不同病程糖尿病周圍神經(jīng)病變不同模型大鼠的神經(jīng)病變相關(guān)指標(biāo)的比較研究

尹燁淋 王麗

摘要：為了探究常見(jiàn)糖尿病周圍神經(jīng)病變模型大鼠不同病程的神經(jīng)病變相關(guān)指標(biāo)的變化。采用數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行相關(guān)文獻(xiàn)的檢索，總結(jié)整理相關(guān)指標(biāo)數(shù)據(jù)并進(jìn)行比較研究。從而發(fā)現(xiàn)SD大鼠的神經(jīng)病變相關(guān)指標(biāo)的改變更早于Wistar大鼠和自發(fā)性糖尿病大鼠，故SD大鼠更適合作為糖尿病周圍神經(jīng)病變的模型大鼠用于實(shí)驗(yàn)研究。

關(guān)鍵詞：糖尿病周圍神經(jīng)病變;SD大鼠;Wistar大鼠;自發(fā)性糖尿病大鼠

中圖分類號(hào)：R587.1?文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A?文章編號(hào)：1007-2349（2021）01-0087-07

糖尿病周圍神經(jīng)病變（Diabetic Peripheral Neuropathy，DPN）是指周圍神經(jīng)功能障礙，包含脊神經(jīng)、顱神經(jīng)及植物神經(jīng)病變，為糖尿病常見(jiàn)并發(fā)癥之一，其臨床表現(xiàn)為肢體疼痛、麻木、感覺(jué)異常等[1]，其進(jìn)一步發(fā)展可引起壞疽，甚至發(fā)展為非創(chuàng)傷性截肢[2]，故而通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究探討DPN的治療和轉(zhuǎn)歸有著重要意義。目前在DPN相關(guān)實(shí)驗(yàn)中最常見(jiàn)的模型大鼠分別是腹腔注射鏈脲佐菌素（Streptozotocin，STZ）的兩類糖尿病大鼠：SD大鼠和Wistar大鼠，以及自發(fā)性糖尿病大鼠。根據(jù)2014年EASD學(xué)組[3]建議，可以從以下四方面描述DPN模型大鼠：行為學(xué)、神經(jīng)功能、生物標(biāo)記物以及神經(jīng)結(jié)構(gòu)。本研究旨在總結(jié)不同病程的上述三種DPN模型大鼠的上述四個(gè)方面指標(biāo)的變化特點(diǎn)。

1?實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型

糖尿病大鼠常用的模型分為三類：一類是通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的全部或部分切除，引起其胰島素缺乏而建立;第二類是通過(guò)化學(xué)藥物損傷其胰島功能建立的;第三類是自發(fā)性糖尿病動(dòng)物[4]。對(duì)于上述三類模型，第一類已經(jīng)很少建立，最常見(jiàn)的是第二類和第三類模型的建立。本研究將最近4年，可于CNKI以及PUBMED文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)通過(guò)檢索詞：“糖尿病周圍神經(jīng)病變 大鼠”檢索到的關(guān)于DPN模型大鼠的具有特征性的研究進(jìn)行整理，對(duì)相關(guān)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)常用的大鼠：SD大鼠、Wistar大鼠以及自發(fā)性糖尿病大鼠的相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行總結(jié)分析。

2?實(shí)驗(yàn)性糖尿病模型大鼠相關(guān)數(shù)據(jù)的匯總

2.1?實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠及造模方法

2.1.1?Wistar大鼠與SD大鼠的介紹?1Wistar大鼠為白色封閉群大鼠，1970年育成，是生物醫(yī)學(xué)研究的大鼠歷史最長(zhǎng)的品系[5]。脾性溫順，抵御傳染病能力較強(qiáng)，目前該品系常應(yīng)用于神經(jīng)-內(nèi)分泌實(shí)驗(yàn)研究[6]。

2SD大鼠為白色封閉群大鼠，1925年用Wistar 大鼠培育而成，其特點(diǎn)為：生育多，成長(zhǎng)較Wistar大鼠快[5]。目前已應(yīng)用于生命科學(xué)研究，尤其在藥理學(xué)、營(yíng)養(yǎng)學(xué)、分泌學(xué)、腫瘤學(xué)方面應(yīng)用最為廣泛。研究發(fā)現(xiàn)，SD大鼠的神經(jīng)系統(tǒng)與人類相似，故常應(yīng)用于高級(jí)神經(jīng)活動(dòng)相關(guān)的研究[6]，可見(jiàn)在DPN的模型建立上，SD大鼠更具優(yōu)勢(shì)。

2.1.2?造模方法?STZ是一種廣譜抗菌素，其對(duì)胰島β細(xì)胞具有高度選擇性的毒性而致其發(fā)生糖尿病。由于STZ對(duì)組織毒性較小，故動(dòng)物存活生存率高，是全球常用的制造糖尿病動(dòng)物的造模方法[7]。1型糖尿病與2型糖尿病的大鼠建模方式：（1）1型糖尿?。和ㄟ^(guò)一次性注射大劑量的STZ，建立的大鼠模型與人類1型糖尿病相似[8]。有研究表明注射50mg/kg的STZ是建立1型糖尿病大鼠模型的最佳選擇[9]。（2）2型糖尿病：通過(guò)高糖高脂飲食誘導(dǎo)大鼠產(chǎn)生胰島素抵抗后，再注射STZ損傷其胰島功能，引起血糖升高，從而模擬2型糖尿病的發(fā)展過(guò)程進(jìn)行造模。有研究表明，SD大鼠經(jīng)過(guò)高糖高脂飲食后，質(zhì)量較正常大鼠增加，胰島素敏感指數(shù)較正常飲食大鼠顯著下降，同時(shí)空腹血糖、血清總膽固醇、甘油三酯、游離脂肪酸水平較普通飼料組大鼠明顯升高增加，這幾項(xiàng)指標(biāo)可以間接反映胰島素敏感性下降，而有實(shí)驗(yàn)表明經(jīng)過(guò)4周高糖高脂飲食可以誘導(dǎo)出較為理想的胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)，從而模擬人類2型糖尿病的發(fā)病特點(diǎn)[10]。

2.2?SD大鼠?對(duì)于STZ誘導(dǎo)的DPN模型大鼠通過(guò)上述建模方式可分為自由攝食飲水的大鼠（即與1型糖尿病相似）和高脂飼料喂養(yǎng)的大鼠（即與2型糖尿病相似）。筆者以SD大鼠為代表，通過(guò)上述分類方法進(jìn)行陳述。

2.2.1?自由攝食飲水的大鼠和高脂飼料喂養(yǎng)的大鼠的造模方法及成模標(biāo)準(zhǔn)?自由攝食飲水的大鼠：造模前禁食12 h，按體重腹腔注射給予65 mg/kg 1%STZ（亦有70 mg/kg），自由攝食飲水48～72 h（72 h居多）經(jīng)尾靜脈采血測(cè)空腹血糖，空腹血糖≥16.7 mmol/L為造模成功[11-13]。

高脂飼料誘導(dǎo)的大鼠：高脂飼料喂養(yǎng)4周（亦有2周或8周，且8周者居多），禁食12 h，自由飲水，于大鼠腹腔以35 mg/kg（亦有40 mg/kg）單次注射2%的STZ，用藥后72 h，于尾尖處取血測(cè)空腹血糖，空腹血糖≥16.7 mmol/L即為造模成功[14-18]。

2.2.2?神經(jīng)功能實(shí)驗(yàn)?神經(jīng)傳導(dǎo)速度（nerve conduction velocity，NCV）主要反映神經(jīng)髓鞘功能，主要代表大的有髓纖維的功能。NCV包括運(yùn)動(dòng)神經(jīng)傳導(dǎo)速度（motor nerve conduction velocity，MNCV）和感覺(jué)神經(jīng)傳導(dǎo)速度（sensory nerve conduction velocity，SNCV）。MNCV出自α-運(yùn)動(dòng)神經(jīng)纖維，SNCV出自本體感覺(jué)Aα纖維。一般大鼠的電生理檢查多采用坐骨神經(jīng)，且本研究檢索的文獻(xiàn)均采用坐骨神經(jīng)。坐骨神經(jīng)為混合神經(jīng)，包括運(yùn)動(dòng)和感覺(jué)神經(jīng)纖維。作為DPN實(shí)驗(yàn)研究中最常用的觀察指標(biāo)，MNCV和SNCV分別反映l運(yùn)動(dòng)和感覺(jué)纖維的功能[4]。

本研究檢索的文獻(xiàn)均闡述的為下肢NCV的變化，并未有上下肢對(duì)比的相關(guān)數(shù)據(jù)的闡述，且沈祥峰等人的研究并未詳細(xì)闡明部位。數(shù)據(jù)總結(jié)如下：

普通飼料組：莫霏霏[11]研究發(fā)現(xiàn)，在造模后1周即出現(xiàn)MNCV的減慢，且有顯著差異，并持續(xù)到第4周末。焦洋[12]研究發(fā)現(xiàn)，在造模后2周開始，MNCV出現(xiàn)顯著下降，直到第8周末仍呈下降趨勢(shì)。沈祥峰[19]等人研究發(fā)現(xiàn)，在造模后12周MNCV減慢，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，并逐漸減慢到第24周。

高脂飼料組：呂翠巖等[15]研究發(fā)現(xiàn)，在造模后4周，MNCV開始顯著降低，并持續(xù)到第16周。王小康[14]研究發(fā)現(xiàn)，在造模后8周，MNCV極顯著性減慢。SNCV明顯減慢。李道衛(wèi)[17]研究發(fā)現(xiàn)，在造模后8周，MNCV明顯降低。汪碧澄[18]研究發(fā)現(xiàn)，在造模后12周，MNCV明顯降低。

2.2.3?行為學(xué)實(shí)驗(yàn)?行為學(xué)實(shí)驗(yàn)主要觀察的指標(biāo)為熱痛敏和機(jī)械痛覺(jué)的異常。主要反映了無(wú)髓纖維和小的有髓纖維的功能。糖尿病周圍神經(jīng)系統(tǒng)損傷極早期受累的多為無(wú)髓及有髓的感覺(jué)小纖維和自主神經(jīng)小纖維，而傳統(tǒng)的NCV無(wú)法實(shí)現(xiàn)對(duì)其測(cè)定[4]。

2.2.3.1?熱痛敏測(cè)定實(shí)驗(yàn)?大鼠背根神經(jīng)節(jié)中的感覺(jué)神經(jīng)元發(fā)出的小神經(jīng)纖維在疼痛的傳遞中起作用[11]。熱覺(jué)受體散布于無(wú)髓C纖維，熱痛覺(jué)較大部分由C類神經(jīng)纖維傳導(dǎo)，同時(shí)也波及到Aδ類神經(jīng)纖維。熱痛閾值反映了大鼠對(duì)熱痛的敏感性，與無(wú)髓神經(jīng)纖維軸突直徑正相關(guān)[4]。常用的熱痛敏測(cè)定方法包括甩尾實(shí)驗(yàn)和熱板實(shí)驗(yàn)。甩尾實(shí)驗(yàn)通常通過(guò)觀察甩尾反應(yīng)潛伏期（Tail Flick Latency，TFL）或擺尾溫度閾值作為標(biāo)準(zhǔn)，而熱板實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察熱縮足反射潛伏期（Thermal Withdrawal Latency，TWL）來(lái)衡量。

普通飼料組：莫霏霏[11]研究發(fā)現(xiàn)，在造模后1周開始擺尾溫度閾值增加，且呈緩慢上升趨勢(shì)，并持續(xù)到第4周末。焦洋[12]研究發(fā)現(xiàn)，在造模后2周開始TFL和TWL出現(xiàn)顯著縮短，并持續(xù)到造模后8周且呈進(jìn)行性加重。

高脂飼料組：王小康[14]研究發(fā)現(xiàn)，在造模后4周，熱痛敏反應(yīng)沒(méi)有明顯變化，8周后明顯降低。李道衛(wèi)[17]研究發(fā)現(xiàn)，在造模后8周，擺尾溫度閾值明顯增高。

2.2.3.2?機(jī)械痛覺(jué)實(shí)驗(yàn)?常用的機(jī)械痛覺(jué)實(shí)驗(yàn)為Von Frey絲實(shí)驗(yàn)，其一般通過(guò)觀察機(jī)械痛縮足閾值（Paw Withdrawl Mechanical Threshold，PWMT）來(lái)作為標(biāo)準(zhǔn)。

普通飼料組：焦洋[12]研究發(fā)現(xiàn)，在造模后2周出現(xiàn)顯著降低，并持續(xù)到造模后8周且呈進(jìn)行性加重。

高脂飼料組：汪碧澄[18]研究發(fā)現(xiàn)，在造模后12周，PMWT水平明顯降低。

通過(guò)上述兩種實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)結(jié)果，可以看出小的神經(jīng)纖維的改變與大的神經(jīng)纖維的改變并沒(méi)有明確闡述兩者出現(xiàn)的先后順序。

2.2.4?生物標(biāo)記物?由于目前DPN的發(fā)病機(jī)制尚不明確，有多種機(jī)制學(xué)說(shuō)，包括代謝毒性、血管性、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子缺乏、氧化應(yīng)激等[20]。因此其相關(guān)的生物標(biāo)記物種類繁多，較突出的生物標(biāo)記物有以下幾種類型：

2.2.4.1?氧化應(yīng)激?氧化應(yīng)激反應(yīng)是指機(jī)體在遭到有毒刺激時(shí)，體內(nèi)高活性物質(zhì)生產(chǎn)過(guò)多，抗氧化防御機(jī)制下降，機(jī)體氧化水平超出其對(duì)氧化物的清除能力，造成自由基的生成和抗氧化系統(tǒng)之間功能失衡失去平衡，從而引起了自身組織損傷的慢性炎癥的過(guò)程。周圍神經(jīng)系統(tǒng)的氧化應(yīng)激是通過(guò)刺激細(xì)胞內(nèi)活性氧的生成，使得細(xì)胞膜脂質(zhì)產(chǎn)生過(guò)氧化、蛋白質(zhì)硝化、DNA 退化，引起周圍神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)生變形、壞死和脫髓鞘樣改變?；钚匝跎a(chǎn)過(guò)多或者清除能力下降都會(huì)導(dǎo)致氧化應(yīng)激的發(fā)生，它可以誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞的損傷[18]。

自由基是表明機(jī)體氧化應(yīng)激的直接指標(biāo)，但自由基的特點(diǎn)是轉(zhuǎn)瞬即逝，故試驗(yàn)中很難檢測(cè)。但是部分蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和DNA自由基損傷的終產(chǎn)物作為表明氧化應(yīng)激的可靠的間接指標(biāo)可檢測(cè)，例如：丙二醛（Malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）[8]。

在氧化應(yīng)激的研究中，谷胱甘肽（Glutathione，GSH）作為還原劑，在生物體內(nèi)具有重要的抗氧化活性[22]?？偪寡趸芰Γ═otal Anti-oxidative capacity，TAOC）主要包括非酶促體系的抗氧化物質(zhì)和酶促體系某些小分子量抗氧化物質(zhì)，故TAOC是反映機(jī)體抗氧化能力的重要指標(biāo)之一[21]。

2.2.4.2?炎癥因子?外周神經(jīng)的退行性變化和多種炎性細(xì)胞因子密切相關(guān)。退行性變化的外周組織可引起以巨噬細(xì)胞為主的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，進(jìn)而分泌各種炎性因子如腫瘤壞死因子-α（Tumor Necrosis Factor Alpha，TNF-α）、白細(xì)胞介素-1（Interleukin-1，IL-1）、單核細(xì)胞趨化蛋白-1（Monocyte Chemoattractant Protein-1，MCP-1）等，蛋白酶如組織蛋白酶和金屬基質(zhì)蛋白酶類（Metal Matrix Proteinase，MMP）及纖溶酶原激活物抑制物表達(dá)[14，17]。隨著周圍環(huán)境持續(xù)性的高血糖，將會(huì)導(dǎo)致核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB介導(dǎo)作用，炎性因子TNF-α、白細(xì)胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）以及誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（Inducible Nitric Oxide Synthase，iNOS）都能被核因子κB（Nuclear Factor Kappa B，NF-κB）調(diào)控且相互間引起神經(jīng)炎癥的惡性循環(huán)[14]。NF-κB是一種對(duì)氧化還原狀態(tài)敏感的轉(zhuǎn)錄因子，在介導(dǎo)炎癥、免疫和凋亡中發(fā)揮重要作用。參與炎癥反應(yīng)調(diào)節(jié)的主要是NF-κB激活的經(jīng)典通路：氧化應(yīng)激可導(dǎo)致IKKβ激活，后者可使IκB-α磷酸化、泛素化和降解，分泌出NF-κB p50/p65。NF-κB p50/p65遷移入核，調(diào)節(jié)炎癥因子如IL-6，TNF-α，iNOS，IL-1等的轉(zhuǎn)錄，這些物質(zhì)又能進(jìn)一步激活NF-κB，這種正反饋機(jī)制導(dǎo)致炎癥反應(yīng)不斷增加，可加劇組織受損[12]。另外，C反應(yīng)蛋白（C Reactive Protein，CRP）是一種非特異性炎癥性標(biāo)志物，是一種急性期蛋白，由肝細(xì)胞合成。當(dāng)機(jī)體處于炎癥情況下，其具有敏感性[23]。

2.2.4.3?神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子?神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（Neurotrophic Factors，NTF）是一類促進(jìn)神經(jīng)元生存、樣態(tài)發(fā)展和生理功能發(fā)育的蛋白質(zhì)，由敏感神經(jīng)元的靶組織合成。在生理?xiàng)l件下，NTF反向傳輸至神經(jīng)元胞體，進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)的提供，刺激神經(jīng)遞質(zhì)的表達(dá)，促使神經(jīng)生長(zhǎng)作用;在機(jī)體外界刺激受損時(shí)，NTF的活性增強(qiáng)、合成增加，促進(jìn)周圍神經(jīng)的修復(fù)[18]。常見(jiàn)的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子包括神經(jīng)生長(zhǎng)因子（Neurotrophic Factors，NGF）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF）等，各神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的缺乏顯然在DPN的發(fā)病過(guò)程中具有非常重要的意義[19]。

2.2.4.4?細(xì)胞凋亡?DPN的主要表現(xiàn)之一為神經(jīng)細(xì)胞凋亡。細(xì)胞凋亡的發(fā)生是在多種凋亡基因的調(diào)控下進(jìn)行的。B淋巴細(xì)胞瘤-2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）、BAX同屬Bcl-2基因家族成員，與凋亡調(diào)控關(guān)系非常密切，兩者之間比例對(duì)細(xì)胞的凋亡與存活起決定性的作用[24]。另外有研究表明，糖尿病高血糖導(dǎo)致線粒體內(nèi)膜通透性改變。因此，半胱天冬酶-3（Caspase-3）和半胱天冬酶-8（Caspase-8）在細(xì)胞色素c從線粒體基質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞質(zhì)后被激活，從而引發(fā)神經(jīng)元凋亡細(xì)胞死亡[22]。

2.2.4.5?其他?神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1（Neuregulin1，NRG1）：是生長(zhǎng)和分化因子家族，參與外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的各種功能，包括受損外周神經(jīng)再生的基礎(chǔ)再生過(guò)程。Fricker等人觀察到，缺乏NRG1的軸突具有明顯較薄的髓鞘[25]。

由于生物標(biāo)記物的建立大都在處死大鼠后進(jìn)行的，故部分文獻(xiàn)中并未有不同周齡指標(biāo)結(jié)果的比較。

普通飼料組：Erbas O等[22]研究發(fā)現(xiàn)，在造模后4周，施萬(wàn)細(xì)胞中BAX的表達(dá)，Caspase-3和Caspase-8在糖尿病大鼠中均顯著增高。而血漿GSH水平顯著降低。焦洋[12]研究發(fā)現(xiàn)，在造模后8周，坐骨神經(jīng)中的TNF-α和IL-6程度顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。大鼠血清VEGF：莫霏霏[11]研究發(fā)現(xiàn)，在造模后1周呈緩慢上升趨勢(shì)，持續(xù)到第4周末。李芊綿等[13]研究發(fā)現(xiàn)，在造模后10周，坐骨神經(jīng)NGF mRNA降低;VEGF mRNA表達(dá)明顯增高。沈祥峰等[19]研究發(fā)現(xiàn)，在造模后12周坐骨神經(jīng)纖維施萬(wàn)細(xì)胞、神經(jīng)纖維內(nèi)的血管內(nèi)皮細(xì)胞及軸突中VEGF表達(dá)明顯增高;坐骨神經(jīng)組織VEGF mRNA表達(dá)顯著升高，持續(xù)到第24周末。

高脂飼料組：Kelany ME等[26]研究發(fā)現(xiàn)，在造模后4周，MDA呈顯著性增高;SOD呈顯著性降低。王小康[14]研究發(fā)現(xiàn)，在造模后8周，TNF-α、IL-6和iNOS表達(dá)上有顯著性的增多，李道衛(wèi)[17]研究發(fā)現(xiàn)，在造模后8周，血清中 TNF-α、IL-1、MMP-1、MCP-1均顯著升高;NGF mRNA表達(dá)顯著降低。呂翠巖[18]研究發(fā)現(xiàn)，在造模后12周，NGF含量水平明顯降低;NGF mRNA表達(dá)顯著降低。Zhou F等[25]研究發(fā)現(xiàn)，在造模后7周，NRG1和NGF的表達(dá)均顯著降低。

2.2.5?神經(jīng)結(jié)構(gòu)?DPN的結(jié)構(gòu)改變，包括有髓、無(wú)髓神經(jīng)纖維改變和神經(jīng)內(nèi)膜的微血管變化[4]。本研究檢索的文獻(xiàn)均應(yīng)用HE染色的方法，在光鏡或電鏡下對(duì)坐骨神經(jīng)進(jìn)行觀察，其他部位的檢測(cè)，文獻(xiàn)中并未闡述。數(shù)據(jù)總結(jié)如下：

普通飼料組：莫霏霏通過(guò)將坐骨神經(jīng)進(jìn)行在體分離后研究發(fā)現(xiàn)，光鏡下：正常坐骨神經(jīng)纖維分布整齊，規(guī)則，單個(gè)纖維豐滿，形態(tài)規(guī)則，可見(jiàn)半月形施萬(wàn)細(xì)胞，髓鞘內(nèi)軸突清楚，軸索形態(tài)正常。在造模后4周其變?yōu)榕帕邢∷?，可?jiàn)較多脫髓鞘改變，施萬(wàn)細(xì)胞削減，甚至消失，軸突、軸索顯著改變。

電鏡下：正常坐骨神經(jīng)髓鞘緊密、板層結(jié)構(gòu)正常、層次清晰。軸突整齊，可見(jiàn)神經(jīng)微絲、微觀分布規(guī)則，線粒體結(jié)構(gòu)正常，線粒體嵴稠密，施萬(wàn)細(xì)胞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)正常。在造模后4周，坐骨神經(jīng)明顯縮小，神經(jīng)髓鞘改變，髓鞘板層結(jié)構(gòu)消失。軸突內(nèi)微絲、微管分布雜亂，線粒體外膜尚完整，線粒體嵴削減，甚至消失，施萬(wàn)細(xì)胞變性壞死[11]。

高脂飼料組：王小康[14]也將坐骨神經(jīng)進(jìn)行在體分離后研究發(fā)現(xiàn)，正常坐骨神經(jīng)排列整齊，髓鞘清楚，組織間密集。在造模后8周，坐骨神經(jīng)結(jié)構(gòu)排列紊亂，髓鞘脫落，組織間水腫并游離細(xì)胞較多。李道衛(wèi)以相同方法分離坐骨神經(jīng)后研究發(fā)現(xiàn)，光鏡下：正常組大鼠坐骨神經(jīng)有髓纖維分布致密均勻，纖維豐滿，髓鞘形態(tài)正常，染色均勻;毛細(xì)血管形狀規(guī)則、管壁光滑。在造模后8周，大鼠坐骨神經(jīng)纖維排列松散紊亂分布稀松雜亂，厚薄不一，出現(xiàn)分離、脫落的現(xiàn)象，可見(jiàn)斑塊狀密度考減低區(qū);毛細(xì)血管管腔不規(guī)則、管壁變厚，毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞可見(jiàn)腫脹 、變形。

電鏡下，正常組大鼠坐骨神經(jīng)有髓神經(jīng)纖維的髓鞘緊密均勻。在造模后8周，大鼠坐骨神經(jīng)有髓神經(jīng)纖維髓鞘明顯變厚，其軸索內(nèi)基質(zhì)密集，微絲分布雜亂[17];呂翠巖等[16]運(yùn)用同上方法進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，正常組大鼠坐骨神經(jīng)橫切面髓鞘結(jié)構(gòu)正常，施萬(wàn)細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常，常染色質(zhì)較多，軸索內(nèi)可見(jiàn)大量的神經(jīng)絲、微絲等，且排列規(guī)則、結(jié)構(gòu)完整。在造模后16周，大鼠坐骨神經(jīng)橫切面髓鞘的板層結(jié)構(gòu)發(fā)生嚴(yán)重改變，各層間分布雜亂，軸索萎縮變細(xì)，線粒體嵴銳減，結(jié)構(gòu)雜亂，施萬(wàn)細(xì)胞壞死。

2.3?Wistar大鼠

2.3.1?神經(jīng)功能實(shí)驗(yàn)?韓麗萍[4]研究發(fā)現(xiàn)，從造模后2周開始MNCV和SNCV明顯降低。Yao H等[29]研究發(fā)現(xiàn)，在造模后2周MNCV下降，且持續(xù)到第8周末。

2.3.2?行為學(xué)實(shí)驗(yàn)?關(guān)于熱痛敏測(cè)定：韓麗萍[4]研究發(fā)現(xiàn)，在造模后2周，熱痛縮腿反應(yīng)潛伏期縮短;持續(xù)到第8周末潛伏期仍縮短，表明痛覺(jué)過(guò)敏作為其早期表現(xiàn);但在造模12周后出現(xiàn)潛伏期延長(zhǎng)，提示后期出現(xiàn)痛覺(jué)遲鈍。

在對(duì)Wistar大鼠相關(guān)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行整理總結(jié)時(shí)，發(fā)現(xiàn)比較特別的測(cè)定內(nèi)容是Diana Amorim等[27]的冷敏感測(cè)定，在造模后4周，出現(xiàn)冷敏感的增加;國(guó)內(nèi)馮程程等[24]也有類似的相關(guān)測(cè)定，冷縮足實(shí)驗(yàn)延長(zhǎng)。

關(guān)于機(jī)械痛閾測(cè)定：Rocha IR等[28]研究發(fā)現(xiàn)，在造模后2周出現(xiàn)明顯下降，并持續(xù)到造模后8周呈進(jìn)行性加重。

2.3.3?生物標(biāo)記物?實(shí)驗(yàn)表明，在造模后8周，MDA含量顯著升高、SOD 顯著降低[8，21，29，30]，TAOC減弱[21]。還有Rocha IR等[28]研究發(fā)現(xiàn)一些異常包括髓鞘內(nèi)陷、髓鞘致密化紊亂以及糖尿病誘導(dǎo)后30天（近似相當(dāng)于造模后7周）無(wú)髓鞘纖維減少。這些變化在STZ注射后60天內(nèi)（近似相當(dāng)于造模后9周）惡化。馮程程等[24]研究發(fā)現(xiàn)，在造模后4周，BAX表達(dá)增強(qiáng)，Bcl-2表達(dá)減弱和Bcl-2/BAX比值顯著明顯下降，提示Bcl-2、BAX確實(shí)在DPN中發(fā)揮了關(guān)鍵作用。

2.3.4?神經(jīng)結(jié)構(gòu)?腓腸神經(jīng)定量分析：韓麗萍研究發(fā)現(xiàn)，造模后2、4周，腓腸神經(jīng)有髓神經(jīng)纖維密度未見(jiàn)顯著變化，造模后6周有減少趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，從造模后8周開始有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且纖維密度呈進(jìn)行性減少，逐漸表現(xiàn)出神經(jīng)萎縮。

坐骨神經(jīng)形態(tài)學(xué)觀察：實(shí)驗(yàn)表明光鏡下：有髓神經(jīng)纖維結(jié)構(gòu)正常，施萬(wàn)細(xì)胞核清晰，在造模后2、4周時(shí)沒(méi)有顯著變化;在造模后6周時(shí)神經(jīng)纖維間距變大，不均勻，可見(jiàn)許多有髓神經(jīng)纖維發(fā)生病變，主要為髓鞘腫脹、變性，軸突縮小，也有某些神經(jīng)纖維髓鞘脫失，施萬(wàn)細(xì)胞增生。在造模后8周、12周神經(jīng)改變更加顯著。

電鏡下：在造模后4周內(nèi)由神經(jīng)纖維髓鞘具有完整性，板層結(jié)構(gòu)清晰楚，排列整齊，軸突內(nèi)神經(jīng)微絲分布較為清晰，變?yōu)樯窠?jīng)纖維髓鞘脫離，板層結(jié)構(gòu)損壞，可見(jiàn)各層分布雜亂，軸索內(nèi)部分微絲及微管斷損、溶解，軸突變性。在造模后6周、8周、12周，神經(jīng)改變更加顯著，髓鞘板層稀松、斷損，排列雜亂，甚至成球狀，向軸索面脹大，軸突縮小[4]。

3?自發(fā)性糖尿病大鼠相關(guān)數(shù)據(jù)的匯總

筆者以GK大鼠為代表對(duì)自發(fā)性糖尿病大鼠進(jìn)行以下數(shù)據(jù)的匯總：

3.1?神經(jīng)功能實(shí)驗(yàn)?馮露琳等[23，32]研究發(fā)現(xiàn)，在造模后12周MNCV、SNCV減慢，MNCV減慢不顯著，其降低情況也較SNCV為弱，比較造模后4周、8周，僅在造模后12周差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[31]。

3.2?生物標(biāo)記物?馮露琳[23]研究發(fā)現(xiàn)，在造模后12周，CRP出現(xiàn)明顯升高;TNF-α、IL-6也呈現(xiàn)明顯升高;胡蕓[32]研究發(fā)現(xiàn)，Caspase-3：表達(dá)水平也上調(diào)明顯。

3.3?神經(jīng)結(jié)構(gòu)?富曉旭等[31]研究發(fā)現(xiàn)，坐骨神經(jīng)結(jié)構(gòu)在造模后8周，切片可見(jiàn)部分神經(jīng)束損害及神經(jīng)束斷損;造模后12周神經(jīng)束膜均損壞，無(wú)完整性，神經(jīng)纖維細(xì)胞核萎縮，神經(jīng)纖維束斷損，發(fā)生嚴(yán)重溶解，發(fā)生液化性壞死。其間微血管少見(jiàn)，管腔較大，可見(jiàn)巨噬細(xì)胞[23，31，32]。

4?討論

本研究通過(guò)總結(jié)SD大鼠、Wistar大鼠、自發(fā)性糖尿病大鼠不同周齡的DPN的相關(guān)指標(biāo)數(shù)據(jù)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，關(guān)于SD大鼠，普通飼料組除生物標(biāo)記物外其余三項(xiàng)神經(jīng)病變相關(guān)指標(biāo)的改變均早于高脂飼料組，而四項(xiàng)神經(jīng)病變相關(guān)指標(biāo)的對(duì)比發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)功能的改變可能更早于行為學(xué)的改變，而生物標(biāo)記物的研究由于該項(xiàng)的檢測(cè)大都在大鼠處死后進(jìn)行，故無(wú)法準(zhǔn)確的進(jìn)行對(duì)比，另外神經(jīng)結(jié)構(gòu)的改變可能晚于前兩項(xiàng)。關(guān)于Wistar大鼠，神經(jīng)功能與行為學(xué)的改變可能差異不大，而神經(jīng)結(jié)構(gòu)的改變?nèi)酝碛谇皟身?xiàng)。關(guān)于自發(fā)性糖尿病大鼠，其行為學(xué)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)特征性數(shù)據(jù)的總結(jié)，且MNCV和SNCV相比于SD大鼠、Wistar大鼠敏感性較低;對(duì)于人類而言，SNCV會(huì)先于MNCV而變化，韓麗萍的研究表明，SNCV相比于MNCV改變出現(xiàn)得較早且改變明顯，有時(shí)甚至作為僅有的改變[4]。而結(jié)合所整理的大鼠相關(guān)數(shù)據(jù)，除自發(fā)性糖尿病大鼠，均并未詳細(xì)闡述兩者的差異。在實(shí)驗(yàn)成本方面相對(duì)于其他兩類大鼠更昂貴，故在實(shí)驗(yàn)應(yīng)用上SD大鼠和Wistar大鼠更廣泛。

SD大鼠與Wistar大鼠之間通過(guò) 本次的數(shù)據(jù)總結(jié)也可以發(fā)現(xiàn)，SD大鼠的神經(jīng)功能與神經(jīng)結(jié)構(gòu)的改變可能比Wistar大鼠更早，當(dāng)然對(duì)于糖尿病大鼠不同周齡的探討也發(fā)現(xiàn)，造模后1-4周，實(shí)驗(yàn)的結(jié)果可能會(huì)有差異，但是造模后8周的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，差異性基本較小。而造模后12周的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能會(huì)與造模后2周、4周、6周、8周的結(jié)果有所不同，故建議實(shí)驗(yàn)的周期盡量在12周左右，如此對(duì)于數(shù)據(jù)的把握更具說(shuō)服力。

當(dāng)然本次對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的探討也有一定的局限性，如SD大鼠的普通飼料組與高脂飼料組所注射的STZ劑量及濃度有所不同，可能會(huì)對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)有所影響。而另一方面，由于Wistar大鼠特征性的相關(guān)研究較少，為了更全面的闡述相關(guān)數(shù)據(jù)，本文也參考了較早的論文，2007年韓麗萍[4]的碩士學(xué)位論文，而針對(duì)實(shí)驗(yàn)本身，由于各個(gè)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)要求的不同，例如糖尿病大鼠模型取材部位、建模所需時(shí)間、大鼠模型擺尾溫度的要求等，糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠模型的相關(guān)數(shù)據(jù)結(jié)果可能會(huì)產(chǎn)生差異，但是從所收集的總體數(shù)據(jù)可以發(fā)現(xiàn)，SD大鼠比Wistar大鼠更敏感，更適合作為DPN模型大鼠用于實(shí)驗(yàn)研究，且SD大鼠應(yīng)用于1型糖尿病組比2型糖尿病組更敏感。

參考文獻(xiàn)：

[1]中國(guó)2型糖尿病防治指南（2017年版）[J].中國(guó)實(shí)用內(nèi)科雜志，2018（4）：292-344.

[2]Meyer-Hamme G，F(xiàn)riedemann T，Greten HJ et al.ACUDIN-ACUpuncture and laser acupuncture for treatment of DIabetic peripheral Neuropathy：a randomized，placebo-controlled，partially double-blinded trial[J].BMC Neurol，2018，18（1）：40.

[3]Biessels GJ，Bril V，Calcutt NA，Cameron NE et al.?Phenotyping animal models of diabetic neuropathy：a consensus statement of the diabetic neuropathy study group of the EASD（Neurodiab）.J Peripher Nerv Syst，2014，19（2）：77-87.

[4]韓麗萍.ACEI對(duì)糖尿病大鼠周圍神經(jīng)病變的防治作用及機(jī)理研究[D].天津：天津醫(yī)科大學(xué)，2007.

[5]曲戎梅，姚紅衛(wèi)，戴景興，等.不同品系大鼠皮下脂肪源干細(xì)胞誘導(dǎo)分化能力的比較[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2011（7）：1151-1153.

[6]王克柱，徐攀，盧聰，等.兩品系大鼠在經(jīng)典條件反射和操作式條件反射中的行為學(xué)表現(xiàn)[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào)，2016（1）：65-71.

[7]尚坤，劉明軍，陳飛騰，等.傳統(tǒng)推拿“束悗療法”對(duì)糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度、超氧化物歧化酶、丙二醛表達(dá)的影響[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，2018（6）：1451-1453.

[8]常利民，董佳生，徐華，等.SD大鼠1型糖尿病動(dòng)物模型的建立[J].山西醫(yī)藥雜志，2009（3）：218-220.

[9]趙芳，蔣朝暉，楊國(guó)珍，等.不同劑量鏈脲佐菌素建立1型糖尿病大鼠模型[J].貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010（1）：22-25.

[10]余震，余州，吳騏而，等.不同劑量鏈尿佐菌素誘導(dǎo)2型糖尿病大鼠模型的研究[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2014（35）：6835-6838+6854.

[11]莫霏霏.前列地爾對(duì)糖尿病大鼠周圍神經(jīng)功能及滋養(yǎng)血管通透性變化的實(shí)驗(yàn)研究[D].遵義：遵義醫(yī)學(xué)院，2016.

[12]焦洋.富氫生理鹽水對(duì)糖尿病大鼠神經(jīng)病理性痛的保護(hù)作用[D].天津：天津醫(yī)科大學(xué)，2014.

[13]李芊綿，王超，范越，等.黃芪桂枝五物湯對(duì)糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠NGF mRNA和VEGF mRNA表達(dá)的影響[J].中醫(yī)藥信息，2016（5）：42-44.

[14]王小康.番石榴葉總?cè)聘纳铺悄虿〈笫笾車窠?jīng)病變的作用機(jī)制研究[D].廣州：暨南大學(xué)，2016.

[15]呂翠巖，張勝容，趙文景，等.糖痹康對(duì)糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)速度的影響[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2015（7）：1596-1598.

[16]呂翠巖，張勝容，徐暾海，等.糖痹康對(duì)糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠脂代謝及坐骨神經(jīng)超微結(jié)構(gòu)的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志，2016（12）：5000-5003.

[17]李道衛(wèi).益氣活血通絡(luò)方對(duì)糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠炎性因子及神經(jīng)生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響[D].合肥：安徽中醫(yī)藥大學(xué)，2017.

[18]汪碧澄.芪歸糖痛寧顆粒對(duì)糖尿病周圍神經(jīng)病變病人臨床干預(yù)及對(duì)DPN模型大鼠β-EP、NGFmRNA水平的影響[D].合肥：安徽中醫(yī)藥大學(xué)，2017.

[19]沈祥峰，柴可夫.VEGF在糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠坐骨神經(jīng)中的表達(dá)及運(yùn)脾和絡(luò)顆粒的干預(yù)作用[J].中華中醫(yī)藥雜志，2015（3）：747-750.

[20]渠勝英，施曉紅.免疫細(xì)胞因子在2型糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠血清中的表達(dá)[J].中國(guó)糖尿病雜志，2014（3）：264-267.

[21]劉春燕，吳文妙，任那.關(guān)節(jié)六經(jīng)圍刺法配合指（趾）端放血療法對(duì)糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠氧化應(yīng)激的影響[J].四川中醫(yī)，2015（1）：56-57.

[22]Erbas O，TaAskran D，Oltulu F et al.Oxytocin provides protection against diabetic polyneuropathy in rats[J].Neurol Res，2017，39（1）：45-53.

[23]馮露琳.活血化痰通絡(luò)法對(duì)糖尿病周圍神經(jīng)病變GK大鼠炎癥反應(yīng)量效關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究[D].成都：成都中醫(yī)藥大學(xué)，2015.

[24]馮程程，馬麗.溫通活血乳膏對(duì)糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠氧化應(yīng)激相關(guān)因子的影響[J].中華中醫(yī)藥雜志，2017（3）：1068-1072.

[25]Zhou F，Xia Z，Liu K et al.Exogenous neuregulin-1 attenuates STZ-induced diabetic peripheral neuropathic pain in rats[J].Acta Cir Bras，2017，32（1）：28-37.

[26]Kelany ME，Hakami TM，Omar AH et al.Combination of Sitagliptin and Insulin against Type 2 Diabetes Mellitus with Neuropathy in Rats：Neuroprotection and Role of Oxidative and Inflammation Stress[J].Pharmacology，2016，98（5-6）：242-250.

[27]Amorim D，Puga S，Bragana R et al.Minocycline reduces mechanical allodynia and depressive-like behaviour in type-1 diabetes mellitus in the rat[J].Behav Brain Res，2017，327（1）：1-10.

[28]Rocha IR，Ciena AP，Rosa AS et al.Photobiostimulation reverses allodynia and peripheral nerve damage in streptozotocin-induced type 1 diabetes[J].Lasers Med Sci，2017，32（3）：495-501.

[29]Yao H，F(xiàn)eng J，Zheng Q et al.The effects of gliclazide，methylcobalamin，and gliclazide+methylcobalamin combination therapy on diabetic peripheral neuropathy in rats[J].Life Sci，2016，161（1）：60-8.

[30]陳林青，劉明軍，卓越，等.束悗通經(jīng)推拿療法對(duì)糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠坐骨神經(jīng)功能與SOD表達(dá)的影響研究[J].中國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育，2016（5）：135-137.

[31]富曉旭，馮露琳，張翕宇，等.自發(fā)性糖尿病GK大鼠糖尿病周圍神經(jīng)病變模型的建立[J].天津醫(yī)藥，2016（8）：989-992+1060.

[32]胡蕓.通絡(luò)糖泰方對(duì)自發(fā)性2型糖尿病GK大鼠糖尿病周圍神經(jīng)病變JNK表達(dá)水平的實(shí)驗(yàn)研究[D].成都：成都中醫(yī)藥大學(xué)，2015.

（收稿日期：2020-07-29）