RNA在交通事故類的案件中的法醫(yī)學(xué)意義

周佩佩

（南京康寧司法鑒定中心，江蘇 南京）

0 引言

RNA是DNA的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，由核糖核苷酸頸磷酸二酯鍵縮合而成長鏈分子，與遺傳信息的表達(dá)和調(diào)控有關(guān)，并以各種不同的方式行使這些功能。按其功能不同可分為mRNA、tRNA及rRNA，可指導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成，決定細(xì)胞表型，具有組織特異性，可解決DNA在生物樣本組織來源、死亡時(shí)間、死亡原因方面不足的問題。

1 死亡時(shí)間推斷

死亡時(shí)間推斷即推斷死后經(jīng)歷或間隔時(shí)間，一直是法醫(yī)學(xué)實(shí)際工作及研究工作的重點(diǎn)及難點(diǎn)。在交通事故致死案件中，尤其是傷后急性死亡的案件，死亡時(shí)間推斷對(duì)于認(rèn)定和排除肇事嫌疑方，劃定搜尋方向有重要作用。特別是在涉及多個(gè)嫌疑人時(shí)，死亡時(shí)間的準(zhǔn)確推斷顯得愈加重要。傳統(tǒng)方法中一般主要根據(jù)尸體現(xiàn)象或尸體內(nèi)源性指標(biāo)來判斷，易受主觀因素及外界環(huán)境因素（如溫度、濕度、土壤等）的影響。近年來，RNA作為一種死亡時(shí)間推斷的新指標(biāo)受到關(guān)注。

肖俊輝等[1]采用RTPCR法檢測大鼠肺和膈肌組織中β-actin mRNA含量的變化并進(jìn)行半定量分析以模擬大鼠死后改變,結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩種組織中β-uctin穩(wěn)定性具有時(shí)間和空間差異性,證實(shí)mRNA也可以作為死亡時(shí)間推斷的客觀指標(biāo)。對(duì)于在同一個(gè)體不同器官組織內(nèi)RNA的降解差異，Inoue等[2]發(fā)現(xiàn)RNA在腦組織中最穩(wěn)定，死后4～7天仍能驗(yàn)出，其次為肺及心臟，肝組織內(nèi)RNA穩(wěn)定性最差。GAPDH、β-actin和18S rRNA是檢測PMI的常用指標(biāo)，降解規(guī)律在不同實(shí)驗(yàn)條件下呈現(xiàn)出不同現(xiàn)象[2-4]。而皮膚直接與外界環(huán)境接觸，被認(rèn)為易受環(huán)境影響，組織內(nèi)的RNA容易降解，然在早期死亡時(shí)間中保持穩(wěn)定[5]。潘暉等[6]認(rèn)為皮膚作為比較適合作為抽提RNA的檢材,其中β-actin與GAPDH表達(dá)水平與PMI相關(guān)性良好，可用來輔助推斷PMI。

雖然RNA降解在死亡時(shí)間推斷上有著一定的關(guān)系，但死后環(huán)境、RNA酶、pH值等對(duì)RNA的降解存在一定的影響，且因影響因素的不同，降解規(guī)律也存在著差異，為提高死亡時(shí)間的可靠性，在實(shí)際工作中推斷死亡原因需綜合考慮各種因素的影響。

2 組織來源鑒別

在交通事故案件中，特別是在涉及多輛交通工具碾壓、撞擊的情況下，現(xiàn)場及涉事交通工具上，往往留有的生物檢材過于細(xì)碎，所含DNA量或RNA量較少，以量少的檢材來鑒定其來源對(duì)于案件的分析具有重要作用。國內(nèi)外相關(guān)研究已采用定量RT-PCR技術(shù)研究針對(duì)靜脈血、唾液、精液、月經(jīng)血的特異性mRNA,將GAPDH管家基因作為內(nèi)參,對(duì)靜脈血、唾液、精液、陰道分泌物、月經(jīng)血等體液以及腦組織、骨骼肌、皮膚、脂肪等組織進(jìn)行特異性檢驗(yàn),顯示上述特異性mRNA具有組織或細(xì)胞特異性，并成功試驗(yàn)引入3個(gè)管家基因，用mRNA區(qū)分從靜脈血、唾液、精液、月經(jīng)血的復(fù)合RT-PCR分析方法來進(jìn)一步提高檢測結(jié)果的可信度[7-9]。

3 損傷時(shí)間、損傷機(jī)制推斷

用特異性mRNA鑒別出不同的體液、組織后，可根據(jù)組織、體液附著的部位，結(jié)合現(xiàn)場痕跡勘察，推斷出現(xiàn)場事故發(fā)生時(shí)各方當(dāng)事者的狀態(tài)以及事故發(fā)生的動(dòng)態(tài)變化。

細(xì)胞損傷后，機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生的新的蛋白質(zhì)以及原有蛋白質(zhì)數(shù)量的改變均與RNA有關(guān)，則存在檢測mRNA的在生物體內(nèi)的水平來推斷損傷時(shí)間的可能。有學(xué)者通過建立大鼠生前及死后的皮膚損傷模型發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)移生長因子β1 mRNA在生前皮膚損傷后0.5h上升，3h開始急劇上升，48h達(dá)到峰值，死后皮膚創(chuàng)口未見轉(zhuǎn)移生長因子β1 mRNA表達(dá)[10]，故轉(zhuǎn)移生長因子β1 mRNA可作為客觀證據(jù)輔助鑒別生前傷及死后傷。在多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)移生長因子β1 mRNA在傷后0.5h至48h隨時(shí)間發(fā)生動(dòng)態(tài)變化，在正常組織中未檢測出的細(xì)胞型連接蛋白mRNA在傷后24h內(nèi)隨時(shí)間延長而上升，纖維粘連蛋白mRNA在腦損傷后48h達(dá)到峰值[10-11]，由此可見，依據(jù)不同mRNA的表達(dá)及動(dòng)態(tài)變化在法醫(yī)學(xué)中對(duì)于損傷是否形成、損傷時(shí)間的推斷、以及不同器官的損傷特異性提供了新的依據(jù)。

4 死亡原因分析

確定死亡原因是法醫(yī)病理學(xué)的首要任務(wù)，疾病的發(fā)生和外界的刺激會(huì)導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生一系列的病理性、生理性變化，使體內(nèi)蛋白質(zhì)水平產(chǎn)生變化，mRNA也產(chǎn)生相應(yīng)的變化，故可認(rèn)為對(duì)分析死亡原因甚至死亡過程及機(jī)制有一定幫助。在交通事故的案件中，很多案件的死者體表損傷比較輕微，也沒有其他影像學(xué)檢查等證據(jù)支持，甚至有些案情比較復(fù)雜的，如撞擊后拋出車外溺水等，死亡原因的認(rèn)定就比較困難。在針對(duì)心血管疾病的研究中發(fā)現(xiàn)，microRNA在急性心肌梗死、心力衰竭、心律失常及心肌病中存在不同的表達(dá)變化[12]，為心源性猝死類案件提供分子生物學(xué)的幫助，而且由于miRNA表達(dá)的特異性及多樣性，對(duì)確定心源性猝死的心血管疾病類型也存在一定的價(jià)值。在創(chuàng)傷性腦損傷中，microRNA在大腦皮質(zhì)內(nèi)隨著時(shí)間變化有著不同程度的表達(dá)及上升[13]。這些結(jié)果都表明，通過microRNA分子的表達(dá)變化來推斷死亡原因存在一定的可行性。

5 展望

RNA作為生物標(biāo)記的分子，由于其多種獨(dú)特性，特別是microRNA，其片段小、穩(wěn)定性高、組織特異性強(qiáng)，在組織來源、死亡時(shí)間及死亡原因推斷等方面具有一定的研究價(jià)值，也可作為生物分子標(biāo)記物應(yīng)用于心源性、腦損傷等疾病的診斷。但相較于DNA，RNA容易受環(huán)境等因素影響，并且其種類繁多，在實(shí)際工作中提取、檢測等方面均存在著一定的難度。相信隨著研究的深入、技術(shù)的發(fā)展，未來RNA在法醫(yī)學(xué)鑒定中有著更為廣闊的前景。