林 海，任慶萍，李 敏 ，田 兵，陳宇飛，郭 京，曾 一

失眠的病因病機(jī)復(fù)雜，病情頑固，治療周期長(zhǎng)。中醫(yī)治療失眠在改善睡眠質(zhì)量和其他兼次癥狀方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，與西藥相比具有無明顯成癮性、副作用少的優(yōu)點(diǎn)。但仍存在部分失眠病人經(jīng)辨證治療后效果不理想，出現(xiàn)難治、易轉(zhuǎn)成慢性失眠等現(xiàn)象，究其原因，可能是與病人自身的體質(zhì)因素有關(guān)，經(jīng)文獻(xiàn)檢索并結(jié)合多年的臨床經(jīng)驗(yàn)，認(rèn)為體質(zhì)影響著失眠的多個(gè)方面，郁病是目前我國(guó)的常見病、多發(fā)病之一[1]，而氣郁體質(zhì)在失眠病人中是較常見的一種體質(zhì)類型[2]。本研究觀察清火安神湯對(duì)氣郁體質(zhì)失眠大鼠5-羥色胺(5-HT)表達(dá)水平的影響。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 Sprague-Dawley(SD)成年雄性大鼠60只，體質(zhì)量180～220 g。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 體質(zhì)模型的建立 將60只SD大鼠隨機(jī)分為平和質(zhì)組、氣郁質(zhì)組，每組30只。分組后以平和質(zhì)、氣郁質(zhì)生存環(huán)境為參照飼養(yǎng)1周。平和質(zhì)組：普通飼料喂養(yǎng)，保證飲食充足，環(huán)境適宜，光照及溫度適宜，通風(fēng)良好，及時(shí)清掃。氣郁質(zhì)組：參照朱清靜等[3]、唐已婷等[4]報(bào)道的方法，實(shí)驗(yàn)開始時(shí)給予束縛法，將大鼠放入束縛盒內(nèi)，調(diào)節(jié)前端活動(dòng)部位到合適的位置，使大鼠不產(chǎn)生強(qiáng)烈反抗的緊張程度，每天6 h(09：00～15：00)，連續(xù)7 d。

1.2.2 SD大鼠失眠模型的建立 參考文獻(xiàn)[5]，并結(jié)合前期預(yù)實(shí)驗(yàn)的方法和結(jié)果，采用現(xiàn)代公認(rèn)的腹腔注射對(duì)氯苯丙氨酸(PCPA)誘導(dǎo)失眠模型。具體操作方法：于每日08：00～08：30進(jìn)行，對(duì)大鼠腹腔注射PCPA，每天1次，連續(xù)注射2 d。即第1次對(duì)大鼠腹腔注射藥物 24～28 h后，大鼠晝夜節(jié)律缺失，白天、晚上均不?；顒?dòng)，整體情況與空白組有明顯差異。PCPA使用前，按大鼠0.430 mg/g用量，用弱堿性的生理鹽水配制成混懸液備用；除空白組不予任何處理外，其余均腹腔注射PCPA。失眠造模成功后根據(jù)體質(zhì)類型分為氣郁質(zhì)失眠組、平和質(zhì)失眠組，每組30只。平和質(zhì)失眠組再隨機(jī)分為平和質(zhì)失眠對(duì)照組、平和質(zhì)失眠清火安神湯組，每組15只；氣郁質(zhì)失眠組再隨機(jī)分為氣郁質(zhì)失眠對(duì)照組、氣郁質(zhì)失眠清火安神湯組，每組15只。平和質(zhì)失眠對(duì)照組、氣郁質(zhì)失眠對(duì)照組造模成功后第5天開始給予生理鹽水灌胃，每次0.2 mL，每日1次；平和質(zhì)失眠清火安神湯組、氣郁質(zhì)失眠清火安神湯組于造模成功后第5天開始給予清火安神湯灌胃，每次0.2 mL，每日1次。

1.3 觀察指標(biāo)及測(cè)定方法 以平和質(zhì)、氣郁質(zhì)飼養(yǎng)條件飼養(yǎng)1周后，測(cè)定大鼠血清5-HT含量。

1.3.1 體質(zhì)模型建立階段 ①一般情況：每天觀察并記錄大鼠的飲食生活起居、有無倦怠乏力、飲食量、飲水量等情況。②體質(zhì)量變化：在實(shí)驗(yàn)開始前及實(shí)驗(yàn)結(jié)束后分別稱量大鼠的體質(zhì)量，測(cè)量時(shí)間為07：00～08：00。③行為學(xué)觀察：稱取每日攝食量，每周記錄體質(zhì)量1次，觀察模型大鼠精神、活動(dòng)情況等。1%蔗糖水?dāng)z取量測(cè)定參照金光亮等[6]報(bào)道的方法，在實(shí)驗(yàn)前先對(duì)所有大鼠進(jìn)行1%蔗糖水?dāng)z取訓(xùn)練，即先用蔗糖水喂養(yǎng)48 h，隨后斷水24 h，再于08：00～09：00的1 h內(nèi)測(cè)量每只大鼠攝取蔗糖水的量，以此作為每只大鼠蔗糖水?dāng)z取量的基線，在實(shí)驗(yàn)?zāi)┯?8：00～09：00測(cè)1 h內(nèi)的蔗糖水?dāng)z取量。

1.3.2 失眠模型的建立階段 分別記錄大鼠在試驗(yàn)過程中的日常生活有無異常、一般情況、體質(zhì)量變化。

2 結(jié) 果

2.1 體質(zhì)模型創(chuàng)建階段平和質(zhì)組、氣郁質(zhì)組大鼠5-HT含量比較 平和質(zhì)組、氣郁質(zhì)組造模前5-HT含量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。平和質(zhì)組造模后5-HT含量與造模前相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.0 5)，氣郁質(zhì)組造模后5-HT含量明顯低于造模前(P<0.01)；氣郁質(zhì)組造模后5-HT含量明顯低于平和質(zhì)組造模后含量(P<0.01)。詳見表1。

表1 平和質(zhì)組、氣郁質(zhì)組大鼠5-HT含量比較 單位：ng/L

2.2 平和質(zhì)組、氣郁質(zhì)組失眠造模前后血清5-HT含量比較 氣郁質(zhì)失眠組大鼠血清5-HT含量低于平和質(zhì)失眠組(P<0.05)；氣郁質(zhì)失眠組大鼠血清5-HT含量明顯低于氣郁質(zhì)組和平和質(zhì)組(P<0.01)；平和質(zhì)失眠組大鼠血清5-HT含量明顯低于氣郁質(zhì)組和平和質(zhì)組(P<0.01)。詳見表2。

表2 平和質(zhì)組、氣郁質(zhì)組失眠造模前后血清5-HT含量比較 單位：ng/L

2.3 清火安神湯對(duì)平和質(zhì)失眠模型及氣郁質(zhì)失眠模型大鼠5-HT含量的影響 平和質(zhì)失眠清火安神湯組大鼠血清5-HT含量明顯高于平和質(zhì)失眠對(duì)照組(P<0.01)，氣郁質(zhì)失眠清火安神湯組大鼠血清5-HT含量明顯高于氣郁質(zhì)失眠對(duì)照組(P<0.01)；平和質(zhì)失眠對(duì)照組大鼠血清5-HT含量明顯高于氣郁質(zhì)失眠對(duì)照組(P<0.01)，氣郁質(zhì)失眠清火安神湯組大鼠血清5-HT含量與平和質(zhì)失眠清火安神湯組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見表3。

表3 清火安神湯對(duì)平和質(zhì)失眠模型及氣郁質(zhì)失眠模型大鼠5-HT含量的影響 單位：ng/L

3 討 論

清火安神湯是在中醫(yī)理論的支撐下，結(jié)合經(jīng)典理論基礎(chǔ)及大量臨床經(jīng)驗(yàn)提出的經(jīng)驗(yàn)方，由柴胡、貫葉連翹、合歡皮等十余味中藥組成，全方以辨病、辨體、辨證為理念，配伍嚴(yán)謹(jǐn)，諸藥同用，以疏肝瀉火、養(yǎng)心安神為主，肝心同治，不僅可以改善失眠病人的臨床癥狀，還可改善體質(zhì)的偏頗，是同時(shí)針對(duì)失眠病人氣郁質(zhì)與肝火擾心證的三位一體治療方法。

5-HT是單胺類神經(jīng)遞質(zhì)受體假說的重要組成部分，5-HT廣泛參與人體情感、睡眠與覺醒、認(rèn)知等活動(dòng)，研究證實(shí)抑郁癥、睡眠障礙與5-HT表達(dá)異常有關(guān)[7]。神經(jīng)遞質(zhì)與失眠機(jī)制關(guān)聯(lián)，已被廣大學(xué)者認(rèn)可，研究也十分廣泛。覺醒期5-HT神經(jīng)元放電增加，使5-HT濃度升高，阻斷5-HT神經(jīng)元可誘導(dǎo)睡眠，激活5-HT神經(jīng)元誘導(dǎo)覺醒，主要由5-HT神經(jīng)元組成的中縫背核也被證實(shí)是與覺醒相關(guān)的重要核團(tuán)[8]。也有研究表明，大鼠抑郁可能與血清中5-HT含量的失衡有關(guān)[9]，5-HT作為抑郁癥時(shí)機(jī)體的一個(gè)重要改變，其含量在中樞和外周呈現(xiàn)異常，據(jù)流行病學(xué)調(diào)查顯示，抑郁癥病人表現(xiàn)為中樞5-HT代謝下調(diào)[10]，外周循環(huán)血液中5-HT含量也多表現(xiàn)為下降[11]。5-HT是睡眠的重要調(diào)節(jié)遞質(zhì)，與睡眠的發(fā)生存在密切關(guān)系，而這些神經(jīng)遞質(zhì)也在抑郁癥的發(fā)病中起著重要的作用，李雪麗等[12]研究認(rèn)為抑郁及相關(guān)失眠的發(fā)生與5-HT神經(jīng)遞質(zhì)異常有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，體質(zhì)模型創(chuàng)建階段，氣郁質(zhì)組造模后血清5-HT含量明顯低于造模前和平和質(zhì)組(P<0.01)；平和質(zhì)組造模后血清5-HT含量與造模前比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，提示氣郁質(zhì)與平和質(zhì)大鼠5-HT含量有明顯差異。本研究結(jié)果還顯示，氣郁質(zhì)失眠組大鼠血清5-HT含量低于平和質(zhì)失眠組(P<0.05)；氣郁質(zhì)失眠組大鼠血清5-HT含量明顯低于氣郁質(zhì)組和平和質(zhì)組(P<0.01)；平和質(zhì)失眠組大鼠血清5-HT含量明顯低于氣郁質(zhì)組和平和質(zhì)組(P<0.01)，說明氣郁體質(zhì)與失眠均能使大鼠血清5-HT含量降低；氣郁質(zhì)失眠大鼠血清5-HT含量降低更為明顯，且失眠大鼠血清5-HT含量比氣郁質(zhì)大鼠更低。本研究結(jié)果還顯示，經(jīng)清火安神湯干預(yù)后，氣郁質(zhì)失眠清火安神湯組大鼠血清5-HT含量明顯高于氣郁質(zhì)失眠對(duì)照組(P<0.01)，說明清火安神湯治療氣郁體質(zhì)失眠有效，其作用機(jī)制可能是清火安神湯能增加氣郁質(zhì)失眠組大鼠5-HT的分泌，從而抑制覺醒和興奮，促進(jìn)睡眠并且能改善氣郁體質(zhì)。平和質(zhì)失眠清火安神湯組大鼠血清5-HT含量明顯高于平和質(zhì)失眠對(duì)照組(P<0.01)，說明清火安神湯治療平和質(zhì)失眠也有效，推測(cè)清火安神湯可提高平和質(zhì)失眠大鼠5-HT的分泌，從而抑制覺醒和興奮，對(duì)促進(jìn)睡眠有一定的作用。進(jìn)一步對(duì)氣郁質(zhì)失眠清火安神湯組與平和質(zhì)失眠清火安神湯組大鼠血清5-HT含量進(jìn)行比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。因?yàn)樵谥委熐皻庥糍|(zhì)失眠大鼠血清5-HT含量低于平和質(zhì)失眠，所以并不能說明清火安神湯治療氣郁質(zhì)失眠和平和質(zhì)失眠效果相當(dāng)，而更進(jìn)一步說明了清火安神湯治療氣郁質(zhì)失眠優(yōu)于平和質(zhì)失眠。

綜上所述，本研究通過觀察清火安神湯對(duì)氣郁質(zhì)失眠大鼠血清5-HT水平的影響，初步研究表明清火安神湯通過增加5-HT含量不僅可以改善氣郁體質(zhì)，而且可以改善失眠。