岳陽(yáng)麗，劉翠麗，馬貴霞，賀貴天

(鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院 牙體牙髓科，河南 鄭州 450052)

齲病是一種常見(jiàn)的口腔疾病[1]。齲病的發(fā)生是脫礦與再礦化同時(shí)進(jìn)行的一個(gè)過(guò)程，如果牙齒的脫礦超過(guò)了自我調(diào)節(jié)的再礦化，就會(huì)導(dǎo)致礦物質(zhì)流失過(guò)多，從而影響牙齒的完整性[2-3]。因此，在齲病早期促進(jìn)牙齒再礦化是抑制齲病進(jìn)展的重要途徑。既往研究對(duì)促使礦物質(zhì)重新沉積到脫礦的牙本質(zhì)表面以實(shí)現(xiàn)再礦化的機(jī)制進(jìn)行了探討[4-5]。生物活性玻璃是一種獨(dú)特的生物材料，由于它在模擬體液中儲(chǔ)存時(shí)具有形成碳酸羥基磷灰石的卓越生物活性能力，因此在組織工程、骨骼再生和牙本質(zhì)再礦化領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用。生物活性玻璃的主要成分為鈉、鈣、磷元素和二氧化硅，當(dāng)與唾液或水接觸時(shí)，生物活性玻璃顆粒會(huì)將鈉、鈣和磷離子釋放到唾液中，進(jìn)而促進(jìn)牙齒表面再礦化。另一方面，生物活性玻璃可以形成與主要的牙本質(zhì)無(wú)機(jī)成分相似的磷酸鈣沉淀來(lái)阻塞牙本質(zhì)小管[3]。本實(shí)驗(yàn)采用傅里葉變換衰減全反射紅外光譜法(attenuated total reflection Fourier transform infrared spectrometer，ATR-FTIR)分析奧敏清在不同作用時(shí)間下促進(jìn)部分脫礦牙本質(zhì)表面形成羥基磷灰石的情況，并采用聚焦離子束掃描電鏡(focused ion beam scanning electron microscopy，F(xiàn)IB SEM)評(píng)估牙本質(zhì)小管的封閉情況。

1 材料與方法

1.1 主要儀器和材料奧敏清粉末(D90，北京大清生物有限公司)、氯銨T(分析純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所)、人工唾液(ISO10271，福州飛凈生物科技有限公司)、0.5 mol·L-1乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA)(PH1809，福州飛凈生物科技有限公司)、傅里葉衰減全反射變換紅外光譜儀(PerkinElmer Frontier，美國(guó))、聚焦離子束掃描電鏡雙束工作站(Zeiss/Auriga FIB SEM，德國(guó))、高真空鍍膜儀(EM ACE600，徠卡，德國(guó))、高速渦輪手機(jī)(HL11-M4/B2，桂林市啄木鳥(niǎo)醫(yī)療器械有限公司)、超聲清洗機(jī)(220V-240VAC 50/60Hz)、恒溫水浴箱(SHH.W21 Cr.600，北京長(zhǎng)安科學(xué)儀器廠)、毛刷(大號(hào)，TPC，東莞立港醫(yī)療器械有限公司)。

1.2 樣本的制備征得鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院口腔頜面外科就診患者同意后，收集35顆被拔除的無(wú)白斑、齲壞及裂紋、發(fā)育正常的新鮮離體人第三磨牙。將牙齒儲(chǔ)存在4 ℃氯銨T溶液中，儲(chǔ)存時(shí)間短于1個(gè)月。使用高速金剛砂車針在釉牙骨質(zhì)界上方1.0 mm處以垂直于牙體長(zhǎng)軸的方向制備厚度約為1.0 mm的牙本質(zhì)盤，并用1 000目碳化硅砂紙打磨拋光，使其形成平整、光滑、統(tǒng)一的平面，超聲蒸餾水蕩洗10 min去除玷污層，用指甲油標(biāo)記牙髓面。其中30個(gè)牙本質(zhì)盤浸入0.5 mol·L-1EDTA中處理30 min進(jìn)行脫礦，用去離子水徹底沖洗樣品，剩余5個(gè)未做脫礦處理。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組與處理未進(jìn)行脫礦的5個(gè)樣本為健康牙本質(zhì)組，將經(jīng)0.5 mol·L-1EDTA脫礦處理的30個(gè)樣本按隨機(jī)數(shù)表法分為6組，每組5個(gè)：部分脫礦組、A組、B組、C組、D組、空白對(duì)照組(E組)。健康牙本質(zhì)組和部分脫礦組直接檢測(cè)。A、B、C、D 4組均用小毛刷蘸取奧敏清粉末25 mg涂抹樣本牙合面，于10：00、18：00各涂抹1次，涂抹2 min后用蒸餾水徹底沖洗樣本，其余時(shí)間將樣本浸入盛有人工唾液的試管中，將其保存在37 ℃的恒溫水浴箱中，每24 h更換1次新鮮的人工唾液。A、B、C、D組分別連續(xù)處理1、4、7、14 d，E組不做涂抹處理，僅放置于人工唾液中14 d。

1.5 FIB SEM檢測(cè)每組剩下的3個(gè)樣本在干燥器中干燥，并用真空鍍膜儀噴鉑，用導(dǎo)電膠粘固。采用FIB SEM在5 kV下觀察樣本表面形態(tài)。

2 結(jié)果

2.1 FIB SEM結(jié)果健康牙本質(zhì)組的牙本質(zhì)小管直徑較小，部分小管開(kāi)放，部分管內(nèi)有阻塞物；部分脫礦組牙本質(zhì)表面清潔光滑，牙本質(zhì)小管完全開(kāi)放，邊界清楚，小管內(nèi)未見(jiàn)任何玷污層；A組牙本質(zhì)表面欠光滑，有少量沉積物覆蓋于牙本質(zhì)表面和牙本質(zhì)小管，牙本質(zhì)小管絕大部分依然開(kāi)放，管內(nèi)未見(jiàn)阻塞物； B組牙本質(zhì)表面粗糙，覆蓋于牙本質(zhì)表面和牙本質(zhì)小管的沉積物增多但結(jié)構(gòu)松散，牙本質(zhì)小管直徑縮小，內(nèi)部可見(jiàn)顆粒物，堵塞程度加??；C組覆蓋于牙本質(zhì)表面和牙本質(zhì)小管的沉積物進(jìn)一步增多，大部分牙本質(zhì)小管被顆粒狀物質(zhì)阻塞，顆粒物與牙本質(zhì)小管之間連接較緊密，無(wú)縫隙；D組牙本質(zhì)表面沉積物有序排列，形成多個(gè)鱗片狀沉積物，相互之間連接非常緊密，完全覆蓋整個(gè)牙本質(zhì)小管，僅剩微微可見(jiàn)的牙本質(zhì)小管輪廓；E組牙本質(zhì)表面與人工唾液浸泡前相比形貌未見(jiàn)明顯變化，牙本質(zhì)小管依然完全開(kāi)放，邊界清晰可見(jiàn)。健康牙本質(zhì)組、部分脫礦組、A組、B組、C組、D組和E組的FIB SEM的結(jié)果如圖1所示。

圖1 不同處理組牙本質(zhì)表面形態(tài)掃描電鏡圖像

圖2 不同處理組ATR-FTIR結(jié)果

3 討論

綜上所述，生物活性玻璃奧敏清在牙本質(zhì)表面形成新的沉積物進(jìn)而封閉牙本質(zhì)小管是一個(gè)漸進(jìn)積累的過(guò)程，奧敏清處理14 d可以達(dá)到良好的小管封閉和再礦化效果。