劉杰 韓薇 崔雪志 吳蕾 常海霞 韓帥琪 張向奎 劉振林 李文鋒 李建和 李超 許傳田

摘? 要：為評(píng)價(jià)規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)常用消毒劑的消毒效果，用規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)分離鑒定的三株細(xì)菌（大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和葡萄球菌）作為標(biāo)準(zhǔn)菌株，用菌懸混合液定量殺菌法分別對(duì)13種消毒劑的殺菌效果進(jìn)行比較。在相同實(shí)驗(yàn)室條件下，將大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、葡萄球菌分別與消毒劑按不同稀釋比例混勻后作用15 min，培養(yǎng)并計(jì)數(shù)殺菌后的菌落總數(shù)。結(jié)果顯示：A、B、I 比例為1∶2000;C、D比例為1∶1000;H比例為1∶800;G比例為1∶600;E、F、L、M濃度為0.3%（其中L和M以碘含量計(jì)）;J濃度為0.05%;K濃度為0.02%;以上濃度均可達(dá)到100%殺菌效果。

關(guān)鍵詞：大腸桿菌;沙門(mén)氏菌;葡萄球菌;消毒劑

中圖分類(lèi)號(hào)：S859.79+9.1? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B? ? ?文章編號(hào)：1673-1085（2020）9-0003-05

規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)疫病爆發(fā)多是由于外界病原微生物入侵或者內(nèi)環(huán)境病原微生物污染擴(kuò)散造成的[1]，消毒能效阻斷傳染病病原體傳播[2]，通過(guò)消毒可將病原微生物隔離在養(yǎng)殖場(chǎng)和動(dòng)物體外。因而選擇高效安全的消毒劑產(chǎn)品是做好消毒工作的關(guān)鍵，亦是做好生物安全工作的重中之重。目前市場(chǎng)上消毒劑種類(lèi)繁多、效果各異，養(yǎng)殖場(chǎng)人員在選擇消毒劑時(shí)無(wú)所適從。本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)13種消毒劑分別對(duì)大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和葡萄球菌的殺菌效果比較，并結(jié)合每種消毒劑的使用成本和消毒機(jī)制，篩選消毒效果較好、性?xún)r(jià)比高的產(chǎn)品，為養(yǎng)殖場(chǎng)合理選擇選消毒劑提供依據(jù)。

1? 材料與方法

1.1? 材料

1.1.1? 消毒劑及主要成分? 戊二醛苯扎溴銨溶液（A），戊二醛苯扎溴銨溶液（B），戊二醛苯扎溴銨溶液（C），復(fù)方戊二醛溶液（D），復(fù)合酚（E），復(fù)合酚（F），過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合物粉（G），過(guò)氧乙酸、過(guò)氧化氫溶液（H），戊二醛苯扎溴銨、甲醛、乙二醛（I），三氯異氰尿酸粉（J），癸甲溴銨溶液（K），10%聚維酮碘溶液（L），10%聚維酮碘溶液（M）。

1.1.2? 試驗(yàn)菌株? 試驗(yàn)用大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和葡萄球菌均來(lái)自養(yǎng)殖現(xiàn)場(chǎng)。

1.1.3? 器材? MHB和平板計(jì)數(shù)瓊脂均為陸橋產(chǎn)品;蘇凈牌超凈工作臺(tái)、一恒37 ℃恒溫培養(yǎng)箱、申安牌高壓滅菌鍋、100～1000 μL單道移液器、吸頭、18 mm×180 mm試管（帶塞子）、酒精燈等。

1.2? 方法

1.2.1? 細(xì)菌培養(yǎng)? 將養(yǎng)殖場(chǎng)分離鑒定的大腸桿菌、沙門(mén)氏菌和葡萄球菌復(fù)蘇后，加入到已滅菌MHB溶液，37 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h。

1.2.2? 計(jì)算MHB溶液中菌落含量? 室溫條件下（25℃）將培養(yǎng)24 h的MHB溶液在超凈工作臺(tái)中用滅菌生理鹽水作10倍倍比稀釋?zhuān)♂屩?08，再分別從已稀釋好的梯度（104～108）中分別取0.1 mL菌液加入到滅菌的90 mm平皿中，倒入平板計(jì)數(shù)瓊脂，凝固后置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)18～24 h，計(jì)算三種菌株的菌落總數(shù)。

1.2.3? 消毒劑與菌懸液作用? 室溫條件下（25 ℃），根據(jù)廠家推薦消毒濃度設(shè)置消毒劑的稀釋比例（見(jiàn)表1）將A、B、C、D、G、H和I分別用蒸餾水進(jìn)行1∶200、1∶400、1∶600、1∶800、1∶1000、1∶2000倍稀釋;E和F作0.1%、0.3%、0.5%、0.7%、0.9%、1.2%稀釋;J稀釋至0.05%、0.1%、0.3%、0.5%、0.7%、0.9%;K稀釋至0.008%、0.016%、0.02%、0.035%、0.04%、0.05%;L、M稀釋至0.1%、0.3%、0.5%、1%、2%（以碘含量計(jì)）。震蕩混勻后，在超凈工作臺(tái)中將相應(yīng)菌株加入到不同稀釋倍數(shù)的消毒劑中，消毒劑與菌懸液的比例為10∶1（10 mL消毒劑∶1mL菌液）混合均勻，反應(yīng)15 min。在超凈工作臺(tái)中分別取0.1 mL反應(yīng)后混合液加入平皿中，倒入平板計(jì)數(shù)瓊脂、混勻，凝固后倒置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24 h，計(jì)算不同平皿中的菌落總數(shù)。試驗(yàn)過(guò)程中設(shè)陽(yáng)性對(duì)照（滅菌蒸餾水∶菌懸液=10∶1）和陰性對(duì)照（滅菌蒸餾水）。

2? 試驗(yàn)結(jié)果

2.1? MHB溶液中細(xì)菌含量? 試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

由表2計(jì)算可知，三種菌株菌懸液中含菌量：大腸桿菌為6.8×109 CFU/mL，沙門(mén)氏菌為7.2×108 CFU/mL，葡萄球菌為4.5×108 CFU/mL。

2.2? 各種消毒劑殺菌效果? 消毒劑對(duì)三種細(xì)菌的殺菌效果見(jiàn)表3。結(jié)果顯示，13種消毒劑的不同稀釋比例對(duì)菌懸液（大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、葡萄球菌）作用15 min，并菌落計(jì)數(shù)100 μL。A、B、I 比例為1∶2000，C、D比例為1∶1000，H 比例為1∶800，G比例為1∶600，E、F、L、M濃度為0.3%，J濃度為0.05%，K濃度為0.02%，以上濃度對(duì)三種菌均可達(dá)到100%殺菌效果。

2.3? 不同消毒劑的成本比較? 在實(shí)驗(yàn)室條件下，13種消毒劑推薦使用比例與市場(chǎng)價(jià)格計(jì)算得出其消毒成本，由低到高依次為K

3? 討論

在實(shí)驗(yàn)室條件下，13種消毒劑按廠家推薦比例對(duì)大腸桿菌、沙門(mén)氏菌、葡萄糖球菌均可達(dá)到100%殺菌效果。比較各種消毒劑消毒效果和成本，消毒劑K性?xún)r(jià)比較高，其主要成分為癸甲溴銨，是一種雙鏈季銨鹽消毒劑，殺菌普廣，對(duì)多數(shù)細(xì)菌、真菌、病毒有殺滅效果，為中效消毒劑，無(wú)色、無(wú)味、無(wú)刺激和腐蝕性，但受有機(jī)物影響大，對(duì)芽孢和無(wú)囊膜病毒效果較差，可帶禽和飲水等消毒[3，4]。

消毒劑J主要成分為三氯異氰尿酸粉，可殺滅各種微生物，主要對(duì)細(xì)菌、芽孢、病毒及真菌殺菌作用強(qiáng)，屬于高效消毒劑;但其藥效持續(xù)時(shí)間較短，有較強(qiáng)的刺激性和腐蝕性，種禽場(chǎng)多用于空舍期及其車(chē)輛消毒[5]。

消毒劑A、B、C、D、I主要消毒成分為戊二醛苯扎溴銨或者復(fù)方戊二醛，均為醛類(lèi)消毒劑，殺菌作用和滲透力強(qiáng)， 對(duì)任何細(xì)菌、病毒、霉菌及頑固的芽孢等有殺滅作用， 可用于空欄、用具、運(yùn)輸車(chē)輛等的消毒， 還可用于熏蒸消毒[6];受溫度和有機(jī)物影響較小，主要用于禽舍、器具噴霧等消毒。

消毒劑E和F成分是復(fù)合酚，為酚類(lèi)消毒劑，通過(guò)使病原微生物蛋白變性、沉淀達(dá)到消毒效果，殺菌普廣，但有臭味和刺激性[7]，所以主要用于墻壁、地面、外環(huán)境和用具消毒。

消毒劑L和M主要成分為聚維酮碘，可殺死大部分細(xì)菌、真菌和病毒[8]，殺菌快且效力強(qiáng)，但使用濃度較高、不溶于水、有殘留、受有機(jī)物影響較大，主要用于帶畜禽消毒、飲用水消毒等。

消毒劑G成分為過(guò)硫酸氫鉀復(fù)合物粉，是一種廣譜、高效、低毒獸用消毒劑[9]，主要用于畜禽舍水線和帶畜禽消毒。

消毒劑H主要成分為過(guò)氧乙酸和過(guò)氧化氫，殺菌普廣、高效、環(huán)保，可以迅速殺滅大腸桿菌和金黃色葡萄球菌等微生物[10]，主要用于畜禽圈舍和設(shè)備表面消毒。

本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)是在實(shí)驗(yàn)室條件下所得，養(yǎng)殖場(chǎng)在實(shí)際消毒過(guò)程中，因消毒對(duì)象、溫度、濕度、作用時(shí)間、消毒方式、有機(jī)物及污染程度等因素都會(huì)對(duì)消毒效果產(chǎn)生一定的影響;因此養(yǎng)殖現(xiàn)場(chǎng)選擇消毒劑要根據(jù)消毒對(duì)象選擇適當(dāng)類(lèi)型消毒劑，并根據(jù)消毒條件調(diào)整消毒劑使用比例，以達(dá)到理想消毒效果。

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