■劉敏杰 楊 傲 王煥斌 賈思凡 劉 耘 齊德生

（華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖北武漢430070）

某地區(qū)多家蛋雞養(yǎng)殖場先后出現(xiàn)母雞癱腿及大量生產(chǎn)軟殼蛋現(xiàn)象，經(jīng)過調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，他們均更換并使用了同一石粉廠家提供的一批石粉，懷疑蛋雞癱腿及產(chǎn)生軟殼蛋的原因與該批石粉有關(guān)。文章經(jīng)化學(xué)分析對該“可疑石粉”致蛋雞產(chǎn)生軟殼蛋及癱腿的原因進(jìn)行了探析，并經(jīng)過了動物試驗(yàn)驗(yàn)證，以便為蛋雞配合飼料生產(chǎn)中優(yōu)質(zhì)石粉的選擇提供科學(xué)依據(jù)。軟殼蛋比正常雞蛋的蛋殼厚度要薄，而雞蛋蛋殼成分主要是碳酸鈣，所以，軟殼蛋主要是因?yàn)樾纬傻皻さ拟}元素缺乏[1]。石粉作為飼料原料中重要的鈣源，其在產(chǎn)蛋禽配合飼料中占比可達(dá)8%。石粉除含有豐富的鈣外，可能還攜帶著砷、鉛、鉻等有害重金屬元素及鎂、錳元素等，均會對蛋雞生產(chǎn)造成影響[2-3]。本研究調(diào)查發(fā)現(xiàn)，雖然可疑石粉是造成蛋雞癱腿和產(chǎn)軟殼蛋的原因，但蛋雞配合飼料中鈣含量水平并不太低，說明該可疑石粉中可能存在某種或多種化學(xué)物質(zhì)在起作用。因此，本研究首先對可疑石粉的化學(xué)成分進(jìn)行分析，再經(jīng)動物飼養(yǎng)試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。通過試驗(yàn)，探明可疑石粉導(dǎo)致母雞產(chǎn)軟殼蛋的原因，為石粉在產(chǎn)蛋雞配合飼料中的應(yīng)用及軟殼蛋的預(yù)防提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

可疑石粉：致蛋雞產(chǎn)生軟殼蛋及癱腿的同一批次石粉。

硫酸鎂：分析純。

1.2 試驗(yàn)動物

體況良好的68周齡海蘭褐蛋雞共72只。

2 試驗(yàn)方法

2.1 飼料中鈣含量的測定

2.1.1 高錳酸鉀法和EDTA滴定法

按“飼料中鈣的測定”（GB/T 6436—2018）中高錳酸鉀法和EDTA滴定法分別測定石粉樣品中的鈣含量。

2.1.2 液相-電感耦合等離子體質(zhì)譜儀（ICP-MS）法

①準(zhǔn)確稱取市售正常石粉樣品與待測石粉樣品各1.000 g。

②將試樣放入燒杯中，并依次加入25 mL水與加入25 mL鹽酸，混勻后靜置至泡沫消失，于微沸水浴鍋中加熱燒杯30min。

③若溶液基本透明，則進(jìn)行過濾，若溶液仍呈渾濁，再加入25mL鹽酸，繼續(xù)煮沸至溶液清亮再過濾。

④樣品消解完成后冷卻，將消解液全部移入50mL容量瓶，以少量純化水清洗燒杯3次以上，洗液一同并入容量瓶，定容，搖勻。同時做試劑空白。

⑤儀器預(yù)熱，調(diào)諧校正，上機(jī)操作，得到結(jié)果。采用該法在測定鈣含量的同時，還測定出鎂、砷、鉛、鉻等元素的含量。

2.2 動物飼養(yǎng)試驗(yàn)

2.2.1 試驗(yàn)動物分組

試驗(yàn)選取體況良好的68周齡的海蘭褐蛋雞共72只，采用單因素4處理對照設(shè)計法，隨機(jī)分配共設(shè)置4個組別，A組為對照組，B、C、D組均為試驗(yàn)組，每組設(shè)置6個重復(fù)，每個重復(fù)3羽。A組全程飼喂產(chǎn)蛋期的基礎(chǔ)日糧，B、C、D組在基礎(chǔ)日糧中添加硫酸鎂，使鎂元素的添加量分別為2 000、4 000、8 000mg/kg。

2.2.2 日糧組成

基礎(chǔ)飼糧購于武漢某飼料廠生產(chǎn)的產(chǎn)蛋期配合飼料，其營養(yǎng)成分均能滿足產(chǎn)蛋雞的生產(chǎn)需要。其日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

2.2.3 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)在密閉式雞舍內(nèi)進(jìn)行，使用標(biāo)準(zhǔn)化疊層式籠養(yǎng)蛋雞設(shè)備。人工控制光照時間17 h，自然通風(fēng)，自由采食和飲水。各組除飼料中額外的硫酸鎂添加量不同外，其他生產(chǎn)管理?xiàng)l件均相同。經(jīng)過3 d的預(yù)試期，正試期為7 d。

2.2.4 指標(biāo)測定及方法

在正試期伊始的第1 d收集雞蛋，每天下午5：00撿蛋1次，連續(xù)收集7 d并記錄每天的個蛋重生產(chǎn)數(shù)據(jù)，試驗(yàn)結(jié)束后用于計算平均蛋重。在正試期第1 d和第7 d收取2次蛋樣，從每個處理中隨機(jī)選擇7枚蛋，進(jìn)行蛋品質(zhì)測定。

①生產(chǎn)性能測定：蛋重，使用電子秤稱量每天收集的雞蛋，并計算平均蛋重；每天統(tǒng)計每組生成軟殼蛋的數(shù)量并記錄軟殼蛋率。

②蛋品質(zhì)測定：使用日本robotmation公司產(chǎn)多功能蛋品質(zhì)分析儀EMT7300，測量蛋殼強(qiáng)度、蛋重、蛋黃顏色、蛋白高度、哈氏單位。蛋形指數(shù)，使用游標(biāo)卡尺測量蛋樣兩端的距離和蛋中軸處直徑，二者之比即蛋形指數(shù)。

2.3 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計與分析

使用Excel 2016軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的整理與簡單計算，再通過SPSS 26.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差分析，采用Duncan’s法進(jìn)行多重比較，數(shù)據(jù)結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。數(shù)據(jù)差異顯著性檢驗(yàn)結(jié)果用P值表示，P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著。

3 結(jié)果與分析

3.1 不同分析方法對石粉中鈣含量測定結(jié)果（見表2、表3）

表2 石粉中鈣含量測定結(jié)果（%）

表3 ICP-MS法測定結(jié)果

由表2可見，使用ICP-MS法測得的鈣含量為19.24%，EDTA法測定結(jié)果與之相近，而高錳酸鉀滴定法測定結(jié)果明顯偏高，為29.72%。由表3可見，鎂含量為9.74%，其他重金屬元素含量均在“飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)”（GB 13078—2017）的限量范圍內(nèi)。

3.2 日糧中不同鎂含量對蛋雞部分生產(chǎn)性能的影響（見表4）

表4 添加不同含量的硫酸鎂對蛋雞部分生產(chǎn)性能的影響

由表4可知，三個試驗(yàn)組的平均蛋重均高于A組，其中，C組平均蛋重最大，且顯著高于A組（P＜0.05），而B、D組與A組之間的差異不顯著。B組和C組的軟殼蛋率與A組相差不大，但添加量最高的D組生產(chǎn)的軟殼蛋比A組提高了352.01%。日糧中鎂過量，其軟殼蛋率高于A組，而且鎂的含量增加得越多，則越為明顯。

3.3 日糧中不同含量鎂對雞蛋蛋品質(zhì)的影響(見表5)

表5 不同含量硫酸鎂對蛋品質(zhì)的影響

由表5可知，在日糧中添加額外的鎂后，試驗(yàn)組的蛋白高度、哈氏單位、蛋形指數(shù)均有所降低，但差異都不顯著。在蛋黃顏色上，試驗(yàn)組比對照組均值有所提高，但差異也不顯著。值得一提的是，試驗(yàn)C組的蛋白高度、蛋黃顏色與蛋形指數(shù)的平均值為4組中最高，可能是添加4 000 mg/kg鎂后，其對這3項(xiàng)指標(biāo)的增幅作用已接近頂點(diǎn)，再繼續(xù)飼喂過量的鎂，則會導(dǎo)致數(shù)據(jù)下降。另外，試驗(yàn)全期B、C組的蛋殼強(qiáng)度顯著低于A組（P＜0.05），D組的蛋殼強(qiáng)度極顯著低于A組（P＜0.01）。

在生產(chǎn)過程中試驗(yàn)D組產(chǎn)生的軟殼蛋可見圖1。

4 討論

4.1 關(guān)于“石粉”

石粉是養(yǎng)殖和飼料生產(chǎn)中常用的鈣源。優(yōu)質(zhì)石粉以方解石和石灰石為主，外觀上為白色，無明顯可見雜質(zhì)[4]。個別石粉廠家有意或誤將白云石當(dāng)作方解石生產(chǎn)“石粉”，這樣的“石粉”鈣含量低，鎂含量高，在配合飼料中誤用會造成動物健康和生產(chǎn)性能異常。本研究發(fā)現(xiàn)，可疑石粉鎂含量高達(dá)9.74%，經(jīng)動物飼養(yǎng)試驗(yàn)證明，高鎂是導(dǎo)致蛋雞產(chǎn)生軟殼蛋的主要原因。我國現(xiàn)行飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中，對石粉中鈣的含量或砷、鉛、鎘、鉻、汞等有害的重金屬元素的含量做出了規(guī)定，但對鎂含量并無限制性要求，建議在相關(guān)飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)或產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)修訂時，能對石粉中鎂含量做出適當(dāng)規(guī)定。

4.2 不同鈣含量測定方法的差異性

“飼料中鈣的測定”（GB/T 6434—2018）中對飼料原料的鈣含量測定有高錳酸鉀法、EDTA滴定法和原子吸收光譜法三種方法。其中，對石粉原料而言，其鈣含量極大地超過了原子吸收光譜法對鈣元素的檢測限度，所以不適合使用原子吸收光譜法[5]。本研究結(jié)果可見，EDTA滴定法和ICP-MS法測定結(jié)果相近，準(zhǔn)確性高，而高錳酸鉀法測得的鈣含量近似等于ICPMS方法所測得的鈣和鎂兩種元素之和，明顯不符合實(shí)際要求。

造成這一差異的原因，主要是由于高錳酸鉀法中反應(yīng)環(huán)境為酸性，許多金屬離子均能與過量的草酸根離子結(jié)合生成沉淀，在一般的飼料原料中由于鎂、鋁、鐵等金屬元素含量過低，其對結(jié)果的影響可以忽略，但對石粉原料而言，特別是一些假冒石粉，如果鎂等金屬元素含量過高，使用高錳酸鉀法時則無法有效地排除其他金屬離子的干擾，會造成測定結(jié)果明顯偏高。而在EDTA滴定法中，由于鎂在堿性環(huán)境生成了氫氧化鎂沉淀，利用沉淀掩蔽效應(yīng)，阻止了其與EDTA絡(luò)合，令EDTA只選擇鈣一種金屬離子進(jìn)行結(jié)合，保證了測量結(jié)果的準(zhǔn)確性。而ICP-MS分析法是對不同質(zhì)荷比的離子進(jìn)行特異性分析，其結(jié)果從原理上具有更高可靠性。本研究認(rèn)為，對石粉鈣含量分析，EDTA法簡單、快速、花費(fèi)時間短，準(zhǔn)確度較高，更符合實(shí)際檢測需要。

4.3 鎂對蛋雞生產(chǎn)性能和蛋殼品質(zhì)的影響

鎂在蛋禽養(yǎng)殖過程中，是居于鈣、磷之后的重要代謝元素，是禽類生長生產(chǎn)所必需的常量元素之一，在禽類骨骼發(fā)育代謝和蛋殼形成的過程中起重要作用。基于國內(nèi)外研究文獻(xiàn)，學(xué)者普遍認(rèn)為，鎂含量過高或過低都會對雞蛋蛋殼質(zhì)量產(chǎn)生不良影響[6]。

蛋雞高鎂日糧會導(dǎo)致蛋雞脛骨中鎂含量增加，鈣含量降低，導(dǎo)致脛骨抗壓能力降低和骨質(zhì)疏松癥[7]；而且飼喂高鎂日糧后，也會改變雞蛋的蛋殼微結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致蛋殼內(nèi)表面乳頭大小不一，間隙增大，蛋殼外表面裂縫增大，降低蛋殼強(qiáng)度[8]。本研究在正常日糧中添加鎂，證明高鎂可明顯破壞蛋殼質(zhì)量，與前人報道一致。

血液中的鈣離子通過ATP酶轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)運(yùn)輸?shù)降皻は袤w中，并在碳酸酐酶的催化下，合成碳酸鈣，形成蛋殼。至于鎂離子是否會干擾蛋殼腺體上的ATP酶轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)而影響蛋殼質(zhì)量等一系列機(jī)制問題尚待進(jìn)一步研究。

5 小結(jié)

通過對可疑石粉成分分析及動物試驗(yàn)，得出以下主要結(jié)論：

①飼料中高鎂含量會對鈣含量的測定產(chǎn)生干擾；

②日糧中鎂含量過高，對蛋殼質(zhì)量有不良影響，可明顯造成蛋殼強(qiáng)度下降，破殼率增加；

③可疑石粉鎂含量達(dá)9.74%，是造成蛋雞產(chǎn)軟殼蛋的主要原因，生產(chǎn)中應(yīng)加強(qiáng)石粉中鎂含量的監(jiān)控。