王 偉，張曉麗，李姍姍

（上海應(yīng)用技術(shù)大學(xué) 香料香精技術(shù)與工程學(xué)院，上海 201418）

蜂花粉是蜜蜂從植物花朵的雄蕊上采集而來的微細粉末。蜂花粉可根據(jù)其粉源植物不同分為油菜花粉、玉米花粉、茶花粉、荷花粉、葵花粉、蕎麥花粉等，也包括中草藥花粉，如五倍子花粉、金銀花花粉和蒲黃花粉等，其中油菜花粉是我國最大宗的蜂花粉，全國各地均有生產(chǎn)。已有研究發(fā)現(xiàn)蜂花粉中富含功能性多糖、氨基酸類、黃酮類、多酚類、不飽和脂肪酸和維生素等具有生物活性的天然產(chǎn)物［1］，具有抑制癌癥［2］、降低血脂［3］和增強免疫功能［4］等多種功效。

多酚和黃酮類物質(zhì)具有抗氧化的作用，蜂花粉因其多酚和黃酮含量豐富，被認為是一種天然的抗氧化活性物質(zhì)。不同種類蜂花粉的抗氧化活性成分存在差異，有研究發(fā)現(xiàn)油菜花粉抗氧化成分最高［5］，已在體外實驗中證實具有更好的抗氧化活性［1，6-7］。然而，其在體的抗氧化作用目前尚不清楚。

蜂花粉經(jīng)破壁處理后，花粉內(nèi)含的豐富營養(yǎng)成分得以充分釋放，經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)破壁處理可以使總黃酮和黃酮類化合物（原花青素、蘆丁、山奈酚、異鼠李素、蕓香甙等）及其它活性成分的生物利用度明顯提升［8］。目前，基于破壁油菜花粉的功效研究主要關(guān)注其提取工藝及體外的抗氧化功能，鮮有探討其在體的抗氧化作用。本文以自然衰老小鼠作為動物模型，探討不同劑量破壁油菜花粉對小鼠血清丙二醛MDA 水平和超氧化物歧化酶SOD 活性的影響，明確破壁油菜花粉的在體抗氧化功能及其最低起效劑量，為研發(fā)基于破壁油菜花粉保健產(chǎn)品提供實驗依據(jù)。

1 實驗材料和儀器

1.1 材 料

破壁油菜花粉購于北京市福樂康蜜蜂科技有限公司，破壁率為98.2%，經(jīng)中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所鑒定，符合GH/T 1014中油菜花粉的形態(tài)及特征。SOD 活性和MDA 含量測定試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.2 設(shè) 備

電子分析天平、半自動生化測定儀、低溫離心機、恒溫水浴箱等。

1.3 實驗動物

健康3月齡昆明雌性小鼠10 只，體重（20±2）g；健康 12月齡昆明雌性小鼠 60 只，體重（50±2）g。適應(yīng)飼養(yǎng)1周后開始實驗。實驗動物購于湖南斯萊克景達實驗動物有限公司。

2 實驗方法

2.1 分組與給藥

3月齡昆明小鼠10只作為青年對照組。12月齡小鼠60只隨機分為6組，每組10只，其中1組為老年對照組，5組為油菜花粉給藥組。對照組小鼠灌胃生理鹽水，給藥組分別按70、140、280、560、1 120 mg/kg.BW 劑量灌胃油菜花粉混懸液，每天按10 mLl/kg.BW 的灌胃容積經(jīng)口灌胃給藥，連續(xù)灌胃30 d。

2.2 指標(biāo)測定

灌胃第30 d，灌胃前小鼠禁食不禁水16 h，末次灌胃后1 h，各組小鼠眼眶取血，離心獲得血清。根據(jù)SOD和MDA試劑盒的操作步驟，檢測小鼠血清中SOD活性和MDA含量。

2.3 統(tǒng)計方法

應(yīng)用SPSS17.0 軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，實驗數(shù)據(jù)用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，應(yīng)用方差分析方法，其中P＜0.05表明差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 實驗結(jié)果

實驗結(jié)果如表1所示。與青年對照組相比，老齡小鼠血清SOD活性顯著降低，血清MDA含量顯著升高。灌胃破壁油菜花粉30 d 后，140、280、560、1 120 mg/kg.BW劑量組小鼠血清SOD活性顯著升高。80、560、1 120 mg/kg.BW 劑量組小鼠血清MDA含量明顯降低。

表1 破壁油菜花粉對小鼠血清SOD活性、MDA含量的影響Tab.1 Effects of wall-broken rape pollens on SOD activity and MDA content in mice

4 討 論

機體自由基的形成可以引起氧毒性，機體的活性氧和自由基與細胞的氧化還原調(diào)節(jié)有關(guān)，細胞可以通過清除過氧自由基和抑制脂質(zhì)過氧化進行調(diào)節(jié)，已有研究證實機體的衰老和器官損傷與細胞的氧化還原調(diào)節(jié)功能紊亂、自由基堆積相關(guān)［9］。SOD 是體內(nèi)機體重要的抗氧化酶，能夠通過阻止鐵離子被超氧化物還原起到抑制自由基反應(yīng)及其導(dǎo)致的氧化損傷［10］。脂質(zhì)過氧化是自由基介導(dǎo)細胞損傷的一個重要步驟，MDA是過量活性氧誘導(dǎo)脂質(zhì)過氧化的副產(chǎn)物，被廣泛用作氧化應(yīng)激的生物標(biāo)志物［11］。測定SOD活性可以反映機體衰老狀況，血清中MDA含量變化可以間接反映自由基的產(chǎn)生以及膜損傷程度。因此，SOD 活性和MDA含量通常作為在體抗氧化性的重要指標(biāo)［12］。

實驗發(fā)現(xiàn)，與青年組小鼠相比，老年組小鼠血清SOD 活性以及MDA 含量存在明顯差異（P＜0.05），驗證了SOD 的活性隨著年齡的增長而下降。老年小鼠機體內(nèi)脂質(zhì)過氧化損傷的水平高于青年小鼠，反映自然衰老后抗氧化的能力降低，與文獻報道的結(jié)論一致［13-15］。

自然衰老小鼠灌胃破壁油菜花粉30 d后，140 mg/kg.BW 及以上給藥濃度的劑量組小鼠血清SOD活性顯著升高（P＜0.05），血清MDA含量明顯降低（P＜0.05），表明當(dāng)破壁油菜花粉給藥劑量超過140 mg/kg.BW 時，對自然衰老小鼠顯示出抗氧化作用。

5 結(jié) 論

油菜花粉中已發(fā)現(xiàn)含有黃酮、多酚等多種抗氧化物質(zhì)。本文研究了破壁油菜花粉的在體抗氧化性及破壁油菜花粉的劑量和抗氧化性的量效關(guān)系。將小鼠分為青年對照組、老年對照組和5個劑量組。與青年對照組相比，老年對照組的小鼠SOD活性和血清MDA水平有明顯變化，證實衰老后抗氧化能力降低。自然衰老小鼠灌胃破壁油菜花粉30 d 后，劑量超過140 mg/kg.BW 時，血清SOD 活性顯著升高，血清MDA 含量明顯降低，證明破壁油菜花粉具有優(yōu)良的體內(nèi)抗氧化作用，是一種具有潛力的保健食品，并且通過實驗研究明確了破壁油菜花粉的抗氧化作用的起效劑量。破壁油菜花粉對血清、臟器組織中其他抗氧化指標(biāo)的影響，以及人體服用安全性與保健功效還有待于進一步深入研究。