王富剛

漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校食品營養(yǎng)系河南省休閑食品工程技術(shù)研究中心（漯河 462002）

丁香為丁香屬植物，是落葉灌木或小喬木，主要分布于歐洲東南部、東北亞和中國[1]。丁香在食品和醫(yī)藥中具有重要應(yīng)用價值[2]，丁香花和葉可提制芳香油和高級香料，丁香花和葉也可制作丁香茶。丁香具有溫中降逆、補腎助陽、抗菌、消炎、降壓、降溫、鎮(zhèn)咳祛痰和保肝利膽之功效[3-4]。丁香油還可作為化妝品香料，在市場上需求量巨大[5]。

丁香油含有豐富的必需脂肪酸，具有較高的營養(yǎng)價值，其脂肪酸成分主要為油酸和亞油酸[6]。丁香油具有特殊的香味，常用于罐頭、糖漿、果脯等食品的調(diào)味[7]。丁香油同時具有醫(yī)療保健作用，丁香油常在牙科作為鎮(zhèn)痛和消毒藥，丁香油還具有降血脂、抗動脈粥樣硬化等活性[6]。因此，丁香油不僅含有豐富的必需脂肪酸，具有較高的營養(yǎng)價值，而且具有很高的醫(yī)療保健價值。對丁香油成分的研究開展較多，但其毒理學(xué)研究尚屬空白，為丁香油的應(yīng)用帶來很大不確定性。試驗依據(jù)GB 15193.1—2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品安全性毒理學(xué)評價程序》，對丁香油進行急性毒性、遺傳毒性及30 d喂養(yǎng)試驗，評價丁香油的毒理學(xué)作用和食用安全性，為丁香油的開發(fā)應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

丁香油（實驗室自制）；小白鼠（BALB/C）、大白鼠（SD）（SPF級，湖南斯萊克景達實驗動物有限公司）；環(huán)磷酰胺（分析純，蘇瑞醫(yī)藥化工有限公司）；純凈水（實驗室自制）。

1.2 儀器與設(shè)備

BT3000-plus型全自動生化分析儀（意大利Biotecnlca Instruments公司）；KX-21全自動血液分析儀（日本Sysmex東亞公司）。

1.3 試驗方法

1.3.1 小白鼠急性毒性試驗

選體質(zhì)量18～22 g健康小白鼠40只，雌雄各半，各分為2組，共4組，禁食16 h后，按15 g/kg BW的劑量經(jīng)口1次給丁香油，以蒸餾水為對照組。觀察14 d，記錄小鼠生長活動情況、中毒癥狀及死亡情況[8]。

1.3.2 小白鼠精子畸形試驗

選雄性成熟小白鼠30只，體質(zhì)量18～22 g，按體質(zhì)量隨機分為5組，設(shè)低、中、高3個劑量組分別為1.25，2.50和5.00 g/kg BW，同時設(shè)陰性對照組（蒸餾水5 g/kg BW）和陽性對照組（環(huán)磷酰胺0.04 g/kg BW）。每天經(jīng)口灌胃給丁香油2次，連續(xù)5 d，繼續(xù)喂養(yǎng)2周，處死動物，制備精子標(biāo)本，伊紅染色后高倍鏡下檢查[9]，每只動物高倍鏡下觀察1 000個精子，記錄畸形精子數(shù)。

1.3.3 大白鼠30 d喂養(yǎng)試驗

選體質(zhì)量160～180 g健康大白鼠80只，雌雄各半，分為8組，雌雄各4組，分別設(shè)1.25，2.50和5.00 g/（kg BW·d）3個低、中、高劑量組，同時設(shè)陰性對照組蒸餾水5 g/（kg BW·d）。連續(xù)30 d經(jīng)口灌胃給丁香油，單籠喂養(yǎng)，不限制飲水。然后進行血液學(xué)、血清生化學(xué)及臟器系數(shù)測定。血液學(xué)和血液生化學(xué)指標(biāo)由血細胞分析儀和生化分析儀測定[10]。

1.3.4 統(tǒng)計學(xué)分析

數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS 22.0進行處理。試驗組與對照組的差異顯著性分析采用成對樣本t檢驗[11]。

2 結(jié)果與分析

2.1 急性毒性試驗結(jié)果

試驗按照一次最大限量法經(jīng)灌胃15 g/kg BW的丁香油，試驗結(jié)果見表1。

表1 丁香油對小白鼠的經(jīng)口急性毒性試驗

在2周飼養(yǎng)觀察期內(nèi)，對照組和試驗組小白鼠全部正常，活動、進食、行為等未見異常情況，小白鼠死亡數(shù)和死亡率均為0%。按急性毒性分級標(biāo)準(zhǔn)，判定該受試物丁香油為實際無毒物[12]。

2.2 小白鼠精子畸形試驗結(jié)果

小白鼠精子畸形試驗結(jié)果見表2。

陰性對照組（蒸餾水）的精子畸形率為1.05%，陽性對照組（環(huán)磷酰胺組）的精子畸形率為4.48%，陽性對照組對小白鼠生殖細胞有極顯著的遺傳毒性（p＜0.01）。試樣低、中、高3個劑量組的精子畸形率分別為1.07%，1.11%和1.15%，各劑量組與陰性對照組的小白鼠精子畸形率之間沒有顯著的差異（p＞0.1），丁香油各劑量組灌胃處理小白鼠后，精子畸形率均處于正常范圍[13]，說明小白鼠精子的畸形率與丁香油的劑量無相關(guān)性。

表2 丁香油對小白鼠精子畸形率試驗

2.3 大白鼠30 d喂養(yǎng)試驗結(jié)果

2.3.1 大白鼠體質(zhì)量變化結(jié)果

丁香油30 d喂養(yǎng)后大白鼠體質(zhì)量測定結(jié)果見表3。

在30 d喂養(yǎng)期間，大白鼠未見異常行為，無死亡發(fā)生。與對照組大白鼠體質(zhì)量增長趨勢相比，雌、雄大白鼠各劑量試驗組動物體質(zhì)量增加量與對照組差異不顯著（p＞0.05），且與劑量相關(guān)性不顯著（p＞0.05），說明丁香油在營養(yǎng)上不影響大白鼠正常的生長需要。

表3 丁香油對大白鼠體質(zhì)量的影響（均值±標(biāo)準(zhǔn)差）

2.3.2 血液學(xué)檢查結(jié)果

丁香油30 d喂養(yǎng)后大白鼠血液學(xué)指標(biāo)血紅蛋白（HB）、紅細胞（RBC）、白細胞（WBC）測定結(jié)果見表4。

丁香油試驗組雌雄大白鼠的血紅蛋白、紅細胞、白細胞含量與對照組差異均不顯著（p＞0.05），試驗結(jié)果均在正常值范圍內(nèi)，說明30 d口服丁香油對大白鼠常規(guī)血液學(xué)指標(biāo)沒有影響。

2.3.3 血液生化學(xué)檢查結(jié)果

丁香油30 d喂養(yǎng)后大白鼠血液生化指標(biāo)谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、血清白蛋白（ALB）、總蛋白（TP）、血清尿素氮（BUN）、肌酐（CRE）、總膽固醇（TC）、血糖（GLU）、甘油三酯（TG）測定結(jié)果見表5。

試驗組不同劑量丁香油喂養(yǎng)雌雄大白鼠30 d后，所測雌雄各組大白鼠的生化指標(biāo)谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、血清白蛋白、總蛋白、血清尿素氮、肌酐、總膽固醇、血糖、甘油三酯，與對照組差異均不顯著（p＞0.05），且不同劑量試驗組間也無顯著差異，說明各血液生化指標(biāo)與丁香油不同劑量間無顯著相關(guān)性，指標(biāo)數(shù)值均在正常參考范圍內(nèi)。這說明30 d口服丁香油對大白鼠血液生化學(xué)指標(biāo)沒有影響。

表4 丁香油對大白鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響試驗

表5 丁香油對大白鼠血液生化指標(biāo)的影響試驗

2.3.4 對臟器質(zhì)量以及臟體比的影響

丁香油30 d喂養(yǎng)大白鼠后，臟器質(zhì)量和臟體比測定結(jié)果見表6。

由表6試驗數(shù)據(jù)可知，雌雄大白鼠受試物丁香油各劑量組與陰性對照組比較，各組的臟器質(zhì)量及其心體質(zhì)量比、肺體質(zhì)量比、肝體質(zhì)量比、脾體質(zhì)量比、腎體質(zhì)量比與對照組比較未見異常，各項指標(biāo)試驗結(jié)果均在正常范圍內(nèi)，且不同劑量各組的臟器質(zhì)量及臟體比差異不顯著（p＞0.05）。這說明30 d口服丁香油對大白鼠臟器沒有影響。

大白鼠30 d喂養(yǎng)試驗中，生化、血液學(xué)指標(biāo)和器官組織形態(tài)與對照組相比無顯著差異，丁香油的最大無作用劑量大于5.0 g/kg BW，為人體推薦攝入量的150倍。因此，丁香油無急性毒性、亞急性毒性和遺傳毒性，具有較高的食用安全性。

表6 丁香油對大白鼠臟器質(zhì)量和臟體比的影響試驗

3 結(jié)論

丁香油的毒理學(xué)試驗表明，丁香油的LD50＞15.0 g/kg BW，按急性毒性分級標(biāo)準(zhǔn)判定丁香油為無毒級別。遺傳毒性試驗為陰性，表明丁香油無致突變作用。30 d喂養(yǎng)丁香油對大白鼠體質(zhì)量、血液生化指標(biāo)、臟器質(zhì)量和臟體比均無顯著影響，指標(biāo)均在正常參考范圍內(nèi)。因此，丁香油無急性毒性、亞急性毒性和遺傳毒性，具有較高食用安全性。