李顯勇 陳露 蔣祺 唐平 周旭峰 代沙 周露 蘭海 阮秀娟 顧國(guó)棟 李琪

疼痛是腫瘤患者第五大體征,依據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)癌痛三階梯止痛指南,阿片類藥物是治療中重度疼痛重要藥物,而阿片類藥物相關(guān)性便秘(opioidinduced constipation,OIC)是最常見(jiàn)的阿片類藥物相關(guān)性胃腸道不良反應(yīng)。既往研究顯示,OIC 可導(dǎo)致腫瘤患者治療和生活質(zhì)量下降。OIC 比疼痛更易導(dǎo)致患者抑郁情緒,致使患者寧愿忍受疼痛,并放棄長(zhǎng)期使用阿片類藥物止痛治療,從而間接影響癌痛治療的依從 性［1］。OIC 發(fā)生機(jī)制與神經(jīng)末梢的μ-受體抑制有關(guān),阿片類藥物作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)及胃腸道的阿片類受體,削弱腸道運(yùn)動(dòng),減慢腸道蠕動(dòng),腸液分泌減少吸收增多,延遲糞便的排泄,抑制神經(jīng)興奮性,但增強(qiáng)腸道單個(gè)相性收縮和擺動(dòng),增加腸壁平滑肌的張力,抑制協(xié)調(diào)性蠕動(dòng),使非蠕動(dòng)性收縮增加,從而延緩腸內(nèi)容物通過(guò)時(shí)間［2］。烏黃潤(rùn)腸丸是一種用于治療OIC 的中藥復(fù)方制劑。相關(guān)研究報(bào)道,何首烏所含成分二苯乙烯苷能降低肝中醋酸可的松所致甘油三酯積累,調(diào)節(jié)肝臟的脂代謝,預(yù)防乙型肝炎。降低四氯化碳所引發(fā)的肝腫大,阻礙肝臟微粒體中的脂質(zhì)過(guò)氧化,降低血清游離脂肪酸,是保肝的有效成分,含有的二苯乙烯苷、蒽醌類、黃酮類等多種成分,在抗衰老、抗腫瘤、保護(hù)神經(jīng)以及改善血管功能等方面具有顯著效果［3,4］。本研究使用阿片類藥物復(fù)方地芬諾酯建立OIC 小鼠模型,研究不同給藥劑量的烏黃潤(rùn)腸丸對(duì)便秘小鼠排便時(shí)間、排便重量和排便粒數(shù)的影響,并考察制劑安全性,為該制劑治療阿片類藥物致便提供臨床理論依據(jù)和參考。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥材及試劑 烏黃潤(rùn)腸丸由成都復(fù)興醫(yī)院與攀枝花市農(nóng)林科學(xué)研究院聯(lián)合研究開(kāi)發(fā)及制備。熟地黃(蒸制)、知母、枳殼、當(dāng)歸、黃芩、黃柏購(gòu)于四川千方中藥股份有限公司；“首烏1 號(hào)”為攀枝花農(nóng)林科學(xué)院育出的新品系,經(jīng)攀枝花市食品藥品檢驗(yàn)所檢測(cè),何首烏塊根總灰分3.6%,二苯乙烯苷含量4.4%,結(jié)合蒽醌含量0.21%,符合《中國(guó)藥典》(2015 版,一部)規(guī)定。復(fù)方地芬諾酯片(國(guó)藥準(zhǔn)字H41020205,規(guī)格：每片含鹽酸地芬諾酯2.5 mg、硫酸阿托品0.025 mg)；麻仁丸(國(guó)藥準(zhǔn)字Z42020417)。溶血?jiǎng)?V-28CFL)；稀釋劑(M-3D)；清洗液(V-28R)；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(140119002)。

1.2 儀器 BSA124S 萬(wàn)分之一電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)；電子天平(JM-B2002)；獸用全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀(BC-2800Vet,深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)；獸用生化分析儀(BC-240VET,深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明小鼠56 只,SPF 級(jí),雌雄各半。實(shí)驗(yàn)單位使用許可證編號(hào)：SYXK(川)2016-202,由成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 烏黃潤(rùn)腸丸對(duì)阿片類藥物致便秘小鼠通便的作用

2.1.1 復(fù)方地芬諾酯混懸液配制 取復(fù)方地芬諾酯片2 片(每片含鹽酸地芬諾酯2.5 mg、硫酸阿托品 0.025 mg),加RO 水至10 ml,質(zhì)量濃度為0.5 g/L,振蕩溶解混勻,臨用前配制［6］。

2.1.2 墨汁配制 準(zhǔn)確稱取阿拉伯樹(shù)膠100 g,加RO水800 ml,煮沸至溶液透明,稱取活性炭(粉末)100 g加至上述溶液中煮沸3 次,待溶液涼后加RO 水定容至1000 ml,于4℃儲(chǔ)存［7］。

2.1.3 動(dòng)物分組 40 只昆明小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、陰性實(shí)驗(yàn)組、陽(yáng)性對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)低劑量組、實(shí)驗(yàn)高劑量組,每組8 只,雌雄各半。另選16 只昆明小鼠,隨機(jī)分為給藥組和對(duì)照組,每組8 只,雌雄各半。

2.1.4 排便實(shí)驗(yàn) 試驗(yàn)前一天下午各組小鼠禁食不禁水16 h,于次日測(cè)定時(shí),除空白對(duì)照組外,其余各組小鼠灌胃給予復(fù)方地芬諾酯混懸液(5 mg/kg),空白對(duì)照組給予等容量RO 水；60 min 后分別灌胃陽(yáng)性對(duì)照組(麻仁丸0.6 g/kg)、實(shí)驗(yàn)低劑量組(烏黃潤(rùn)腸丸0.4 g/kg)、實(shí)驗(yàn)高劑量組(烏黃潤(rùn)腸丸1.2 g/kg)小鼠相應(yīng)受試藥物,空白對(duì)照組和陰性實(shí)驗(yàn)組分別給予等容量RO 水；20 min 后給予碳粉液指示劑。從灌墨汁開(kāi)始記錄每只動(dòng)物排首粒黑便時(shí)間和在6 h 內(nèi)排黑便的粒數(shù)及黑便質(zhì)量。

2.2 烏黃潤(rùn)腸丸單次給藥毒性 給藥組采用小鼠最大給藥量法,以烏黃潤(rùn)腸丸最大給藥濃度2.4 g/kg,最大給藥體積1.0 ml,24 h 內(nèi)經(jīng)口灌服1 次,對(duì)照組給予等體積的RO水,觀察14 d。試驗(yàn)期間觀察小鼠體重、飲食、外觀、行為、分泌物、排泄物、死亡情況及中毒反應(yīng)等,到期時(shí)眼球采血和大體解剖,組織行病理學(xué)檢查,眼球血用于血常規(guī)和血生化檢測(cè)［8］。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,多組間比較采用單因素方差分析,兩組間比較采用t 檢驗(yàn)。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4 結(jié)果

4.1 各組小鼠排首粒黑便時(shí)間、6 h 內(nèi)排便粒數(shù)、6 h排便凈重量比較 陽(yáng)性對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)低劑量組、實(shí)驗(yàn)高劑量組排首粒黑便時(shí)間均短于空白對(duì)照組與陰性實(shí)驗(yàn)組,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)高劑量組6 h 內(nèi)排便粒數(shù)多于空白對(duì)照組與陰性實(shí)驗(yàn)組,實(shí)驗(yàn)低劑量組多于陰性實(shí)驗(yàn)組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)高劑量組6 h 排便凈重量高于空白對(duì)照組與陰性實(shí)驗(yàn)組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)低劑量組與陽(yáng)性對(duì)照組的6 h 內(nèi)排便粒數(shù)與6 h 排便凈重量比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見(jiàn)表1。

表1 各組小鼠排首粒黑便時(shí)間、6 h 內(nèi)排便粒數(shù)、6 h 排便凈重量比較()

表1 各組小鼠排首粒黑便時(shí)間、6 h 內(nèi)排便粒數(shù)、6 h 排便凈重量比較()

注：與空白對(duì)照組比較,aP＜0.05；與陰性實(shí)驗(yàn)組比較,bP＜0.05

4.2 烏黃潤(rùn)腸丸安全性

4.2.1 對(duì)照組與給藥組單次給藥第0、4、7、14 天體重比較 對(duì)照組與給藥組小鼠單次給藥第0、4、7、14 天的體重比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見(jiàn)表2。

表2 對(duì)照組與給藥組單次給藥第0、4、7、14 天體重比較(,g)

表2 對(duì)照組與給藥組單次給藥第0、4、7、14 天體重比較(,g)

注：兩組比較,P＞0.05

4.2.2 對(duì)照組與給藥組小鼠血常規(guī)檢驗(yàn)結(jié)果比較 對(duì)照組與給藥組血小板、紅細(xì)胞、血紅蛋白、白細(xì)胞水平比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見(jiàn)表3。

表3 對(duì)照組與給藥組小鼠血常規(guī)檢驗(yàn)結(jié)果比較()

表3 對(duì)照組與給藥組小鼠血常規(guī)檢驗(yàn)結(jié)果比較()

注：兩組比較,P＞0.05

4.2.3 對(duì)照組與給藥組小鼠血生化檢驗(yàn)結(jié)果比較 對(duì) 照組與給藥組的肌酐和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶水平比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。給藥組的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn) 表4。

表4 對(duì)照組與給藥組小鼠血生化檢驗(yàn)結(jié)果比較()

表4 對(duì)照組與給藥組小鼠血生化檢驗(yàn)結(jié)果比較()

注：與對(duì)照組比較,aP＜0.05

4.2.4 烏黃潤(rùn)腸丸對(duì)小鼠器官的毒副作用 給藥組小鼠肝、腎、腸組織病理學(xué)蘇木素-伊紅(HE)染色結(jié)果顯示：腸道黏膜未見(jiàn)明顯水腫腸黏膜結(jié)構(gòu)清晰,肝臟組織內(nèi)未見(jiàn)肝細(xì)胞明顯水腫及脂肪樣變,腎臟組織未見(jiàn)腎臟細(xì)胞明顯水腫及腎小球結(jié)構(gòu)完整。結(jié)果表明烏黃潤(rùn)腸丸對(duì)小鼠的肝、腎、腸等器官無(wú)毒副作用。見(jiàn)圖1。

圖1 小鼠腸(A)、肝(B)、腎(C)組織病理學(xué)HE 染色結(jié)果

5 討論

既往研究發(fā)現(xiàn),內(nèi)源性阿片肽可通過(guò)阻滯腸道神經(jīng)元的活動(dòng)繼而阻止腸道的推性蠕動(dòng)和腺體的分泌［9,10］；因此,當(dāng)外源性阿片與受體結(jié)合,阻止興奮性和抑制性神經(jīng)遞質(zhì)的分泌,將影響腸道節(jié)律性收縮、增加腸道水分重吸收,最終導(dǎo)致胃腸道功能紊亂、大便干結(jié)及排便困難［11］。因此,阿片類藥物導(dǎo)致的胃排空延遲、腹絞痛、腹脹、腸排空延遲、大便干結(jié)等癥狀,可再次加重惡心、嘔吐、排便困難、排便疼痛、排便不盡感、排便梗阻感等［12］。目前,減少阿片類用量、控制阿片類藥物引起的不良反應(yīng)、更換阿片類藥物、改變給藥途徑是降低阿片類不良反應(yīng)的主要手段,但對(duì)部分OIC 患者效果不佳。同時(shí),阿片類藥物減量將導(dǎo)致癌痛得不到有效控制,有違于WHO 提出的癌痛控制目標(biāo)。美國(guó)國(guó)立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)(NCCN)疼痛指南中推薦預(yù)防性使用瀉藥治療OIC,如聚乙二醇、乳果糖、納絡(luò)酮緩釋劑、甲基納曲酮、阿維莫潘等,國(guó)內(nèi)常用中藥制劑麻仁丸對(duì)癥治療［13］。

除阿片藥物直接導(dǎo)致的胃腸道功能紊亂性排便困難,癌癥晚期患者多并發(fā)脫水、電解質(zhì)紊亂、腫瘤相關(guān)性機(jī)械性梗阻及精神緊張等便秘相關(guān)危險(xiǎn)因素。因此,不僅需要改善便秘癥狀,糾正腸道功能紊亂,同時(shí)需要改善機(jī)體狀態(tài),從而緩解OIC。本組方及制劑根據(jù)阿片類藥物致便秘的特點(diǎn)和機(jī)制,并結(jié)合改善全身機(jī)體組方,以何首烏、柏子仁、當(dāng)歸、大黃等具有具潤(rùn)腸通便和刺激性作用的瀉下類藥物改善便秘癥狀為君藥,佐以養(yǎng)陰生津類藥物熟地黃、知母等,調(diào)節(jié)交感神經(jīng)和內(nèi)分泌的功能,使代謝亢進(jìn)狀態(tài)有所緩解,并能促進(jìn)淋巴母細(xì)胞的轉(zhuǎn)化,增加白細(xì)胞及血小板,從而提高機(jī)體免疫功能［14］；再輔以清熱解毒藥物黃芩、黃柏等,對(duì)于熱毒蘊(yùn)結(jié)的腫瘤患者,通過(guò)抑菌、對(duì)抗多種微生物毒素及其他毒素,改善腸道菌群微環(huán)境,維持及保護(hù)腸道功能［15］。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,烏黃潤(rùn)腸丸可以明顯縮短阿片類藥物致小鼠便秘的小鼠首次排便時(shí)間,并且明顯增加小鼠排便次數(shù)和排便重量,治療效果優(yōu)于麻仁丸陽(yáng)性對(duì)照組；同時(shí),單次給藥急性毒性實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明,在劑量范圍內(nèi),烏黃潤(rùn)腸丸對(duì)小鼠的肝、腎、腸均無(wú)明顯的毒副作用。

綜上所述,烏黃潤(rùn)腸丸是一種能有效改善OIC 的復(fù)方中藥制劑,本研究為進(jìn)一步中藥制劑轉(zhuǎn)化及臨床應(yīng)用提供了支撐。