月～2019年10月收治并行改良根治術(shù)的乳腺癌患者；②無其他腫瘤、無近期感染、無血液系統(tǒng)疾病及自身免疫性疾??；③采血前未做任何化療及放療。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：①無完整臨床資料；②多發(fā)腫瘤或之前經(jīng)過放化療的病例；③有貧血及低蛋白血癥；④近期使用免疫治療劑治療。

3.研究方法：對符合上述納入、排除標(biāo)準(zhǔn)的乳腺癌患者75例，患者平均年齡55.45±11.67歲，其中≤55歲者34例，>55歲者41例；伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者有45例，未轉(zhuǎn)移者30例；有脈管癌栓的患者41例，無脈管癌栓的患者34例，于術(shù)前空腹取其靜脈血3ml到EDTA-K2采血管內(nèi)混勻。淋巴細(xì)胞亞群檢測試劑盒、溶血素、熒光微球計數(shù)試劑等均由美國Beckman Coulter公司提供，嚴(yán)格按照說明書處理標(biāo)本后，用Epics XL流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。

結(jié) 果

1. 乳腺癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況與其外周血淋巴細(xì)胞亞群的關(guān)系：伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的CD4+T和CD3+T水平均顯著低于未出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。CD8+T、CD4+T/CD8+T、CD19+B及NK細(xì)胞水平與患者有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無明顯的相關(guān)性(表1)。

表1 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況與淋巴細(xì)胞亞群的關(guān)聯(lián)性分析

2.乳腺癌患者是否存在脈管癌栓與其外周血淋巴細(xì)胞亞群的關(guān)系：存在脈管癌栓的患者，其CD4+T及CD3+T水平均低于無脈管癌栓的患者(P<0.05)；其CD19+B水平明顯高于無脈管癌栓組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。而CD8+T、CD4+T/CD8+T及NK細(xì)胞水平與患者有無脈管癌栓無明顯相關(guān)性(表2)。

表2 有無脈管癌栓與淋巴細(xì)胞亞群的關(guān)聯(lián)性分析

3.利用外周血淋巴細(xì)胞亞群預(yù)測乳腺癌患者是否伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：乳腺癌患者外周血中的CD19+B水平可有效預(yù)測患者是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，界值為14.00，此時曲線下面積(AUC)為0.631(95% CI:0.505～0.758)，敏感度為48.9%，特異性為86.7%(圖1，表3)。

圖1 利用淋巴細(xì)胞亞群預(yù)測有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

表3 利用淋巴細(xì)胞亞群預(yù)測有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

4.利用外周血淋巴細(xì)胞亞群預(yù)測乳腺癌患者有無脈管癌栓：乳腺癌患者外周血中的CD19+B可有效預(yù)測患者是否發(fā)生脈管癌栓，界值為14.00，此時曲線下面積(AUC)為0.711(95%CI:0.592～0.830)，敏感度為53.7%，特異性為88.2%(圖2，表4)。

討 論

隨著腫瘤學(xué)與免疫學(xué)的不斷發(fā)展，腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與機(jī)體免疫功能異常之間的關(guān)系被越來越多的研究揭示[11]。淋巴細(xì)胞亞群作為人體免疫系統(tǒng)中最重要的組成部分，其在機(jī)體抗腫瘤的免疫應(yīng)答過程中占據(jù)了不可或缺的地位[12,13]。其中，CD3+T細(xì)胞是所有T淋巴細(xì)胞的總稱，發(fā)揮著重要的抗腫瘤作用，

圖2 利用淋巴細(xì)胞亞群預(yù)測有無脈管癌栓

表4 利用淋巴細(xì)胞亞群預(yù)測有無脈管癌栓

可以很好地反映宿主細(xì)胞的免疫狀態(tài)。CD4+T細(xì)胞除可以激活體內(nèi)其他抗腫瘤的免疫細(xì)胞外，其自身還能通過分泌一系列細(xì)胞因子(TNF-α、IL-2、IFN-γ等)來發(fā)揮相應(yīng)的抗腫瘤效應(yīng)，然而腫瘤細(xì)胞在發(fā)展過程中會產(chǎn)生一些抑制淋巴細(xì)胞增殖及分化的免疫抑制因子,致使CD4+T細(xì)胞含量減少,形成免疫效應(yīng)不足?；罨腃D8+T細(xì)胞不僅能夠和靶細(xì)胞上的MHC-Ⅰ類抗原復(fù)合物進(jìn)行結(jié)合后釋放顆粒酶和穿孔素殺死靶細(xì)胞,而且還可產(chǎn)生抗腫瘤的細(xì)胞毒性T細(xì)胞[14，15]。NK細(xì)胞則是一種在免疫監(jiān)視及抗腫瘤免疫中均可發(fā)揮巨大作用的淋巴細(xì)胞，其在不需要特異性致敏源的情況下即可對腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生有效的非特異性殺傷作用[16,17]。CD19+B淋巴細(xì)胞的作用則恰恰與上述幾種細(xì)胞完全相反，Olkhanud等[18]研究表明， CD19+B細(xì)胞可通過促使CD4+T細(xì)胞轉(zhuǎn)化為調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，從而抑制CD4+T細(xì)胞的活化，幫助腫瘤實(shí)現(xiàn)免疫逃逸，促進(jìn)了乳腺癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移。

根據(jù)乳腺癌NCCN指南，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和脈管癌栓侵犯是乳腺癌患者不良預(yù)后的重要指標(biāo)，也直接影響后續(xù)治療方案的選擇。調(diào)查顯示，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和瘤周脈管侵犯的乳腺癌患者總生存率遠(yuǎn)低于對照組[19]。本研究顯示，不論是發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者還是伴有脈管癌栓的患者，其CD4+T和CD3+T水平均顯著低于各自的對照組(P<0.05)；除此以外，伴有脈管癌栓的乳腺癌患者的CD19+B水平顯著高于無脈管癌栓組(13.60±3.34 vs 11.19±3.27，P<0.01)。這也與Mamessier 等[20]的研究結(jié)果一致，提示在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及脈管癌栓的乳腺癌患者體內(nèi)發(fā)生著更為嚴(yán)重的免疫逃逸和免疫抑制反應(yīng)。這也揭示了此類患者疾病進(jìn)展快、預(yù)后差的原因。

此外，本研究發(fā)現(xiàn)，外周血淋巴細(xì)胞亞群中CD19+B水平可以作為術(shù)前預(yù)測乳腺癌患者是否伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和脈管癌栓的指標(biāo)。CD19+B淋巴細(xì)胞預(yù)測乳腺癌患者是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的敏感度為48.9%，特異性為86.7%；預(yù)測是否有脈管癌栓的敏感度為53.7%，特異性為88.2%。兩個預(yù)測的界值均為14.00，近一步闡明了CD19+B淋巴細(xì)胞水平對乳腺癌患者不良預(yù)后的巨大預(yù)測價值。盡管CD19+B淋巴細(xì)胞作為預(yù)測指標(biāo)的敏感度均<60%，但其特異性較高。術(shù)前檢測外周血CD19+B淋巴細(xì)胞水平高于界值(14.00)的乳腺癌患者，可能預(yù)示著其伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和(或)脈管癌栓，提示術(shù)者在行淋巴結(jié)及瘤周組織清掃時更應(yīng)謹(jǐn)慎進(jìn)行。

綜上所述，乳腺癌患者外周血中的CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD19+B細(xì)胞水平與患者是否伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及脈管癌栓有明確的相關(guān)性。乳腺癌患者外周血中的CD19+B淋巴細(xì)胞水平可有效預(yù)測患者是否伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和脈管癌栓，術(shù)前進(jìn)行CD19+B淋巴細(xì)胞的檢測可以很好地預(yù)測乳腺癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及瘤周脈管侵犯情況，對術(shù)者術(shù)中進(jìn)行淋巴結(jié)及瘤周組織清掃有一定的提示及指導(dǎo)意義。