胡凌云，寧靜，李愛玲，李亞里，游艷琴*

1解放軍總醫(yī)院第一醫(yī)學(xué)中心婦產(chǎn)科，北京 100853；2解放軍總醫(yī)院海南醫(yī)院婦產(chǎn)科，海南三亞 572013；3軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院儀器中心，北京 100850

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一，全球每年新診斷約23.9萬例卵巢癌患者，且每年15.2萬例患者死于卵巢癌[1]。卵巢惡性腫瘤種類較多，其中漿液性腫瘤約占1/4[2]，約70%的患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已屬晚期，盡管手術(shù)、放療、化療、靶向治療等治療方法不斷改進(jìn)，但患者的5年生存率僅從37%上升到46%。CUE結(jié)構(gòu)域蛋白2(CUE domain containing 2，CUEDC2)在乳腺癌組織中高表達(dá)，在分子水平的研究發(fā)現(xiàn)CUEDC2基因是乳腺癌的耐藥基因[3]，而卵巢癌和乳腺癌均為雌孕激素相關(guān)的惡性腫瘤，因此，本研究采用免疫組化的方法檢測(cè)CUEDC2在漿液性卵巢癌中的表達(dá)情況，并初步探討其是否與雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)的表達(dá)具有相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 樣本來源及主要試劑 收集2005年1月－2011年7月因原發(fā)性卵巢癌在解放軍總醫(yī)院第一醫(yī)學(xué)中心婦產(chǎn)科行手術(shù)治療的75例患者作為病例組，術(shù)后均經(jīng)病理檢查診斷為卵巢漿液性囊腺癌。納入標(biāo)準(zhǔn)：①為原發(fā)性卵巢癌患者，且術(shù)后病理提示為卵巢漿液性囊腺癌；②術(shù)前均未行化療、放療及靶向治療等；③術(shù)后均進(jìn)行了規(guī)范的化療、放療、靶向治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①轉(zhuǎn)移性卵巢癌；②存在高血壓、糖尿病等合并癥。根據(jù)卵巢癌二元論，對(duì)照組為未受腫瘤累及的輸卵管傘端組織切片，共20例。CUEDC2抗體由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院儀器中心提供，二抗、封閉液、二抗增強(qiáng)劑、DAB顯色劑均購自北京中杉金橋公司。

1.2 方法 回顧性分析75例卵巢癌患者的一般資料，并進(jìn)行術(shù)后隨訪，統(tǒng)計(jì)患者的年齡、血清CA-125水平、國際婦產(chǎn)科協(xié)會(huì)(FIGO)分期、病理分級(jí)、ER表達(dá)、PR表達(dá)、無病生存期(disease-free survival，DFS)及總生存期(overall survival，OS)。將病理分級(jí)分為高分化、中分化及低分化。按FIGO分期分為Ⅰ-Ⅳ期，其中Ⅰ期與Ⅱ期為早期卵巢癌，Ⅲ期與Ⅳ期為晚期卵巢癌。采用免疫組化方法進(jìn)行常規(guī)CUEDC2染色，于顯微鏡下閱片。評(píng)分方法：在40倍鏡下閱片，評(píng)估全部癌組織及正常組織在整張切片下所占的面積，強(qiáng)度分為4級(jí)，3分顯色為棕褐色，2分顯色為棕黃色，1分顯色為黃色，0分為無著色，總分=3分×相對(duì)應(yīng)腫瘤面積的百分?jǐn)?shù)+2分×相對(duì)應(yīng)腫瘤面積的百分?jǐn)?shù)+1分×相對(duì)應(yīng)腫瘤面積的百分?jǐn)?shù)。評(píng)分由兩位病理科醫(yī)師進(jìn)行，以避免誤差。

1.3 CUEDC2表達(dá)與漿液性卵巢癌臨床病理特征的相關(guān)性分析 分析CUEDC2表達(dá)與卵巢癌患者年齡、病理分級(jí)、ER表達(dá)、PR表達(dá)、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，篩選出與CUEDC2陽性相關(guān)的臨床特征。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以±s表示，計(jì)數(shù)資料以例(%)表示。病例組與對(duì)照組中CUEDC2的表達(dá)情況，以及CUEDC2在不同年齡、病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的表達(dá)差異比較采用χ2檢驗(yàn)；卵巢癌各個(gè)分期、各個(gè)病理分級(jí)間CUEDC2的表達(dá)情況比較采用秩和檢驗(yàn)；CUEDC2表達(dá)與ER、PR的相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析；對(duì)CUEDC2陽性、陰性表達(dá)的患者進(jìn)行生存分析，采用log-rank檢驗(yàn)分析其DFS及OS是否具有差異。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 病例組患者的基本資料 75例卵巢癌患者年齡(52.7±11.1)歲，其中病理分級(jí)為低分化者61例，中分化者10例，高分化者4例。低分化者CA-125水平平均為814.4 U/ml，中分化者為1189.8 U/ml，高分化者為596.1 U/ml。75例患者中FIGO分期Ⅰ期15例，Ⅱ期11例，Ⅲ期42例，Ⅳ期7例，其中Ⅰ期患者血清CA-125水平平均為183.1 U/ml，Ⅱ期患者為407.9 U/ml， Ⅲ期患者為1160.9 U/ml，Ⅳ期患者為988.0 U/ml，晚期卵巢癌患者的CA-125水平明顯高于早期患者。

2.2 病例組及對(duì)照組CUEDC2的表達(dá)情況 兩組標(biāo)本行免疫組化染色后，對(duì)CUEDC2表達(dá)情況進(jìn)行評(píng)分，結(jié)果顯示，病例組的評(píng)分(1.69±0.67)明顯高于對(duì)照組(0.99±0.44，P<0.05)。此外，F(xiàn)IGO分期Ⅰ期患者評(píng)分為1.35±0.60，Ⅱ期評(píng)分為1.54±0.57，Ⅲ期評(píng)分為1.78±0.71，Ⅳ期評(píng)分為2.13±0.27，CUEDC2評(píng)分隨卵巢癌分期的增加而升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，圖1)。早期卵巢癌組共26例，晚期卵巢癌組共49例。早期卵巢癌患者CUEDC2表達(dá)評(píng)分(1.43±0.58)明顯低于晚期卵巢癌患者(1.83±0.68，P<0.05)。低分化組CUEDC2評(píng)分為1.66±0.66，中分化組為1.78±0.79，高分化組為1.87±0.78，3組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖1 CUEDC2在各病理分期漿液性卵巢癌組織中的表達(dá)Fig.1 The expression of CUEDC2 in primary serous ovarian cancer

2.3 漿液性卵巢癌中CUEDC2的表達(dá)與ER、PR的相關(guān)性 在75例漿液性卵巢癌患者標(biāo)本中，有67例進(jìn)行了PR、ER免疫組化染色。CUEDC2陽性表達(dá)的53份組織標(biāo)本中，PR陰性表達(dá)24份，陽性表達(dá)29份；ER陰性表達(dá)22份，陽性表達(dá)31份。相關(guān)分析顯示，CUEDC2的表達(dá)與ER、PR的表達(dá)均無相關(guān)性(r=-0.0785、r=0.0111，表1)。

表1 漿液性卵巢癌組織中CUEDC2表達(dá)與ER、PR的關(guān)系Tab.1 Relationship of the expression of CUEDC2 to ER and PR in serous ovarian carcinoma

2.4 CUEDC2表達(dá)與漿液性卵巢癌臨床病理特征的相關(guān)性 相關(guān)分析顯示，CUEDC2表達(dá)僅與FIGO分期有關(guān)(P=0.01)，與患者年齡、病理分級(jí)、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)性(表2)。

2.5 CUEDC2表達(dá)與漿液性卵巢癌患者生存期的關(guān)系 統(tǒng)計(jì)病例組患者的DFS及OS，其中有3例失訪，失訪率為4.05%。CUEDC2陽性患者的中位DFS為32.6個(gè)月，中位OS為54.3個(gè)月，而CUEDC2陰性患者的中位DFS為51.9個(gè)月，中位OS為63.5個(gè)月。CUEDC2陽性組及陰性組的OS差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而CUEDC2陽性組的DFS短于CUEDC2陰性組(P<0.05，圖2、3)。

表2 CUEDC2表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系分析Tab.2 Relationship between expression of CUEDC2 and clinical index

圖2 CUEDC2表達(dá)與總生存期的關(guān)系Fig.2 Relationship of CUEDC2 expression and the overall survival

圖3 CUEDC2表達(dá)與無病生存期的關(guān)系Fig.3 Relationship of CUEDC2 expression and the diseasefree survival

3 討 論

卵巢癌是一種多基因參與的婦科惡性腫瘤，病死率高，除早期癥狀隱匿及腫瘤家族史外[4-7]，患者對(duì)化療藥物的反應(yīng)是否敏感也是一個(gè)重要因素。國內(nèi)外研究報(bào)道，在乳腺癌、肝癌、膽囊癌等組織中CUEDC2呈高表達(dá)[8-10]。因乳腺癌是ER陽性的惡性腫瘤，而漿液性卵巢癌的ER陽性率也明顯高于良性漿液性卵巢腫瘤[11]，因此，本研究采用免疫組化的方法檢測(cè)了75例漿液性卵巢癌患者標(biāo)本中的CUEDC2表達(dá)情況，結(jié)果顯示，漿液性卵巢癌組織的CUEDC2表達(dá)(1.69±0.67)明顯高于對(duì)照組(0.99±0.44)，考慮CUEDC2的編碼基因在卵巢癌發(fā)生發(fā)展過程中可能被異常激活，從而導(dǎo)致CUEDC2在漿液性卵巢癌組織中大量堆積。本研究發(fā)現(xiàn)，漿液性卵巢癌組織中的CUEDC2蛋白表達(dá)明顯增多，其表達(dá)量隨腫瘤分期的增加而升高，且晚期表達(dá)量明顯高于早期。此外，CUEDC2陽性患者DFS明顯短于陰性組，說明CUEDC2可能是漿液性卵巢癌的早期指標(biāo)，其表達(dá)量越高，則復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)越大，預(yù)后也較差。但是，CUEDC2能否成為診斷卵巢癌的早期指標(biāo)仍需更多臨床數(shù)據(jù)進(jìn)一步驗(yàn)證。

流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，卵巢癌的病因、發(fā)病機(jī)制及進(jìn)展在很大程度上依賴于雌激素的活性[12-13]。但本研究結(jié)果顯示，CUEDC2的表達(dá)與ER、PR并無相關(guān)性。既往研究顯示，CUEDC2可通過泛素-蛋白酶體途徑促進(jìn)孕激素誘導(dǎo)的PR降解[14]，還可下調(diào)ER-α的表達(dá)[3]。但本研究結(jié)果與CUEDC2蛋白堆積導(dǎo)致ER或PR泛素化降解的相關(guān)理論并不相符，考慮原因有兩個(gè)：一是樣本量較小，仍需更多臨床數(shù)據(jù)支持來明確CUEDC2與ER、PR表達(dá)有無相關(guān)性；二是漿液性卵巢癌與乳腺癌的CUEDC2蛋白堆積理論并不一致，應(yīng)在多個(gè)層面對(duì)其發(fā)病機(jī)制進(jìn)行探討。

雖然文獻(xiàn)[15-16]報(bào)道CUEDC2在多種惡性腫瘤中的表達(dá)差異較大，且參與了Warburg效應(yīng)，本研究也證實(shí)CUEDC2在卵巢癌中呈高表達(dá)，但其在腫瘤發(fā)生中的作用仍有待進(jìn)一步探討。CUEDC2存在多種信號(hào)通路的作用機(jī)制，如通過核因子-κB信號(hào)通路調(diào)控炎癥[17]、通過JAK1/STAT3信號(hào)通路調(diào)控免疫逃逸[18]、通過miR324-5p-CUEDC2軸調(diào)控炎 癥[19]，以及參與細(xì)胞周期調(diào)控[20]等。本研究?jī)H檢測(cè)了CUEDC2在漿液性卵巢癌中的表達(dá)情況，并初步探討了其是否與ER、PR表達(dá)相關(guān)，下一步仍需在細(xì)胞水平及動(dòng)物水平方面進(jìn)行繼續(xù)擴(kuò)大樣本量深入研究，以進(jìn)一步明確CUEDC2與卵巢癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。