吳曉玲，李力強(qiáng)，吳偉斌，張貴鋒，楊 堅(jiān)

（廣東省肇慶醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，廣東 肇慶 527400）

肝硬化（hepatic cirrhosis，HC）是各種病因長(zhǎng)期作用于肝臟，引起肝臟彌漫性纖維化、假小葉形成、肝內(nèi)外血管增殖為特征的病理階段，隨病情進(jìn)展可出現(xiàn)腹水、門靜脈高壓、肝性腦病、肝衰竭等并發(fā)癥，可進(jìn)展為肝細(xì)胞癌，每年約有100萬肝硬化患者死亡［1］。肝硬化診斷明確后，應(yīng)盡早開始綜合治療。病因是治療的關(guān)鍵，必要時(shí)抗炎抗肝纖維化，積極防治并發(fā)癥［2］?！陡斡不\治指南》（2019版）認(rèn)為，在抗肝纖維化治療中，目前尚無抗纖維化西藥經(jīng)過臨床有效驗(yàn)證，而中醫(yī)中藥發(fā)揮了重要作用［3］。鱉甲消癥丸是廣東省名中醫(yī)李力強(qiáng)教授發(fā)明的一種治療肝病的中藥院內(nèi)制劑（粵藥制字Z20070356，ZL20150670167.3），具有活血消癥益氣之功，并在臨床實(shí)際應(yīng)用了30余年。研究表明該藥能有效抗肝纖維化和改善肝炎患者肝功能［4］，為探索其作用靶點(diǎn)和療效機(jī)制，進(jìn)一步提高臨床療效，課題組觀察了活血消癥益氣方（鱉甲消癥丸原方）中藥配方顆粒劑對(duì)肝硬化模型大鼠肝功能、血管內(nèi)皮功能及炎性因子的影響，報(bào)道如下。

1 材 料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選擇SD大鼠50只［湖北省疾控中心動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)SYXK（鄂）2017-0065］為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，雌雄各25只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，隨機(jī)分為空白組10只，造模組40只。造模成功后的大鼠32只，隨機(jī)分為模型組、吡非尼酮、鱉甲煎丸、活血消癥益氣方組，每組8只?？瞻讓?duì)照組8只入組觀察。

1.2 藥物與試劑

中藥配方顆粒（批號(hào)1808001w，華潤(rùn)三九醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn)）、鱉甲煎丸（國(guó)藥準(zhǔn)字Z42020772，國(guó)藥集團(tuán)中聯(lián)藥業(yè)有限公司生產(chǎn)）、吡非尼酮原料藥粉（貨號(hào)EB03028，購(gòu)于上海士鋒生物科技有限公司），高脂飼料（購(gòu)自湖北省疾控中心動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心），四氯化碳（貨號(hào)C805332，購(gòu)自上海麥克林生化科技有限公司），谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、總膽紅素（TBil）檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)C010-2-1、C009-2-1、A045-2-2、A028-2-1、C019-1-1，購(gòu)自南京建成生物工程研究所），總一氧化氮（NO）檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)S0021，購(gòu)自上海碧云天生物技術(shù)有限公司），內(nèi)皮素-1（ET-1）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）ELISA試劑盒（貨號(hào)TLE0560R，購(gòu)自廣州天元生物科技有限公司），腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）ELISA試劑盒（貨號(hào)SEKR-0009，深圳市達(dá)科為生物工程有限公司生產(chǎn)）。

2 方 法

2.1 動(dòng)物造模

參考相關(guān)文獻(xiàn)采用四氯化碳復(fù)合法誘導(dǎo)造模［5］：造模組大鼠給予高脂飼料加5%食用白酒溶液（50度白酒加蒸餾水稀釋而成）進(jìn)行飼養(yǎng)，空白組用普通飼料及蒸餾水進(jìn)行飼養(yǎng)。第1～2周按0.2mL/100g體質(zhì)量給予造模組40%（v/v）的四氯化碳橄欖油溶液灌胃，第3～12周按0.2mL/100g體質(zhì)量給予造模組50%（v/v）的四氯化碳橄欖油溶液灌胃，每周一、周四各給藥1次?？瞻捉M給予等量的橄欖油溶液。每周一大鼠稱重1次，每周給藥劑量根據(jù)體質(zhì)量調(diào)整。在第12周末，隨機(jī)選擇正常組、造模組大鼠各2只，烏拉坦麻醉后，下腔靜脈取血檢測(cè)大鼠血清AST、ALT含量，觀察大鼠肝臟腫脹度，取肝組織進(jìn)行HE染色及Masson染色。對(duì)比空白組及造模組指標(biāo)，確定造模是否成功。

2.2 干預(yù)方法

大鼠每日給藥劑量參考《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》進(jìn)行換算。

吡非尼酮組按照120mg/kg劑量給予吡非尼酮原藥粉進(jìn)行灌胃干預(yù)治療。

鱉甲煎丸組按照0.9g/kg劑量給予鱉甲煎丸灌胃干預(yù)治療；用小量溫水將藥物研磨為混懸液，加入適當(dāng)體積的溫水配置為灌胃液，再按照1mL/200g體質(zhì)量灌胃。

活血消癥益氣方組給予活血消癥益氣方中藥配方顆粒進(jìn)行灌胃干預(yù)治療。藥用醋鱉甲1.5g（相當(dāng)于飲片15g），醋莪術(shù)1.5g（飲片15g），醋三棱1.5g（飲片15g），西洋參4.5g（飲片15g），炙黃芪1g（飲片10g），醋白芍1.5g（飲片15g），炒白術(shù)1.67g（飲片10g），茯苓1g（飲片10g），生大黃0.5g（飲片5g），生甘草1.25g（飲片7.5g），人工麝香0.5g，配方顆粒融入120mL沸水中震蕩搖勻?yàn)榛鞈乙?，冷卻后按照1.23mL/100g體質(zhì)量灌胃。

空白組、模型組給予等量生理鹽水灌胃。每日干預(yù)1次，連續(xù)干預(yù)8周。

2.3 體質(zhì)量檢測(cè)及癥狀觀察

將1L大燒杯置于電子天平上，去皮后取下，將大鼠置于大燒杯內(nèi)，重新放置在天平上，待大鼠安定后讀取測(cè)量值。每日觀察記錄1次大鼠的進(jìn)食、毛發(fā)色澤、活動(dòng)狀態(tài)等基本情況。

2.4 標(biāo)本采集及指標(biāo)檢測(cè)

肝臟HE及Masson染色：處死大鼠，取大鼠肝臟，置于4%的多聚甲醛中固定24h以上，然后制備成石蠟切片，采用HE染色及Masson染色對(duì)肝組織損傷情況及纖維化程度進(jìn)行檢測(cè)。肝功能指標(biāo)檢測(cè)：烏拉坦麻醉后切開腹部，自大鼠下腔靜脈取血，以肝素抗凝，血樣3000轉(zhuǎn)低溫離心30min，然后按照試劑盒說明書步驟對(duì)血樣進(jìn)行檢測(cè)，所得檢測(cè)結(jié)果換算為酶活力卡門氏單位。血清NO檢測(cè)：大鼠下腔靜脈血置于滅菌的EP管內(nèi)，斜放于冰浴中，血液自然凝固后3000轉(zhuǎn)低溫離心5min，取血清用總NO檢測(cè)試劑盒按照說明書步驟進(jìn)行檢測(cè)。血清ET-1、VEGF檢測(cè)：大鼠下腔靜脈血，以肝素抗凝，血樣3000轉(zhuǎn)低溫離心30min，取血清用ET-1/VEGF ELISA試劑盒按照說明書步驟進(jìn)行檢測(cè)。TNF-α、IL-1β、IL-6檢測(cè)：自大鼠下腔靜脈取血，以肝素抗凝，取血樣3000轉(zhuǎn)低溫離心15min后，按照TNF-α/IL-1β/IL-6 ELISA試劑盒說明書步驟對(duì)血樣進(jìn)行檢測(cè)。

2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3 結(jié) 果

各組大鼠體質(zhì)量結(jié)果比較見表1。模型組大鼠體質(zhì)量顯著高于空白對(duì)照組；模型組大鼠體質(zhì)量升高到第4周開始逐漸下降，空白組、吡非尼酮組、鱉甲煎丸組、活血消癥益氣方組體質(zhì)量持續(xù)上升。

表1 連續(xù)給藥8周各組大鼠體質(zhì)量變化 （g，±s ）

表1 連續(xù)給藥8周各組大鼠體質(zhì)量變化 （g，±s ）

組別 只 第1w 第2w 第3w 第4w 第5w 第6w 第7w空白組 8 352.72± 6.05 367.30± 9.67 380.43±28.60 379.33±36.05 385.68±26.85 398.18±32.87 404.73±35.36模型組 8 458.93±16.89 489.03±34.95 513.30±39.83 518.94± 8.88 511.82±40.63 501.78±40.35 498.90±32.72吡非尼酮組 8 457.68±23.43 484.08±46.01 493.02±58.10 486.90±55.51 496.60±53.16 485.02±47.26 484.18±25.78鱉甲煎丸組 8 465.33±22.66 473.26±21.41 499.56±12.45 488.16±21.41 501.56±22.52 489.70±24.12 507.35±22.23活血消癥益氣方組 8 440.17±15.09 460.97±43.19 453.78±36.29 445.43±29.78 451.63±35.28 443.85±37.86 456.03±38.41

各組大鼠肝組織病理切片結(jié)果比較見圖1、圖2。HE染色結(jié)果（圖1）：空白對(duì)照組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)正常，未見假小葉形成；肝細(xì)胞大小一致、核居中，圍繞中央靜脈呈條索狀排列，未見肝細(xì)胞脂肪變性、壞死及其他明顯病理變化；匯管區(qū)未見炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及纖維組織增生。模型組大鼠肝組織內(nèi)出現(xiàn)大片肝細(xì)胞壞死；大量寬厚纖維增生并分割正常的肝小葉，形成大小不等的肝細(xì)胞結(jié)節(jié)即假小葉；假小葉內(nèi)肝細(xì)胞肝索結(jié)構(gòu)模糊，肝細(xì)胞未見異型性，部分細(xì)胞出現(xiàn)脂肪變性；匯管區(qū)大量纖維組織增生并有大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，大量毛細(xì)膽管增生。吡非尼酮組無假小葉形成及肝細(xì)胞壞死。鱉甲煎丸組可見少量肝細(xì)胞壞死，纖細(xì)的纖維組織增生分割正常肝小葉并形成假小葉結(jié)構(gòu)；匯管區(qū)較多的纖維組織增生及毛細(xì)膽管增生?；钛Y益氣方組隱約纖細(xì)的纖維組織增生分割正常肝小葉并形成假小葉結(jié)構(gòu)；匯管區(qū)少量纖維組織增生及毛細(xì)膽管。

圖1 各組大鼠肝組織病理切片HE染色結(jié) 果

Masson染色結(jié)果（圖2）：纖維組織成藍(lán)色?？瞻讓?duì)照組的纖維組織位于匯管區(qū)周邊，未見分割肝小葉纖維組織。模型對(duì)照組匯管區(qū)周邊可見大量的纖維組增生，寬厚纖維組織向周邊肝組織延伸將肝細(xì)胞包繞成大小不等的團(tuán)塊狀即假小葉形成，肝小葉內(nèi)可見大片壞死的肝細(xì)胞。吡非尼酮組和鱉甲煎丸組可見染成藍(lán)色的纖維組織增生，厚度中等并形成假小葉。活血消癥益氣方組纖維組織位于匯管區(qū)周邊，未見分割肝小葉纖維組織。

圖2 各組大鼠肝組織病理切片Masson染色結(jié)果

各組大鼠血清AST、ALT、TP、ALB、TBil水平比較見表2。與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠血清AST、ALT、TP、ALB、TBil差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。經(jīng)過8周的干預(yù)治療，吡非尼酮組、鱉甲煎丸組、活血消癥益氣方組大鼠血清AST、ALT、TBil水平顯著低于模型組（P＜0.01），ALB水平顯著高于模型組（P＜0.01），TP水平與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P≥0.05）；活血消癥益氣方組大鼠血清AST、ALT水平顯著低于吡非尼酮組、鱉甲煎丸組（P＜0.01），而ALB、TBil水平與吡非尼酮組、鱉甲煎丸組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P≥0.05）。

表2 各組大鼠AST、ALT、TP、ALB、TBil水平比較 （±s ）

表2 各組大鼠AST、ALT、TP、ALB、TBil水平比較 （±s ）

注：a）P、b）P、c）P、d）P分別表示與空白組、模型組、吡非尼酮組、鱉甲煎丸組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，a）P、b）P、c）P、d）P均＜0.05。

組別 只 AST（U/L） ALT（U/L） TP（g/L） ALB（g/L） TBil（μM）空白組 8 29.24±2.46 20.86±3.50 79.06±3.81 40.50±2.24 6.55±0.44模型組 8 138.00±9.26a） 112.49±5.33a） 63.33±2.70a） 28.95±1.41a） 16.69±1.19a）吡非尼酮組 8 80.58±3.40ab） 62.73±2.59ab ） 65.49±2.91a） 35.21±1.42ab） 12.21±0.60a）鱉甲煎丸組 8 84.68±6.56ab） 57.95±2.24ab） 65.11±3.45a） 35.63± 2.40ab） 11.53±1.14ab）活血消癥益氣方組 8 70.01±3.38abcd） 52.10±2.85abcd） 67.39±2.72a） 33.28±3.44ab） 11.20±1.04ab）

各組大鼠血清NO、ET-1、VEGF水平比較見表3。與空白組比較，模型組血清NO、ET-1、VEGF差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。經(jīng)過8周的干預(yù)治療，吡非尼酮組、鱉甲煎丸組、活血消癥益氣方組大鼠血清NO、ET-1、VEGF均顯著低于模型組（P＜0.05）；活血消癥益氣方組大鼠血清NO顯著低于吡非尼酮組（P＜0.05）；活血消癥益氣方組大鼠血清ET-1、VEGF與鱉甲煎丸組、活血消癥益氣方組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P≥0.05）。

表3 各組大鼠血清NO、ET-1、VEGF水平比較 （±s ）

表3 各組大鼠血清NO、ET-1、VEGF水平比較 （±s ）

注：a）P、b）P、c）P、d）P分別表示與空白組、模型組、吡非尼酮組、鱉甲煎丸組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，a）P、b）P、c）P、d）P均＜0.05。

組別 只 NO（μM） ET-1（pg/mL）VEGF（pg/mL）空白組 8 74.35±3.98 25.34±1.58 27.99±1.00模型組 8 277.19±24.21a） 46.96±2.21a） 79.13±4.78a）吡非尼酮組 8 189.74±24.62ab）40.33±1.98ab） 59.36±2.98ab）鱉甲煎丸組 8 167.94±11.17ab）40.20±3.52ab） 61.21±2.59ab）活血消癥益氣方組 8 160.34±8.69abc） 37.29±1.22ab）58.05±3.71ab）

各組大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6結(jié)果比較見表4。與空白組比較，模型組大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。經(jīng)過8W的干預(yù)治療，吡非尼酮組、鱉甲煎丸、活血消癥益氣方組大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6均顯著低于模型組（P＜0.01）；活血消癥益氣方組大鼠血清TNF-α、IL-1β顯著低于鱉甲煎丸組（P＜0.01），但顯著高于吡非尼酮組（P＜0.01）；活血消癥益氣方組大鼠血清IL-6與鱉甲煎丸組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P≥0.05），與吡非尼酮組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表4 各組大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6結(jié)果比較 （±s ）

表4 各組大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6結(jié)果比較 （±s ）

注：a）P、b）P、c）P、d）P分別表示與空白組、模型組、吡非尼酮組、鱉甲煎丸組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，a）P、b）P、c）P、d）P均＜0.05。

IL-6（pg/mL）空白組 8 47.32±3.27 14.24±1.00 27.18±2.34模型組 8 217.82±11.74a） 55.90±3.93a） 99.56±9.44a）吡非尼酮組 8 102.61±5.24ab） 23.86±2.16ab） 60.79±6.83ab）鱉甲煎丸組 8 179.11±7.71abc） 38.35±2.90abc） 78.69±4.66abc）活血消癥益氣方組 8 136.27±6.51abcd）32.46±2.44abcd）70.51±5.19abc）組別 只 TNF-α（pg/mL）IL-1β（pg/mL）

4 討 論

肝硬化是一種損傷后的修復(fù)反應(yīng)，在這一過程中肝臟星狀細(xì)胞活化是中心環(huán)節(jié)，還包括正常肝細(xì)胞外基質(zhì)的降解，纖維瘢痕組織聚集和血管扭曲變形以及細(xì)胞因子釋放等［3］。本病屬中醫(yī)“鼓脹”“積聚”“脅痛”等范疇，被古代醫(yī)家列為“風(fēng)、癆、鼓、膈”四大頑證之一，為臨床重癥，治療較為困難［6］?！饵S帝內(nèi)經(jīng)》即有鼓脹的記載，如《靈樞·水脹》記載其癥狀有“腹脹，身皆大，大與膚脹等也，色蒼黃，腹筋起”?，F(xiàn)代醫(yī)家大多認(rèn)為肝硬化由肝、脾、腎三臟功能失調(diào)，氣滯、血瘀、水停瘀結(jié)腹中所致［7］，主要治療原則為活血化瘀、扶正補(bǔ)虛、清熱解毒、健脾利濕等［3］。

李力強(qiáng)認(rèn)為，肝硬化屬本虛標(biāo)實(shí)、虛實(shí)夾雜之證，因正氣不足，肝氣郁結(jié)、氣機(jī)不暢，氣滯血瘀、濕濁內(nèi)蘊(yùn)，肝、脾、腎功能失調(diào)，三焦氣化不利，水濕不化，凝聚成痰，導(dǎo)致痰瘀阻絡(luò)、聚水為脹而發(fā)病，治宜活血消癥、健脾益氣、疏肝理氣，并以《太平圣惠方》鱉甲丸為基礎(chǔ)研制了活血消癥益氣的中藥復(fù)方鱉甲消癥丸治療。復(fù)方由醋鱉甲、醋三棱、醋莪術(shù)、人工麝香、西洋參、炙黃芪、醋白芍、炒白術(shù)、茯苓、生大黃、生甘草等組成。醋鱉甲入肝消積、軟堅(jiān)散結(jié)，麝香通竅活絡(luò)、活血消癥，為君藥；醋莪術(shù)與醋三棱活血行氣、消癥止痛，為臣藥；西洋參和炙黃芪補(bǔ)益氣血、扶益正氣，醋白芍柔肝止痛，炒白術(shù)和茯苓健脾益氣、利水祛濕，共為佐藥；生大黃活血化瘀、蕩滌濕熱，生甘草緩急止痛、調(diào)和諸藥，共為使藥。諸藥合用，共奏益氣活血、化瘀消癥之功，標(biāo)本同治。臨床應(yīng)用表明，鱉甲消癥丸對(duì)預(yù)防肝硬化門靜脈高壓食管胃底靜脈破裂出血、抗肝纖維化等有顯著效果［4，8-9］，能明顯改善肝區(qū)疼痛、黃疸、腹水、蜘珠痣、肝掌、舌邊瘀斑、脾腫大等癥狀；顯著降低門靜脈壓力和食管靜脈壓力，改善食管靜脈曲張，預(yù)防食管胃靜脈出血；改善肝纖維化，降低肝內(nèi)血管和門體側(cè)支血管阻力。

研究發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠體質(zhì)量升高到第4周開始逐漸下降，血清AST、ALT、TP、ALB、TBil、NO、ET-1、VEGF、TNF-α、IL-1β、IL-6與空白組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。模型組大鼠肝組織內(nèi)出現(xiàn)大片肝細(xì)胞壞死，大量纖維增生，假小葉形成，假小葉內(nèi)肝細(xì)胞肝索結(jié)構(gòu)模糊，肝細(xì)胞未見異型性。匯管區(qū)大量纖維組織增生并有大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，大量毛細(xì)膽管增生。吡非尼酮是一種新型口服吡啶酮類化合物，臨床研究表明吡非尼酮具有廣譜抗肺、心、肝、腎纖維化及抗炎、抗氧化作用，能夠抑制轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF）-β、TNF-α等多種促纖維化和促炎細(xì)胞因子［10］。近年來實(shí)驗(yàn)證實(shí)［11-13］，吡非尼酮能有效改善肝纖維化大鼠肝臟炎癥、纖維化，可顯著降低受損肝臟組織及血清中TNF-α、IL-1、IL-6等的產(chǎn)生，減輕中性粒細(xì)胞等炎癥細(xì)胞在肝內(nèi)浸潤(rùn)造成的肝損傷，顯著降低血清AST、ALT、TBil含量，認(rèn)為吡非尼酮可能是通過抑制炎癥反應(yīng)阻斷肝纖維化于早期階段。鱉甲煎丸原方出自張仲景的《金匱要略》，由炙鱉甲、阿膠、蜂房等23味中藥組成，具有活血化瘀、軟堅(jiān)散結(jié)之功，為治瘧母、癥瘕等病的主方。臨床大量研究證實(shí)，鱉甲煎丸治療肝硬化療效顯著［14-16］。唐承璐等發(fā)現(xiàn)［17］，鱉甲煎丸能明顯降低肝硬化患者血清AST、ALT、TBil、TNF-α、IL-1β，升高血清ALB，認(rèn)為鱉甲煎丸能減輕肝硬化患者的肝臟炎癥和纖維化。本研究的結(jié)果與此一致，表明吡非尼酮、鱉甲煎丸均能顯著改善肝硬化模型大鼠的肝功能、肝臟炎癥及纖維化。NO是具有擴(kuò)張血管的活性物質(zhì)，肝細(xì)胞嚴(yán)重受損時(shí)導(dǎo)致NO合成增加，過量的NO會(huì)抑制干細(xì)胞合成白蛋白，形成低蛋白血癥，加重腹水；ET-1主要由血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生，肝硬化時(shí)肝細(xì)胞和肝內(nèi)血管增生，使ET-1的分泌增加，引起肝血竇收縮導(dǎo)致肝內(nèi)循環(huán)受阻，肝細(xì)胞缺血缺氧，加重水腫和肝纖維化［18-19］；VEGF及其相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在肝臟炎癥、纖維化發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用，包括促進(jìn)血管生成、肝星狀細(xì)胞（HSC）活化與遷移以及促進(jìn)炎癥、纖維化因子釋放［20］。本研究結(jié)果表明，吡非尼酮組、鱉甲煎丸能顯著降低肝硬化模型大鼠血清NO、ET-1、VEGF水平，進(jìn)一步證實(shí)了這兩個(gè)藥物可有效治療肝硬化。

研究中，經(jīng)過8周的干預(yù)治療，活血消癥益氣方組大鼠肝組織纖維化程度明顯減輕，結(jié)締組織增生顯著減少，肝細(xì)胞炎性浸潤(rùn)程度明顯減輕；血清AST、ALT水平顯著低于吡非尼酮組、鱉甲煎丸組，而ALB、TBil水平與吡非尼酮組、鱉甲煎丸組無差異，表明活血消癥益氣方能更加有效的改善肝硬化模型大鼠肝功能的損傷?；钛Y益氣方組大鼠血清NO水平顯著低于吡非尼酮組，與鱉甲煎丸組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而ET-1、VEGF水平與吡非尼酮、鱉甲煎丸組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明活血消癥益氣方對(duì)肝硬化大鼠血管內(nèi)皮功能相關(guān)因子的影響與吡非尼酮、鱉甲煎丸無明顯差異。活血消癥益氣方組大鼠血清TNF-α、IL-1β水平顯著低于鱉甲煎丸組，兩組的IL-6水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而活血消癥益氣方組大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平顯著高于吡非尼酮組，表明活血消癥益氣方對(duì)肝硬化大鼠炎性因子的影響優(yōu)于鱉甲煎丸，但比吡非尼酮的效果略差。因此，活血消癥益氣方能夠有效改善肝硬化模型大鼠肝功能、抗大鼠肝纖維化和炎癥反應(yīng)，作用機(jī)制可能與調(diào)控血清NO、ET-1、VEGF、TNF-α、IL-1β、IL-6等血管內(nèi)皮功能及炎性因子相關(guān)。

綜上所述，經(jīng)過干預(yù)治療，吡非尼酮組、鱉甲煎丸、活血消癥益氣方組大鼠血清AST、ALT、TBil、NO、ET-1、VEGF、TNF-α、IL-1β、IL-6水平顯著低于模型組，病理切片結(jié)果提示肝纖維化、肝細(xì)胞損害明顯好轉(zhuǎn)，表明3種藥物對(duì)肝硬化大鼠肝功能損傷、肝纖維化和炎性反應(yīng)均能有效抑制或一定程度逆轉(zhuǎn)?；钛Y益氣方對(duì)肝硬化模型大鼠肝功能損害的改善、炎性因子影響優(yōu)于鱉甲煎丸，改善肝功能損害方面與吡非尼酮無顯著差異，而對(duì)炎性因子的影響效果相對(duì)較差。