邱科先

〔安士制藥（中山）有限公司，廣東 中山 528437〕

熊去氧膽酸膠囊是臨床上治療固醇性膽囊結(jié)石、膽汁淤積性肝病及膽汁返流性胃炎等疾病的常用藥。我國(guó)的醫(yī)藥市場(chǎng)上有很多熊去氧膽酸類藥品（大多是片劑），其藥物成分與該藥的原研藥品之間存在一定的差異。在本世紀(jì)初，我國(guó)藥監(jiān)總局批準(zhǔn)從國(guó)外進(jìn)口該藥的原研藥品。但這類進(jìn)口藥品的售價(jià)較高，給患者帶來較大的經(jīng)濟(jì)壓力。為了減輕患者的負(fù)擔(dān)，讓更多的患者能服用到藥效好、價(jià)格低、副作用小的熊去氧膽酸類藥物，我公司仿照該藥的原研藥品優(yōu)思弗膠囊對(duì)熊去氧膽酸膠囊進(jìn)行了制備。在制備熊去氧膽酸膠囊的過程中，我們發(fā)現(xiàn)，用不同的粉碎工藝制備的熊去氧膽酸膠囊原料，其中有關(guān)物質(zhì)的體外溶出度存在很大的差異[1]。在本次研究中，我們對(duì)熊去氧膽酸膠囊原料的粉碎工藝進(jìn)行了探討，并分析采用不同的粉碎工藝對(duì)該藥中有關(guān)物質(zhì)體外溶出度的影響。

1 制備熊去氧膽酸膠囊的實(shí)驗(yàn)儀器

制備熊去氧膽酸膠囊時(shí)所需要的實(shí)驗(yàn)儀器見表1。

表1 制備熊去氧膽酸膠囊的實(shí)驗(yàn)儀器及說明

2 熊去氧膽酸膠囊的處方說明、產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)及處方工藝

2.1 熊去氧膽酸膠囊的處方說明及產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)

熊去氧膽酸膠囊的處方說明見表2，該藥的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)見表3

表2 熊去氧膽酸膠囊的處方說明（按1000粒計(jì)）

表3 熊去氧膽酸膠囊的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)

2.2 熊去氧膽酸膠囊的處方工藝

取300 g制備熊去氧膽酸膠囊的原料，將其分成10份，分別用高速萬能粉碎機(jī)、錘式粉碎機(jī)、低溫粉碎機(jī)、行星式球磨機(jī)、氣流粉碎機(jī)五種粉碎機(jī)對(duì)其進(jìn)行粉碎處理[2]。處理完畢后，將其中有關(guān)物質(zhì)合格的原料與處方填充劑均勻地混合在一起，然后加入黏合劑進(jìn)行制粒[3]。制粒完成后，在60℃的環(huán)境下對(duì)制備好的藥物進(jìn)行干燥處理。最后，將經(jīng)過干燥處理的藥物灌裝成膠囊，并進(jìn)行包裝。

3 對(duì)用不同粉碎工藝制備的熊去氧膽酸膠囊原料中的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)

3.1 進(jìn)行波長(zhǎng)檢測(cè)

嚴(yán)格按照處方取用熊去氧膽酸對(duì)照品，并用甲醇將其制備成濃度為3 mg/mL的溶液。用紫外分光光度計(jì)（UV）對(duì)所得的溶液進(jìn)行掃描，掃描的波長(zhǎng)為200～400 nm。由于熊去氧膽酸的最大吸收波段為205 nm，故該波長(zhǎng)被看作高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）的檢測(cè)波長(zhǎng)[4]。

3.2 進(jìn)行溶液配制

嚴(yán)格按照處方配制系統(tǒng)適用性溶液、膽酸對(duì)照品溶液、7-酮基膽石酸對(duì)照品溶液、鵝去氧膽酸對(duì)照品溶液、膽石酸對(duì)照品溶液、其他雜質(zhì)對(duì)照品溶液和供試品溶液。

3.3 確定色譜條件及進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

用Luna C18色譜柱，用乙腈-0.001 mol·L-1為流動(dòng)相，流速為1.0 mL·min-1，柱溫為40℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為205 nm，進(jìn)樣量為30μl。取系統(tǒng)適用性溶液，按以上的色譜條件進(jìn)樣。

3.4 進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)測(cè)定

取供試品溶液和有關(guān)物質(zhì)的對(duì)照品溶液，在上述的色譜條件下進(jìn)行測(cè)定。有關(guān)物質(zhì)的選用標(biāo)準(zhǔn)為：膽酸含量在0.5%以下，7-酮基膽石酸含量在0.4%以下，鵝去氧膽酸含量在1.0%以下，膽石酸含量在0.1%以下[5]。在供試品溶液中，除上述物質(zhì)以外，其他雜質(zhì)的總量在0.5%以下。詳見表4。

表4 用不同粉碎工藝制備的熊去氧膽酸膠囊原料中有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)結(jié)果

由表4可知，在處理制備熊去氧膽酸膠囊的原料時(shí)，將高速萬能粉碎機(jī)、錘式粉碎機(jī)、低溫粉碎機(jī)的工作時(shí)間分別設(shè)定為1 min、3 min、7 min，會(huì)導(dǎo)致所得物中的有關(guān)物質(zhì)中的總雜增加明顯。用行星式球磨機(jī)、氣流粉碎機(jī)進(jìn)行處理時(shí)，所得物中有關(guān)物質(zhì)的含量變化不大[6]。因此，在本次研究中，僅將用行星式球磨機(jī)和氣流粉碎機(jī)處理的熊去氧膽酸膠囊原料用于該藥的制備，并對(duì)熊去氧膽酸膠囊原料中有關(guān)物質(zhì)的體外溶出度進(jìn)行評(píng)價(jià)。

4 對(duì)熊去氧膽酸膠囊原料中有關(guān)物質(zhì)的體外溶出度進(jìn)行評(píng)價(jià)

4.1 色譜條件

取空白溶出介質(zhì)和自制的熊去氧膽酸溶出液，分別進(jìn)樣，并記錄色譜。

4.2 線性范圍

取熊去氧膽酸膠囊原料，嚴(yán)格按照要求用溶出介質(zhì)將其溶解制備成不同濃度的溶液，然后按照上述的色譜條件（見3.3）對(duì)溶液進(jìn)行測(cè)定，得出在0.01～0.50 mg/mL的濃度范圍內(nèi)，熊去氧膽酸的線性關(guān)系良好。

4.3 進(jìn)行精密度試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)和回收率試驗(yàn)

嚴(yán)格按照規(guī)定對(duì)熊去氧膽酸溶液進(jìn)行精密度試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)和回收率試驗(yàn)。檢驗(yàn)儀器的精密度、按照上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定的重復(fù)性、穩(wěn)定性、熊去氧膽酸的回收率，以確保檢測(cè)的有效性。

4.4 溶出介質(zhì)的選擇

參照原研藥品優(yōu)思弗的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，選用pH為7.5的磷酸鹽緩沖液（PSB）作為溶出介質(zhì)。熊去氧膽酸在該緩沖液中的溶解度為0.992 mg/mL，溶出介質(zhì)的體積為900 mL，符合熊去氧膽酸的漏槽條件。

4.5 溶出度的測(cè)定

取適量的熊去氧膽酸膠囊原料，按照我國(guó)藥典中規(guī)定的溶出測(cè)定法，以900 mL pH為7.5的PSB作為溶出介質(zhì)，然后在6個(gè)時(shí)間點(diǎn)提取溶液（見表5），每次提取5 mL，并進(jìn)行0.45 μm的過濾，然后將續(xù)溶液作為供試品溶液。嚴(yán)格按照要求取熊去氧膽酸對(duì)照品溶液，向其中加入氫氧化鈉溶液進(jìn)行溶解，并用pH為7.5的PSB溶解液進(jìn)行稀釋。稀釋后，每1 mL的溶液中含有0.28 mg的對(duì)照品溶液。分別選取50μL的上述兩種溶液，按照上述的色譜條件（見3.3）進(jìn)樣測(cè)定，并用外標(biāo)法以峰面積計(jì)算累計(jì)的溶出度。

表5 用不同的粉碎工藝制備的熊去氧膽酸膠囊體外溶出度的對(duì)比

由表5可知，用不同的粉碎工藝得到的熊去氧膽酸膠囊原料粒徑存在很大的差異。用行星式球磨機(jī)粉碎3 min、5 min、用氣流粉碎機(jī)粉碎所得的熊去氧膽酸膠囊原料制成的藥品，其中有關(guān)物質(zhì)的體外溶出度基本符合原研藥品的標(biāo)準(zhǔn)。其中，用以行星式球磨機(jī)粉碎3 min所得的熊去氧膽酸膠囊原料制成的藥品，其體外溶出度與原研藥品的擬合度最高。因此，該工藝是熊去氧膽酸膠囊原料最佳的處理工藝[7]。氣流粉碎方式也基本上可以達(dá)到相似結(jié)果，但效率相對(duì)低一些。

4.6 粒徑

利用馬爾文2000激光粒度儀分別對(duì)熊去氧膽酸的普通原料藥、粉碎原料、參比品、研制品及穩(wěn)定性樣品的晶型進(jìn)行研究，結(jié)果顯示，其原料藥、研制品與參比品的晶形、粒徑一致。下圖附普通原料和微粉原料粒度分布檢測(cè)部分結(jié)果

原料批號(hào) 粒度分布測(cè)定結(jié)果(μm)批號(hào) d（0.1） d（0.5） d（0.9）X12006，普通原料 3.865 20.812 82.578 D19001 0.816 5.214 20.501 D19002 0.844 5.296 20.537

4.7 晶型

應(yīng)用《中華人民共和國(guó)藥典》（2015年版四部）中0451 X射線粉末衍射法第二法中的粉末X射線衍射法，分別對(duì)熊去氧膽酸的原料藥、研制品、參比制劑的晶型進(jìn)行研究，結(jié)果顯示，熊去氧膽酸的原料藥、研制品和參比制劑的晶型一致。參比制劑的批號(hào)為18B01832L，研制品的批號(hào)為G00119R。

4.8 一致性評(píng)價(jià)

參照日本橙皮書設(shè)定的熊去氧膽酸的溶出條件、BP2016熊去氧膽酸膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及優(yōu)思弗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的溶出條件，得出溶出介質(zhì)條件。設(shè)定取樣的時(shí)間點(diǎn)、測(cè)定方法，得出熊去氧膽酸膠囊自制品與市售原研藥品優(yōu)思弗在四種介質(zhì)中溶出度的測(cè)定結(jié)果。詳見表6。

表6 熊去氧膽酸膠囊自制品與市售原研藥品優(yōu)思弗在四種介質(zhì)中溶出度的測(cè)定結(jié)果

由表6可知，熊去氧膽酸膠囊自制品與原研藥品優(yōu)思弗在四種不同溶出介質(zhì)中的F2因子均大于50（其中有兩個(gè)介質(zhì)溶出太低，不計(jì)算F2），表明這兩種藥品的溶出曲線具有很高的相似性，其體外溶出行為基本一致。

5 討論

熊去氧膽酸膠囊原料的粉碎工藝是仿制其原研藥品優(yōu)思弗的關(guān)鍵。而且，用不同的粉碎工藝對(duì)熊去氧膽酸膠囊的原料進(jìn)行處理后，所得物中有關(guān)物質(zhì)的含量存在較大的差異。用球磨機(jī)、氣流粉碎機(jī)等較為溫和的粉碎工藝對(duì)熊去氧膽酸膠囊原料進(jìn)行處理后，所得物中有關(guān)物質(zhì)增加的幅度較小，基本符合規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)。用高速萬能粉碎機(jī)等粉碎工藝對(duì)熊去氧膽酸膠囊原料進(jìn)行處理后，由于粉碎的方式較為劇烈，所得物中有關(guān)物質(zhì)的含量有時(shí)規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)[8]。

用相同的粉碎工藝（如行星式球磨機(jī)粉碎工藝）對(duì)熊去氧膽酸膠囊的原料進(jìn)行處理時(shí)，設(shè)定的粉碎時(shí)間不同，所得物中有關(guān)物質(zhì)的平均粒徑、分布寬度均存在明顯的差異[9]。因此，在本次研究中，我們著重對(duì)用球磨機(jī)和氣流粉碎機(jī)這兩種粉碎工藝處理的熊去氧膽酸膠囊原料，用四種介質(zhì)進(jìn)行溶出度的測(cè)定。對(duì)熊去氧膽酸膠囊自制品與市售原研藥品優(yōu)思弗在四種介質(zhì)中的溶出度進(jìn)行一致性評(píng)價(jià)的結(jié)果表明，用行星式球磨機(jī)粉碎3 min的工藝所得的熊去氧膽酸膠囊原料配制而成的熊去氧膽酸膠囊，其中有關(guān)物質(zhì)的體外溶出度與由德國(guó)?？酥扑幑旧a(chǎn)的原研藥品優(yōu)思弗相一致。這說明，該工藝是熊去氧膽酸膠囊原料最佳的粉碎工藝，用該工藝可制備出高質(zhì)量的熊去氧膽酸膠囊。