吳麗艷，趙永旭，李慧

（1.佳和農(nóng)牧股份有限公司 長(zhǎng)沙 410016；2.浙江詩(shī)華諾倍威生物技術(shù)有限公司 杭州 310018）

豬圓環(huán)病毒病是由豬圓環(huán)病毒2 型（PCV-2）引起的豬相關(guān)疾病的總稱，主要包括斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）、豬皮炎與腎病綜合征（PDNS）和母豬繁殖性疾病等[1]。由于豬群感染PCV-2 后，機(jī)體免疫功能受到損害，并造成并發(fā)或繼發(fā)感染，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

目前對(duì)圓環(huán)疫苗的使用的效果評(píng)估耗時(shí)且難度大，常規(guī)的PCR 檢測(cè)結(jié)果并不能確診已經(jīng)發(fā)生圓環(huán)病毒病，需依據(jù)臨床癥狀、病理組織學(xué)檢查和熒光定量PCR 檢測(cè)或免疫組化（免疫熒光）三方面的結(jié)果進(jìn)行綜合診斷。Lóp e z-Soria 等人的研究表明，PCV-2病毒血癥和病毒載量的減少程度可作為評(píng)估圓環(huán)疫苗免疫保護(hù)效果的重要實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)[2-6]。采用熒光定量PCR 進(jìn)行免疫后仔豬血液中的病毒載量比較，可快速、準(zhǔn)確評(píng)估圓環(huán)疫苗的免疫效果[7]。

本試驗(yàn)通過使用不同廠家圓環(huán)疫苗對(duì)豬群進(jìn)行免疫，通過日增重、料肉比、死亡率、PCV-2 抗體水平以及仔豬血液中的病毒載量比較，評(píng)估不同圓環(huán)疫苗的實(shí)際免疫效果。通過對(duì)仔豬圓環(huán)疫苗免疫效果的評(píng)估，積累檢測(cè)數(shù)據(jù)，驗(yàn)證檢測(cè)方法，為定量檢測(cè)PCV-2 病毒載量的實(shí)際應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及材料

選擇某規(guī)模豬場(chǎng)21 日齡健康、體重相近的斷奶仔豬70 頭為試驗(yàn)動(dòng)物開展試驗(yàn)。

試驗(yàn)用疫苗：某國(guó)產(chǎn)A 廠家圓環(huán)滅活疫苗（2mL/ 頭份）。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與分組

將70 頭斷奶仔豬，隨機(jī)分為4 個(gè)組，每組10～20 頭。實(shí)驗(yàn)1組為陰性對(duì)照組，不免疫圓環(huán)疫苗；實(shí)驗(yàn)2 組在3 周齡肌注2mL圓環(huán)苗；實(shí)驗(yàn)3 組在6 周齡時(shí)肌注圓環(huán)苗2mL；實(shí)驗(yàn)4 組在3 周齡、5 周齡時(shí)分別肌注1mL圓環(huán)苗。各組除圓環(huán)苗免疫外，其他的疫苗免疫程序均按本場(chǎng)現(xiàn)有的免疫程序進(jìn)行。試驗(yàn)的具體分組情況見表1。

表1 試驗(yàn)分組及免疫程序

1.3 觀測(cè)指標(biāo)

1）免疫應(yīng)激反應(yīng)觀察：觀察仔豬在圓環(huán)疫苗免疫后的應(yīng)激反應(yīng)，包括觀察豬只的精神狀態(tài)、食欲及異常豬情況。

2）詳細(xì)記錄試驗(yàn)期間每組豬的耗料量，稱量每組豬的期初重和期末重。計(jì)算料肉比、日增重。

3）準(zhǔn)確記錄試驗(yàn)期間發(fā)病豬的頭數(shù)及其用藥治療情況，記錄死亡豬的頭數(shù)，計(jì)算死亡率。

4）抗體檢測(cè)：①采樣時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)：全部仔豬打耳號(hào)標(biāo)記，按照耳號(hào)跟蹤采血，具體采樣檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)如表2；②檢測(cè)方法：采用Synb iotic s ELISA 定量檢測(cè)PCV-2 抗體。

表2 采血時(shí)間表

5）病毒載量檢測(cè)：①采樣時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)：同抗體檢測(cè)；②檢測(cè)方法：采用LSI生產(chǎn)的q PCR 試劑盒定量檢測(cè)PCV-2 病毒載量。

1.4 記錄與數(shù)據(jù)處理

記錄下各項(xiàng)觀察指標(biāo)數(shù)據(jù)，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)對(duì)組間數(shù)據(jù)進(jìn)行差異性分析。

2 結(jié)果

2.1 抗體檢測(cè)

2.1.1 抗體滴度平均值由表3、圖1 可知，各組均呈現(xiàn)出抗體滴度下降后再上升的趨勢(shì)，在14 周齡時(shí)抗體滴度達(dá)最低。

表3 不同圓環(huán)疫苗免疫組對(duì)不同日齡豬抗體滴度平均值的影響

圖1 不同圓環(huán)疫苗免疫組對(duì)不同日齡豬抗體滴度平均值的影響

2.1.2 陽(yáng)性率由表4、圖2 可知，各組均表現(xiàn)出陽(yáng)性率先降后升的趨勢(shì)，在14 周齡時(shí)抗體陽(yáng)性率達(dá)最低點(diǎn)。

表4 不同圓環(huán)疫苗免疫組對(duì)不同日齡豬抗體陽(yáng)性率的影響

圖2 不同圓環(huán)疫苗免疫組對(duì)不同日齡豬抗體陽(yáng)性率的影響

2.1.3 離散度由表5、圖3 可知，在試驗(yàn)期各階段各組的抗體離散度高低差別較大，各組的圓環(huán)抗體水平整齊度不太理想，這與母源抗體水平及各階段的免疫、感染情況不同有很大關(guān)系。

表5 不同圓環(huán)疫苗免疫組對(duì)不同日齡豬抗體離散度的影響

2.2 病毒載量檢測(cè)

由表6 可知，除對(duì)照組18W 外，各階段病毒含量均較低，說明本場(chǎng)圓環(huán)感染壓力較小。

圖3 不同圓環(huán)疫苗免疫組對(duì)不同日齡豬抗體離散度的影響

表6 不同圓環(huán)疫苗免疫組對(duì)不同日齡病毒載量的影響

2.3 生產(chǎn)指標(biāo)與效益評(píng)估

由表7 可知，各組期初均重為7.03～7.11kg，期末均重為108.38～110.88kg，平均凈增重為101.35～103.77kg，平均日增重為0.62～0.63kg/d，平均日采食量為1.45～1.55kg/d，料肉比為2.32～2.47。各組在期初重、期末重、平均凈增重、平均日增重等指標(biāo)上均無明顯差異；在平均日采食量和料肉比上有一定優(yōu)劣。1組的平均日采食量最高，3 組的平均日采食量最低；1 組料肉比最高，4 組料肉比最低。

表7 不同圓環(huán)疫苗免疫組對(duì)生產(chǎn)性能指標(biāo)的影響

由表8 可知，1～4 組頭均總成本為2,405.66～2,448.46 元，其中1 組頭均總成本最高，3 組的頭均總成本最低。1～4 組頭均毛利潤(rùn)為1,496.02～1,569.78元，其中3組頭均毛利潤(rùn)最低，4組頭均毛利潤(rùn)最高。1～4組頭均回報(bào)率為61.81%～64.82%，其中1組頭均回報(bào)率最低，4組頭均回報(bào)率最高，因此，4組的經(jīng)濟(jì)效益最好，1組經(jīng)濟(jì)效益最差。

表8 不同圓環(huán)疫苗免疫組經(jīng)濟(jì)效益對(duì)比情況

3 討論分析

綜合圓環(huán)抗體與病毒載量檢測(cè)結(jié)果可知，整個(gè)飼養(yǎng)周期各組病毒含量均控制在較低水平，說明本場(chǎng)圓環(huán)感染壓力較小。陰性對(duì)照組在18周出現(xiàn)較高病毒血癥，說明有圓環(huán)后期感染情況的發(fā)生，這同母源抗體消失有關(guān)，與相關(guān)研究結(jié)果相符[8]。從后期的病毒血癥來看，免疫組的病毒載量明顯低于對(duì)照組。而抗體水平最低點(diǎn)出現(xiàn)的時(shí)間點(diǎn)與母源抗體水平、免疫時(shí)間及免疫次數(shù)關(guān)系密切。從對(duì)照組抗體水平來看，免疫得當(dāng)?shù)哪肛i的母源抗體可以持續(xù)至第14周齡。

試驗(yàn)結(jié)果顯示，免疫兩次的試驗(yàn)4組比免疫一次試驗(yàn)2組免疫效果好。雖然雙針免疫方案的效果肯定優(yōu)于單針免疫方案，但如果單針免疫方案的抗體可以完全或部分清除體內(nèi)的圓環(huán)病毒，使得圓環(huán)病毒的危害不表現(xiàn)出明顯臨床癥狀和損失，在生產(chǎn)數(shù)據(jù)上就會(huì)表現(xiàn)出單針免疫方案和雙針免疫方案的經(jīng)濟(jì)效益基本相當(dāng)[9]。

首免時(shí)間為6周齡的試驗(yàn)3組比首免日齡為3周齡的試驗(yàn)2組免疫效果好。因此針對(duì)母豬已免疫圓環(huán)疫苗的豬群，首免日齡需根據(jù)母抗監(jiān)測(cè)情況適度調(diào)整，高母源抗體會(huì)干擾疫苗抗體的產(chǎn)生，從而影響疫苗效果，需要根據(jù)母源抗體監(jiān)測(cè)來調(diào)整首免時(shí)間，從而減少母源抗體的干擾。

由于本場(chǎng)圓環(huán)感染壓力小，全程各組病毒血癥均低于107/m L，因此無明顯臨床癥狀，但由于陰性對(duì)照組豬群缺乏疫苗保護(hù)，在飼養(yǎng)后期18周齡時(shí)已感染PCV-2，病毒載量在105/m L左右，雖然沒有明顯臨床癥狀（明顯臨床癥狀，病毒載量需要＞107/m L），但由于隱性感染已造成生產(chǎn)成績(jī)的降低，因此料肉比最高，效益最差。

4 小結(jié)

1）本試驗(yàn)通過對(duì)不同免疫時(shí)間、免疫劑量組仔豬進(jìn)行圓環(huán)抗體和病原載量監(jiān)測(cè)，結(jié)合生產(chǎn)性能指標(biāo)分析，對(duì)本場(chǎng)的圓環(huán)免疫程序進(jìn)行了摸索，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果、生產(chǎn)數(shù)據(jù)分析以及經(jīng)濟(jì)效益評(píng)估均顯示免疫組優(yōu)于對(duì)照組，因此圓環(huán)苗的免疫對(duì)仔豬圓環(huán)的免疫保護(hù)及提高生產(chǎn)效益都是有益的。

2）因圓環(huán)免疫效果受母源抗體、首免時(shí)間、免疫次數(shù)等影響，對(duì)感染壓力不同的場(chǎng)，對(duì)種豬和商品豬圓環(huán)疫苗免疫方案的選擇也有所不同。

3）建議通過病毒血癥監(jiān)測(cè)評(píng)估豬場(chǎng)感染壓力，針對(duì)感染壓力小且無育肥豬的豬場(chǎng)，可只免母豬，商品豬不免；針對(duì)感染壓力大且有育肥豬的豬場(chǎng)，可種豬、商品豬均免。通過監(jiān)測(cè)豬場(chǎng)的圓環(huán)母源抗體水平，母源抗體水平高的話，可適當(dāng)推延首免時(shí)間，且進(jìn)行加強(qiáng)免疫。