代仕梅 李華仙 高宇明 何 琴 吳秀清

四川省資陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心,四川 資陽(yáng) 641399

澤瀉為澤瀉科植物澤瀉Alismaorientale(Sam.)Juzep．的干燥塊莖，其藥材呈類(lèi)球形、橢圓形或卵圓形，具有利水滲濕、泄熱、化濁降脂之功效[1]，臨床上可用于小便不利、水腫脹滿(mǎn)、泄瀉尿少、痰飲眩暈、熱淋澀痛、高脂血癥等?；瘜W(xué)研究表明，澤瀉的化學(xué)成分主要為三萜和倍半萜，其中三萜為主要活性成分[2-3]。藥理學(xué)研究表明，澤瀉的水浸物、醇浸物及三萜類(lèi)成分，如澤瀉醇A、澤瀉醇B、24-乙酰澤瀉醇A、23-乙酰澤瀉醇B等具有利尿[4]、抗結(jié)石[4]、降血糖[6]、降血脂[7]和抗氧化損傷[8]等多種作用。由于產(chǎn)地澤瀉的栽培技術(shù)及生態(tài)環(huán)境不同，藥材生長(zhǎng)性及內(nèi)在品質(zhì)也有差異[9]。澤瀉在溫帶、亞熱帶地區(qū)均可生長(zhǎng)，被廣泛種植于江西、廣東、廣西、福建、四川等地，是川、閩的道地藥材[10]。目前關(guān)于全國(guó)各地澤瀉藥材對(duì)比的報(bào)道較多[11]，四川省內(nèi)不同產(chǎn)地澤瀉藥材質(zhì)量對(duì)比的較少。為此，本研究收集了34批四川的4個(gè)主要澤瀉產(chǎn)地的栽培澤瀉樣品，對(duì)其水分、灰分、醇溶性浸出物、23-乙酰澤瀉醇B的含量進(jìn)行分析，以評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地川澤瀉的質(zhì)量，為保證川澤瀉藥材質(zhì)量穩(wěn)定提供技術(shù)依據(jù)。

1 儀器與試劑試藥

1.1 儀器 MS205DU電子分析天平(梅特勒托利多)；高效液相色譜儀(Agilent Technologies 1260 Infinity)；電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海汗諾儀器有限公司)；電熱恒溫水浴鍋(北京中興偉業(yè)世紀(jì)儀器有限公司)。

1.2 試劑試藥 23-乙酰澤瀉醇B對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院111846-201705)，乙腈、甲醇為色譜純(Fisher公司)，水為注射用水，其他為分析純。

1.3 藥材 藥材采集于四川省內(nèi)眉山、樂(lè)山2個(gè)產(chǎn)地共34批，由資陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心吳秀清主任中藥師鑒定為澤瀉Alismaorientale(Sam.)Juzep．，采樣信息見(jiàn)表1。

表1 不同產(chǎn)地澤瀉基本信息

2 方法

2.1 水分、灰分、浸出物測(cè)定方法 參照《中國(guó)藥典》(2015年版)四部通則0832項(xiàng)下第二法測(cè)定各樣品的水分[12]103；參照《中國(guó)藥典》(2015年版)四部通則2302項(xiàng)下的灰分測(cè)定法測(cè)定各樣品的灰分含量[12]204；參照《中國(guó)藥典》(2015年版四部通則2201) 項(xiàng)下的醇溶性浸出物測(cè)定法熱浸法以乙醇為溶劑測(cè)定醇溶性浸出物含量[12]202。

2.2 含量測(cè)定方法 參照《中國(guó)藥典》(2015年版)一部中澤瀉含量測(cè)定項(xiàng)下測(cè)定法測(cè)定23-乙酰澤瀉醇B的含量[1]。

2.2.1 對(duì)照品儲(chǔ)備液制備 取23-乙酰澤瀉醇B 對(duì)照品適量，加乙腈制成每1 mL含100 μg的儲(chǔ)備液。

2.2.2 供試品溶液制備 取澤瀉粉末(過(guò)五號(hào)篩)約0.5 g，精密稱(chēng)定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙腈25 mL，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理(功率250 W，頻率50 kHz)30 min，放冷，再稱(chēng)定重量，用乙腈補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.2.3 色譜條件 選用XselectR Hss T3 C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色譜柱，乙腈-水(73∶27)為流動(dòng)相，等度洗脫；流速1.0 mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)208 nm，柱溫：30 ℃，進(jìn)樣量10 μL。23-乙酰澤瀉醇B含量測(cè)定圖譜如圖1所示。

2.2.4 線(xiàn)性關(guān)系考察 分別精密吸取取2.2.1項(xiàng)下儲(chǔ)備液1、1、5、8、10 mL，置于100、10、10、10、10 mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，配制成濃度為1 μg/mL、10 μg/mL、50μg/mL、80 μg/mL、100 μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積與對(duì)照品濃度進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得回歸方程為Y=0.4219x+0.6691，相關(guān)系數(shù)r=0.9997，線(xiàn)性范圍：0.99 ～98.80 μg/mL，表明對(duì)照品與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.2.5 精密度考察 精密吸取23-乙酰澤瀉醇B對(duì)照品溶液，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積積分值，計(jì)算23-乙酰澤瀉醇B峰面積的RSD為0.20%，表明儀器精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取1號(hào)澤瀉樣品按2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按照2.2.3項(xiàng)下的方法，分別在在0 h、2 h、4 h、6 h、8 h進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算23-乙酰澤瀉醇B峰面積的RSD為1.34%，表明樣品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

1.23-乙酰澤瀉醇B；A.對(duì)照品溶液；B.樣品溶液圖1 23-乙酰澤瀉醇B含量測(cè)定圖譜

2.2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取1號(hào)澤瀉藥材樣品6份，按2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，采用2.2.3項(xiàng)下液相色譜條件，分別進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算23-乙酰澤瀉醇B含量，分別為：0.2508%、0.2493%、0.2511%、0.2499%、0.2516%、0.2480%，RSD為0.53%，表明該方法的重復(fù)性良好。

2.2.8 加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱(chēng)取1號(hào)澤瀉藥材樣品6份，每份約0.25 g，分別精密加入23-乙酰澤瀉醇B標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液5.80 mL，再精密加入乙腈24.20 mL，按照2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，用2.2.3項(xiàng)下液相色譜條件，分別進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算23-乙酰澤瀉醇B含量，結(jié)果23-乙酰澤瀉醇B平均回收率為100.77%，RSD為1.90%，表明該方法準(zhǔn)確可靠，可用于澤瀉的含量測(cè)定。加標(biāo)回收率結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 澤瀉加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn) (n=6)

3 結(jié)果與分析

3.1 結(jié)果與分析 不同產(chǎn)地澤瀉水分、灰分、醇溶性浸出物、23-乙酰澤瀉醇B含量結(jié)果見(jiàn)表3。

《中國(guó)藥典》(2015年版)一部規(guī)定澤瀉藥材水分不得過(guò)14.0%，灰分不得過(guò)5.0%，醇溶性浸出物不得少于10.0%，23-乙酰澤瀉醇B不得少于0.050%[15]。各產(chǎn)地澤瀉中水分、灰分、醇溶性浸出物、23-乙酰澤瀉醇B含量如表2。結(jié)果表明，四川省內(nèi)各產(chǎn)區(qū)澤瀉的灰分和23-乙酰澤瀉醇B含量無(wú)顯著差異，水分和醇溶性浸出物差異較大，水分范圍為7.3%～12.3%，灰分范圍為2.2%～3.3%，醇溶性浸出物含量范圍為13.6%～28.4%，23-乙酰澤瀉醇B含量范圍為0.209%～0.334%，其主要含量均達(dá)到藥典標(biāo)準(zhǔn)，且各產(chǎn)區(qū)澤瀉的醇溶性浸出物和23-乙酰澤瀉醇B均遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于藥典標(biāo)準(zhǔn)要求。

表3 34批澤瀉水分、灰分、浸出物、23-乙酰澤瀉醇B含量

圖2 澤瀉醇溶性浸出物含量比較圖

將34批澤瀉醇溶性浸出物含量和23-乙酰澤瀉醇B含量結(jié)果導(dǎo)入SPSS17.0軟件，進(jìn)行簡(jiǎn)單分布散點(diǎn)分析，結(jié)果如圖2、圖3所示。從圖2和圖3可以看出，眉山東坡區(qū)白馬鎮(zhèn)樣品醇溶性浸出物和23-乙酰澤瀉醇B含量較低；樂(lè)山夾江甘霖鎮(zhèn)樣品浸出物含量較高，但23-乙酰澤瀉醇B含量較低；夾江縣產(chǎn)澤瀉整體23-乙酰澤瀉醇B含量低于眉山彭山區(qū)和樂(lè)山五通橋區(qū)。

圖3 澤瀉23乙酰澤瀉醇B含量比較圖

3.2 川澤瀉浸出物含量和指標(biāo)成分含量聚類(lèi)分析 采用SPSS17.0軟件中K-均值聚類(lèi)法，結(jié)合34批川澤瀉藥材中醇溶性浸出物和23-乙酰澤瀉醇B含量進(jìn)行聚類(lèi)分析，結(jié)果見(jiàn)表4。根據(jù)聚類(lèi)分析結(jié)果，可把藥材分為2組，第1組包括1～9、11～23、25～28、30、32～34號(hào)樣品，第2組為10、24、29、31號(hào)樣品，主要包括彭山謝家鎮(zhèn)、夾江三洞鎮(zhèn)、夾江黃土鎮(zhèn)、夾江甘霖鎮(zhèn)。

表4 34批川澤瀉醇溶性浸出物和23-乙酰澤瀉醇B含量的聚類(lèi)分析距離

續(xù)表4

4 討論

本次研究分別對(duì)四川眉山東坡區(qū)、眉山彭州區(qū)、樂(lè)山夾江縣、樂(lè)山五通橋區(qū)所產(chǎn)澤瀉中水分、灰分、醇溶性浸出物和23-乙酰澤瀉醇B含量進(jìn)行測(cè)定。研究結(jié)果顯示，按藥典標(biāo)準(zhǔn)評(píng)判，本文所檢測(cè)四川省4個(gè)產(chǎn)區(qū)川澤瀉整體質(zhì)量水平較高，僅23-乙酰澤瀉醇B含量最低者也為藥典標(biāo)準(zhǔn)的4倍左右。同時(shí)也可以發(fā)現(xiàn)，不同產(chǎn)地樣品質(zhì)量存在較大差異，其中眉山市彭州區(qū)澤瀉的灰分低于其他產(chǎn)區(qū)，眉山市東坡區(qū)澤瀉水分低于其他產(chǎn)區(qū)，眉山東坡區(qū)白馬鎮(zhèn)樣品醇溶性浸出物和23-乙酰澤瀉醇B含量較低；樂(lè)山夾江甘霖鎮(zhèn)樣品浸出物含量較高，但23-乙酰澤瀉醇B含量較低；夾江縣產(chǎn)澤瀉整體23-乙酰澤瀉醇B含量低于眉山彭山區(qū)和樂(lè)山五通橋區(qū)。聚類(lèi)分析結(jié)果表明，東坡、彭州、夾江、五通橋產(chǎn)川澤瀉指標(biāo)成分含量存在一定差異，34批樣品有4批單獨(dú)聚為一類(lèi)，其中3批產(chǎn)自?shī)A江，說(shuō)明夾江產(chǎn)澤瀉有一定地域特點(diǎn)。以上可能是土壤、水質(zhì)、氣候、種植習(xí)慣等因素影響的結(jié)果，具體影響程度還有待進(jìn)一步研究。