血培養(yǎng)布魯菌在實驗室的鑒識

李艷

【摘要】目的 總結(jié)布魯菌在血培養(yǎng)時的表現(xiàn)特性，對其正確鑒定識別。方法 通過對我院2018年8月～2019年1月共151例血培養(yǎng)陽性，經(jīng)過鑒定為布魯菌感染且血清學(xué)凝集試驗陽性（1例為陰性）結(jié)果進行回顧性分析總結(jié)。結(jié)果 血培養(yǎng)時間平均為82.1 h陽性報警，生長曲線具有共同特征，血平板上生長緩慢。結(jié)論 實驗室人員通過血培養(yǎng)生長曲線特征、菌落特點及生化反應(yīng)正確識別布魯菌，為臨床提供診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，幫助實驗室人員及早做出防護，防止實驗室感染。

【關(guān)鍵詞】布魯菌;血培養(yǎng);平均陽性報警時間;生長曲線特征

【中圖分類號】R446 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】ISSN.2095.6681.2020.27..02

布魯菌是一類人畜共患感染性疾病的病原體，主要通過接觸染病牛羊，細(xì)菌可經(jīng)完整的皮膚黏膜進入宿主體內(nèi)，或者食用未煮熟的染病牛羊肉或奶制品，人類普遍對布魯菌易感。布魯菌進入人體后，首先侵犯局部淋巴結(jié)，并在淋巴結(jié)內(nèi)生長繁殖形成感染灶，當(dāng)細(xì)菌繁殖到一定數(shù)量便侵入血流并釋放出內(nèi)毒素，出現(xiàn)菌血癥。外周血中培養(yǎng)出布魯菌是診斷的金標(biāo)準(zhǔn)[1]，抽取血液進行培養(yǎng)是臨床醫(yī)生普遍使用且容易被病人及家屬接受的診斷方法。本文通過對151例血培養(yǎng)檢測出布魯菌的病例資料進行回顧性分析，總結(jié)其在自動培養(yǎng)儀上生長曲線特點，轉(zhuǎn)種后生長緩慢，菌落特征及一系列生化反應(yīng)特點，為檢驗科微生物工作人員對本菌的正確識別提供參考，及早而準(zhǔn)確發(fā)放血培養(yǎng)結(jié)果，為臨床醫(yī)生提供診斷依據(jù)，防止誤診和漏診。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年8月～2019年1月我院門診及住院病人根據(jù)2012年頒布的《布魯氏菌病診療指南（試行）》確診為布魯氏菌病，外周血中均有布魯菌生長的151例病人資料。虎紅平板凝集試驗（PAT）1+至4+（1例為陰性），血清抗體微量凝集試驗：陰性1例，1：50陽性2例，1：100陽性23例，1：200陽性22例，1：400陽性29例，1：800陽性21例，≥1：800陽性53例。臨床上表現(xiàn)為不同程度的發(fā)熱、多汗、關(guān)節(jié)痛、肝脾腫大并有接觸史[2]。

1.2 儀器與試劑

VersaTREK及配套使用的需氧培養(yǎng)瓶。遼寧迪浩生物科技有限公司生產(chǎn)的布魯氏菌抗體檢測試劑盒（虎紅平板凝集法）。

1.3 標(biāo)本采集

無菌采集10 mL血液至需氧培養(yǎng)瓶中，按儀器要求的程序放入培養(yǎng)儀，培養(yǎng)儀自動進行。

1.4 試驗室鑒定

VersaTREK自動血培養(yǎng)儀發(fā)出陽性報警，查看生長曲線為下降的曲線（如圖1），應(yīng)該高度懷疑布魯菌生長，為防止試驗室污染和操作人員感染，然后按照無菌操作要求在生物安全柜中進行抽取混勻的培養(yǎng)瓶中的樣本轉(zhuǎn)種到馬血平板和伊紅美藍(lán)平板上，放置在35～37℃、5～10﹪CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)（平板上應(yīng)做好標(biāo)記，培養(yǎng)后的觀察、取菌、接種等一系列的操作都應(yīng)該在生物安全柜中進行）。24 h后觀察血平板上有菌生長但不明顯，無法辨識菌落形態(tài)。培養(yǎng)至48～72 h血平板上生長出較小、突起、邊緣整齊、灰白色、濕潤的菌落，麥康凱平板上不生長。取菌涂片進行革蘭染色，油鏡觀察可見革蘭陰性球桿菌（如圖2），沙灘樣。 尿素分解試驗5～10分鐘出現(xiàn)陽性，氧化酶、觸酶陽性，能分解葡萄糖等糖類，產(chǎn)少量酸，能還原硝酸鹽，不分解甘露醇，不形成靛基質(zhì)，不利用枸櫞酸鹽，甲基紅和VP試驗陰性。與布魯菌陽性標(biāo)準(zhǔn)血清發(fā)生肉眼可見的凝集反應(yīng)。

2 結(jié) 果

布魯菌在VersaTREK自動血培養(yǎng)儀上的生長曲線為下降的曲線，VersaTREK是根據(jù)感受到的培養(yǎng)瓶中氣體壓力變化自動報警，布魯菌在生長過程中消耗氣體，所以生長曲線為下降曲線。151例病例最短的報陽時間為53.0 h，最長報陽時間為209.7 h，平均報陽時間為82.1 h。接種到血平板上放置5～10%CO2培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)24 h，可見細(xì)菌生長但無法辨識菌落特征。繼續(xù)培養(yǎng)至48～72 h，可見細(xì)小、突起、邊緣整齊、灰白色、濕潤的菌落。革蘭染色為陰性球桿菌，沙灘樣，尿素分解試驗5～10分鐘出現(xiàn)陽性，氧化酶、觸酶陽性，能分解葡萄糖等糖類，產(chǎn)少量酸，能還原硝酸鹽，不分解甘露醇，不形成靛基質(zhì)，不利用枸櫞酸鹽，甲基紅和VP試驗陰性，與布魯菌陽性標(biāo)準(zhǔn)血清做玻片凝集試驗，發(fā)生肉眼可見的顆粒凝集反應(yīng)，可推斷為布魯菌生長。

3 討 論

目前，布魯氏菌病流行呈現(xiàn)新的趨勢，出現(xiàn)分散點狀，多發(fā)特點。病人多出現(xiàn)不同程度的反復(fù)發(fā)熱、多汗、關(guān)節(jié)痛、肝脾腫大并有接觸史，外周血中培養(yǎng)出布魯菌是診斷的金標(biāo)準(zhǔn)[1]，抽取血液進行培養(yǎng)是臨床醫(yī)生普遍使用且容易被病人及家屬接受的診斷方法。臨床醫(yī)生為尋找病源大多會進行血液培養(yǎng)，如果在VersaTREK培養(yǎng)儀上出現(xiàn)上述特征的生長曲線時，應(yīng)高度懷疑布魯氏桿菌感染，布魯菌的主要致病物質(zhì)是內(nèi)毒素。光滑型菌的莢膜有較強的侵襲力，細(xì)菌產(chǎn)生的透明質(zhì)酸酶和H2O2 酶可幫助細(xì)菌能通過完好的黏膜和呼吸道進入宿主體內(nèi)，為避免實驗室操作人員實驗室內(nèi)感染，后序的操作應(yīng)該在生物安全柜中進行。

布魯菌生長緩慢，本文中的151例菌株的平均報陽時間為82.1 h，最短報陽時間為53.0 h，最長報陽時間為209.7 h。全自動血培養(yǎng)儀系統(tǒng)廣泛應(yīng)用，對布魯氏菌培養(yǎng)的報道也逐漸增多。[4]

布魯菌在血平板上生長緩慢，菌落特征為較小、突起、邊緣整齊、灰白色、濕潤光滑。革蘭染色陰性球桿菌，呈現(xiàn)沙灘樣，應(yīng)與其他革蘭染色陰性桿菌相區(qū)別。布魯菌有較強的侵襲力，人類對其普遍易感，可通過完整的皮膚黏膜、呼吸道、消化道感染人類，?？蓪?dǎo)致實驗室污染感染，被認(rèn)為是存在極大的危害的病原菌，[5] 常通過氣溶膠使微生物操作人員獲得感染，多篇文獻(xiàn)中有實驗室暴發(fā)感染的相關(guān)報道，[6]我國也有實驗室感染的相關(guān)報道。[7]布魯氏桿菌抵抗力強，如在水、土壤、糞便、皮毛肉和乳制品中可存活數(shù)周至數(shù)月。因此，對于微生物實驗室的檢驗人員，應(yīng)熟練掌握對布魯菌的認(rèn)識，做到早期識別，規(guī)避實驗室感染的風(fēng)險。

參考文獻(xiàn)

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[3] 劉凡瑜，王 平，王 迪，等.吉林省西部牧區(qū)養(yǎng)羊戶布魯桿菌病感染現(xiàn)況調(diào)查[J].吉林大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2015，41（1）：175-180.

[4] 陳日榮，李惠冰，周美容.不同種類微生物在全自動血培養(yǎng)儀中的生長曲線特點及意義[J].中國感染控制雜志，2006，5（3）：206-208.

[5] 陳東科，孫長貴.實用臨床微生物學(xué)檢驗與圖譜[M].第一版，北京：人民衛(wèi)生出版社，2011：497.

[6] Robichaud S，Libman M，Behr M，et al.Prevention of laboratory-acquired brucellosis[J].Clin Infect Dis.2004，38（12）：e119-e122.

[7] 王 帝，翟 璐.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)28名師生因動物實驗感染嚴(yán)重傳染病[N].中國青年報，2011-09-03.