美洲鰣苗種綠色生產(chǎn)試驗

楊吉平 王韓信 宓華明

(1 上海嘉金特種水產(chǎn)專業(yè)合作社，上海 201800；2 上海市水產(chǎn)研究所，上海市水產(chǎn)技術(shù)推廣站，上海 200433)

美洲鰣(Alosasapidissima)隸屬于鯡形目、鯡科、西鯡屬，主要分布于北美洲大西洋西岸、太平洋海岸和亞洲東南沿海的水域中，是美國重要的野生漁業(yè)資源保護品種，其種群支撐著條紋鱸等北美洲重要的大型經(jīng)濟魚類漁業(yè)資源[1]。作為鰣魚(Tenualosareevesii)的替代品，國內(nèi)自1998年起，由上海市水產(chǎn)研究所率先從美國引進美洲鰣的受精卵進行人工育苗和試養(yǎng)，并于2003年突破了苗種培育和養(yǎng)殖技術(shù)難關(guān)[2]。隨后，國內(nèi)美洲鰣養(yǎng)殖面積日益擴大，現(xiàn)已在全國12個省市形成了一定的養(yǎng)殖規(guī)模，成為國內(nèi)經(jīng)濟效益較高的水產(chǎn)養(yǎng)殖品種之一[3]。

水產(chǎn)養(yǎng)殖綠色發(fā)展是促進水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)轉(zhuǎn)型升級、結(jié)構(gòu)與布局優(yōu)化、滿足市場需求的必由之路[4]。目前我國正在加快推進水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)綠色發(fā)展。美洲鰣養(yǎng)殖利潤豐厚，市場需求大，為美洲鰣綠色養(yǎng)殖的發(fā)展奠定了基礎[5]。但要實現(xiàn)綠色養(yǎng)殖，首先必須解決苗種的綠色生產(chǎn)。在苗種綠色生產(chǎn)的技術(shù)標準方面，《上海市水產(chǎn)養(yǎng)殖綠色生產(chǎn)操作規(guī)程(試行)》[6]和《綠色食品 魚》[7]都有相應的要求。目前國內(nèi)已有一些關(guān)于鰣魚苗種生產(chǎn)技術(shù)的的報道[8-17]，但普遍不符合綠色生產(chǎn)要求。比如：(1)主要依靠廠區(qū)內(nèi)自有適齡親本，親本多樣性差，不利于生產(chǎn)高品質(zhì)苗種；(2)孵化育苗用水未經(jīng)嚴格的消毒處理，育苗水多采用流水，而不是循環(huán)利用，且未進行處理就排放；(3)在自然產(chǎn)卵可行的情況下使用了激素(禁用藥物)進行催產(chǎn)；(4)鰣魚開口餌料大多采用野外捕撈的經(jīng)網(wǎng)目過濾的輪蟲或魚蟲(橈足類)，用這樣的餌料投喂很可能會帶入污染物和病菌；(5)鰣魚轉(zhuǎn)食過程中使用的飼料為非綠色認證的飼料，等等。針對以上問題，本研究對美洲鰣苗種生產(chǎn)技術(shù)進行改進和優(yōu)化，以期歸納和總結(jié)出1套實用的美洲鰣苗種綠色生產(chǎn)技術(shù)，供水產(chǎn)同行參考。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 親本

試驗用親本由美國進口的美洲鰣受精卵孵化培育并養(yǎng)成。2017年6月，自美國西雅圖內(nèi)河捕撈的野生美洲鰣經(jīng)人工授精獲得受精卵，通過浦東口岸進口至上海嘉金特種水產(chǎn)專業(yè)合作社，經(jīng)孵化、培育、飼養(yǎng)成為親本。親本無病無傷、體形飽滿、規(guī)格不一，數(shù)量共計360尾，雌雄比為1∶2.1。

1.1.2 養(yǎng)殖和儲水設施

親本培育在上海嘉金特種水產(chǎn)專業(yè)合作社基地進行。養(yǎng)殖池為20 m ×15 m的長方形水泥池，池的四角為圓形切角，水深0.8 m，并有高度3 m的塑料大棚保溫，保溫棚頂部覆蓋黑色遮陽膜，四周可開啟通風。

蓄水池為30 m × 15 m(長×寬)的混凝土水池，水深3 m。孵化育苗用水經(jīng)漂白粉消毒、沉淀后，由蓄水池泵入8 m ×4 m的長方形循環(huán)水養(yǎng)殖池中。養(yǎng)殖池配備有8 m × 1 m的生物過濾水槽，過濾水槽中有2 m × 1 m的藤棉6塊，毛刷120根，使用100 W的軸流泵驅(qū)動水流循環(huán)。苗種生產(chǎn)結(jié)束后，采集循環(huán)水養(yǎng)殖池中的排放水進行檢測。

開口餌料培育池為直徑為5 m、高1.2 m的圓形水泥池，共8個，每個池均配備微孔增氧設備。基礎營養(yǎng)物質(zhì)為氨基酸肥水膏，由南京海耶斯生物科技有限公司提供，初期用量為1 kg/池，后期酌情添加。培育的開口餌料為蛭輪蟲，種源由上海沁淼生物科技有限公司提供。蛭輪蟲餌料為異養(yǎng)發(fā)酵培養(yǎng)的蛋白核小球藻。需要開口餌料時，用孔徑0.054 mm(300目)的篩網(wǎng)撈取(或濾水)后計量投喂。

開口后的餌料為橈足類。采用面積300～1 200 m2的土底池塘培育，當水溫超過15 ℃后即投入天然糞肥，提高水體肥力，促使橈足類大量繁殖。使用時，用孔徑0.15 mm(100目)的篩網(wǎng)撈取后計量投喂。

1.1.3 集卵、孵化和育苗設備設施

用集卵袋收集卵粒。集卵袋是由多孔布制作的網(wǎng)袋，為避免水流沖壞卵粒，網(wǎng)袋長度須超過100 cm。集卵時將網(wǎng)袋后半部彎曲，保留一定區(qū)域使之不會被水流直接沖到。為避免卵粒被沖出，多孔布的孔徑以1.5 mm為宜。

考慮到美洲鰣自然繁育受精率較低，未受精卵破裂易引發(fā)受精卵感染水霉，故制作了魚卵分離裝置。魚卵分離裝置由直徑50 cm、長100 cm的亞克力管制成，連接直徑20 mm的PVC進水管，進水管上安裝有控制水流的閥門，分離器供水由水箱提供，保持水量穩(wěn)定，流速緩慢。亞克力長管底部與進水管以PVC變徑接頭連接，內(nèi)墊孔徑0.2 mm(80目)的尼龍網(wǎng)片，用于阻止卵粒下沉至進水管中。

魚苗孵化裝置采用特制的加長版鰣魚苗專用孵化桶，孵化桶的材質(zhì)為透明亞克力，直徑15 cm，高100 cm，底部為半球形。孵化桶內(nèi)有1根直徑2.5 cm、延伸到半球形底部的硬管作為進水管，水由進水管流入后在半球形底部分散，然后經(jīng)由孵化桶上部溢出返回育苗水體中。

育苗桶直徑為1.5 m，高0.8 m，底部中央排水。魚苗孵出約10 d后，將魚苗舀入面積30 m2、水深0.5 m的長方形池塘中培育。

1.1.4 飼料和水質(zhì)檢測設備

親本飼料為彩優(yōu)魚用顆粒配合飼料(綠色生資編號：LSSZ-03-1709150025)，主要原料為魚粉、高筋粉、花生粕、魚油、血球蛋白等，飼料的蛋白質(zhì)含量為45%。

魚苗飼料為彩優(yōu)魚苗微粒子配合飼料(綠色生資編號：LSSZ-03-1709150024)，主要原料為進口魚粉、精煉魚油等，其蛋白質(zhì)含量為53%。

快速水質(zhì)檢測儀器為桑普生化生產(chǎn)的氨氮和亞硝酸鹽試劑盒，以及衡欣852型便攜式溶氧儀。水質(zhì)和魚肉品質(zhì)由譜尼測試集團上海有限公司進行檢測并出具報告，其中養(yǎng)殖水和育苗水的水質(zhì)標準為NY/T 391—2013《綠色食品 產(chǎn)地環(huán)境質(zhì)量》[18]，排放水的水質(zhì)標準為SC/T 9101—2007《淡水池塘養(yǎng)殖水排放要求》[19]，魚肉品質(zhì)的標準為NY/T 842—2012《綠色食品 魚》[7]。

1.2 苗種培育

1.2.1 親本培育

2019年10月，選擇3冬齡的后備親本開始暫養(yǎng)培育。冬季保持水溫在10 ℃以上，接受自然光照，自然通風，保證水質(zhì)清新，投喂綠色標準飼料，日投喂量為魚體質(zhì)量的1%，按照天氣和溫度情況適當調(diào)整。每隔2～3 d吸污1次，避免池底長青苔，影響后期卵粒收集。

2020年1月下旬，對親本進行低溫刺激：每天上午7：00打開保溫大棚的卷簾通風，使大棚水溫下降，夜間19：00關(guān)閉大棚卷簾，如此連續(xù)刺激4～5 d，刺激期間不換水。之后正常飼養(yǎng)。

1.2.2 水質(zhì)管理

將河道水經(jīng)水泵抽到蓄水凈化池后，潑灑10 mg/L漂白粉(含氯32%)進行消毒，再經(jīng)24 h沉淀后，方可用于親本養(yǎng)殖、藻類培育和孵化育苗。蓄水凈化池配套的過濾水槽需穩(wěn)定運行15 d以上，確保藤棉和毛刷上已長滿生物膜。用試劑盒檢測水體中的氨氮和亞硝酸鹽含量，當水體氨氮小于0.2 mg/L，亞硝酸鹽小于0.05 mg/L時方可使用。孵化育苗用水需經(jīng)孔徑0.125 mm(120目)的濾網(wǎng)過濾后使用。

1.2.3 餌料培養(yǎng)

2020年4月10日，采購活體輪蟲及蛋白核小球藻，使用輪蟲培養(yǎng)裝置培養(yǎng)待接種輪蟲。4月12日開始在室外圓池內(nèi)培育輪蟲。首先培育小球藻，在持續(xù)晴好天氣條件下，一般加入氨基酸肥水膏和蛋白核小球藻后5～7 d水色轉(zhuǎn)綠，鏡檢可見水體內(nèi)有大量小球藻。然后加入待接種輪蟲，5～7 d后，即會產(chǎn)生大量輪蟲，其間須保持水體溶解氧充足。使用4個圓形池分別培養(yǎng)輪蟲，接種輪蟲時間要有序分開，確保后續(xù)使用時始終有圓形池的輪蟲密度處于高峰期。4月15日開始培育橈足類等較大餌料，在室外土池中施入天然糞肥以提高水體肥力，10～15 d后，橈足類自然大量繁殖，使用時用孔徑0.15 mm(100目)篩網(wǎng)撈取后計量投喂。

1.2.4 親本自然繁殖

2020年4月10日，水溫18 ℃。經(jīng)檢查，后備親本中部分魚腹部逐漸隆起，但仍然較硬，此階段應加強投喂管理，減少水流刺激。20日左右，水溫持續(xù)高于18 ℃，親本逐漸達到性成熟，此階段應減少換水頻率，減少水流刺激，加強投喂管理和排卵監(jiān)測收集。25日收集到零星卵粒，卵粒較小，大多發(fā)白，透明卵粒約占5%。26日，水溫20.5 ℃，從親本中挑選出性成熟雌魚70尾、雄魚120尾放入集卵池。27日，再挑選雌魚55尾、雄魚67尾放入集卵池。成熟的親本體質(zhì)量為450～1 500 g，其中雄魚個體小的為450 g，大的超過1 000 g，雌魚體質(zhì)量均在750 g以上。成熟雌魚腹部柔軟膨起，生殖孔紅潤、腫脹、略松弛。成熟雄魚個體較雌魚小，生殖孔可擠出精液。此期間集卵池應加強水流管理，晚間20：00至翌晨5：00開啟射流式增氧機，對雌親魚進行水流刺激，同時促進受精卵粒向水池中央集中。

1.2.5 集卵與孵化

4月28日起持續(xù)用集卵袋在排水口收集卵粒，收集時間一般于早晨5：00進行。除去糞便垃圾和未吸水膨脹的卵粒后，將卵收集于魚卵分離裝置中分離。每一批卵需分離3次，首次分離在集卵后立即進行，去除不透明卵粒，下午17：00和次日上午8：00再次分離時受精卵已發(fā)育過了原腸期，去除受精不好的死卵。經(jīng)3次分離后，剩余卵粒基本為透明的正常發(fā)育的受精卵。通過對分離前后的卵粒統(tǒng)計，可計算出受精率。

分離后的受精卵放入魚苗孵化裝置中孵化。孵化前用高錳酸鉀對魚苗孵化裝置進行消毒。孵化用水須通過孔徑0.125 mm(120目)的篩絹過濾，以防止混入蛙卵等敵害生物。受精卵孵化期間，保持水溫在18～23 ℃，pH為7.0～8.5，溶解氧充足。魚苗孵化裝置運行時保持流水循環(huán)。使用后的孵化水進入循環(huán)水池塘，經(jīng)生物膜處理后循環(huán)使用，確保其中氨氮和亞硝酸鹽含量符合循環(huán)使用或排放要求。經(jīng)過4～5 d的孵化，可以目測到帶卵黃囊的魚苗。出苗后，收集未破膜的卵粒進行統(tǒng)計，計算孵化率。

1.2.6 魚苗培育

早期魚苗活動能力弱，易受水流影響而被育苗桶溢水口吸附導致死亡，故早期應控制水流速度，及時清理溢水口，避免魚苗損傷。采用育苗池靜水充氣方式育苗，充氣幅度以不造成水面大幅波動為宜。早期魚苗投放密度為3 000～5 000尾/桶。孵出約2 d的魚苗，卵黃囊基本吸收完畢后開始攝食。此時開始投入經(jīng)孔徑0.125 mm(120目)篩網(wǎng)過濾并去除橈足類，然后經(jīng)孔徑0.054 mm(300目)篩網(wǎng)過濾去除廢水后的輪蟲，投喂量以滿足1d攝食為依據(jù)，每天投喂1～2次，下午視進食情況進行補充。孵出約6 d后，可適當補充投喂橈足類，投喂前需使用孔徑0.15 mm(100目)篩網(wǎng)過濾，投喂密度以滿足1天攝食為依據(jù)，每天投喂1～2次，下午視情況進行補充。孵出約10 d后，將魚苗舀入水深0.5 m的循環(huán)水池塘中進行培育。孵出15 d后，魚苗長到2 cm左右，對光線逐漸敏感，在投喂天然餌料的同時，每天逐漸增投配合微粒飼料，至培育后期可完全投喂配合飼料。每天投喂飼料4次，起始量為每次0.8 g/千尾，根據(jù)攝食情況調(diào)整投喂量，每天增加量不超過10%。轉(zhuǎn)食飼料后魚苗開始集群，此時每3 d吸污1次，并及時補充新水。

2 結(jié)果

2.1 養(yǎng)殖水環(huán)境

經(jīng)檢測，本次試驗的水源水、育苗水和排放水均符合相應標準。具體水質(zhì)指標見表1和表2。

表1 育苗水和水源水水質(zhì)情況Tab.1 Measured values of the water indicators in the source and breeding water

表2 排放水水質(zhì)情況Tab.2 Measured values of the water indicators in the outlet water

2.2 幼魚孵化及生長

自4月28日開始有零星卵粒出現(xiàn)，至5月19日結(jié)束。前期白卵比例很高，5月3日起白卵比例明顯降低。繁育期間受精率在5%～32%，平均受精率為15.3%，孵化率在40%～89%，平均孵化率為64.8%。高峰時期(5月3日—5月15日)集卵數(shù)量較多。集卵及孵化情況見表3。

表3 繁育階段卵粒收集及孵化情況Tab.3 Total number of the collected eggs and their rate of fertilization and hatching

由于采用蛋白核小球藻培育的自培輪蟲作為開口餌料，孵出后2～6 d時的魚苗游動姿態(tài)正常，進食動作有力，腹部飽滿度較好，每天使用手電筒檢視育苗桶底部，僅見零星死亡。經(jīng)31 d培育，魚苗體長達到2.5 cm。經(jīng)統(tǒng)計，存活魚苗4.67萬尾，成活率為38.7%。

2.3 魚苗質(zhì)量

經(jīng)檢測，美洲鰣魚苗各項指標均符合《綠色食品 魚》[7]中的相應標準，詳見表4～表5。

表4 美洲鰣魚苗感官檢測結(jié)果Tab.4 Sensory evaluation of Alosa sapidissima fry

表5 美洲鰣魚苗魚肉檢測結(jié)果Tab.5 Measured values of the indicators in the flesh of the fry

3 討論

3.1 水質(zhì)達標是綠色生產(chǎn)的前提

實現(xiàn)苗種的綠色生產(chǎn)需要調(diào)節(jié)好養(yǎng)殖水的水質(zhì)，并能夠處理好養(yǎng)殖尾水的水質(zhì)。目前已報道的有關(guān)美洲鰣孵化及育苗的研究[10,13,20-21]中，對水質(zhì)的關(guān)注主要集中在孵化水溫和溶解氧，尚未見對孵化育苗用水其他指標的全面報道。水體中的污染物不僅會直接在苗種體內(nèi)累積，污染苗種[22-23]，而且還會傳遞到卵子中累積，從而由親本傳遞給子代[24-25]。本試驗中通過消毒、沉淀、濾網(wǎng)過濾、微生物處理等方式對養(yǎng)殖和苗種培育用水進行處理，依據(jù)《綠色食品 產(chǎn)地環(huán)境質(zhì)量》以及SC/T 9101—2007《淡水池塘養(yǎng)殖水排放要求》對水源水、育苗水和排放水的水質(zhì)進行判定，檢測結(jié)果均達標，說明這種生產(chǎn)方式可以保障苗種繁育用水和排放水達到綠色標準。

3.2 綠色飼料是綠色生產(chǎn)的基礎

開口餌料生物培養(yǎng)是美洲鰣育苗的關(guān)鍵技術(shù)之一[9]，餌料受到污染也會影響苗種[26-27]。作為開口餌料的活餌料，其培養(yǎng)方式會影響它的品質(zhì)。傳統(tǒng)的發(fā)塘方法可控性差，底泥、肥料中的污染殘留會通過餌料生物的累積和放大污染苗種，野外采集的餌料生物更有可能受到污染。本研究采用的是集約化培養(yǎng)的輪蟲，能夠保證餌料無污染，為綠色生產(chǎn)提供了綠色開口餌料的保障。但目前尚未有綠色開口餌料生物的標準，本文采用氨基酸肥水膏、天然糞肥和蛋白核小球藻等培育輪蟲和橈足類等生物餌料的方法為制定綠色開口餌料標準提供了一種思路。本試驗中采用的氨基酸肥水膏是小球藻等的肥料，而不是直接供給魚苗的餌料，該類產(chǎn)品目前尚未通過綠色生產(chǎn)資料認證。這也帶來了新的問題：在綠色認證過程中，投入品的綠色認證需要追溯至哪個階段？未進行或者不符合綠色認證的漁業(yè)生產(chǎn)資料投入品可占多少比例？目前對該問題的研究還未見報道，值得深入研究。本研究采用的魚苗微粒子配合飼料和成魚飼料均符合綠色生產(chǎn)資料標準，其中使用微粒子配合飼料與使用其他飼料馴化的苗種在后期培育時間上無明顯差異。但本研究之外，使用綠色成魚飼料養(yǎng)殖的后備親本養(yǎng)殖至商品規(guī)格的時間較之前未使用綠色飼料的要長1～2個月。由于綠色飼料是近年來新出現(xiàn)的飼料品類，配方不盡完善，對養(yǎng)殖后魚的品質(zhì)和養(yǎng)殖時間目前尚未進行系統(tǒng)評估，故建議今后加強對綠色餌料和飼料的研究。

3.3 親本質(zhì)量對受精率和苗種存活率影響

研究表明，親本質(zhì)量對受精卵的受精率和孵化率有較大影響。張呈祥等[10]利用來自美國密西西比河的受精卵孵化養(yǎng)成的2冬齡親本，通過自然繁育獲得的魚卵平均受精率為10%，孵化率為70%～80%，通過人工催產(chǎn)后獲得魚卵的受精率為0～21.5%，孵化率為0～70%。嚴銀龍等[9]2017—2019年連續(xù)3年利用人工繁育的子多代親本開展自然繁育，受精率分別為6.68%，15.8%及8.8%，苗種成活率分別為11.01%、15.00%、15.72%。比較本試驗中的野生親本子一代繁育的相關(guān)數(shù)據(jù)，結(jié)果顯示，野生親本子一代所產(chǎn)的卵具有較高的受精率，培育出的苗種有較高的成活率。這可能是由于在現(xiàn)有技術(shù)條件下，美洲鰣人工培育的子代親本繁殖力有所下降。以后應在親本培育的環(huán)境條件、營養(yǎng)需求等方面加強研究。另外，美洲鰣是洄游性、分批產(chǎn)卵的魚類，人工催產(chǎn)的效果不佳，因此探索在養(yǎng)殖環(huán)境下如何有效促產(chǎn)也是重要的研究課題。

3.4 提早繁育

本次綠色生產(chǎn)試驗中，親本采用自然繁育方式，未經(jīng)過激素催產(chǎn)，育苗水也未進行加溫，以這種方式生產(chǎn)的魚苗一般需要到6月中旬才能培育至商品規(guī)格(體長3 cm左右)，比采用加溫催產(chǎn)繁育的魚苗晚1到1個半月，而此時大多數(shù)養(yǎng)殖戶已完成苗種投放，這將對魚苗銷售帶來困難。因此，建議綠色苗種生產(chǎn)者能夠進一步研究綠色苗種與非綠色苗種的差異，加強宣傳，以苗種品質(zhì)贏得養(yǎng)殖戶青睞。另外采用大棚保溫或其他控溫技術(shù)手段提前生產(chǎn)苗種的辦法是否符合綠色生產(chǎn)的要求也值得探討。

綜上所述，實現(xiàn)美洲鰣苗種綠色生產(chǎn)任重而道遠，建議加強美洲鰣苗種綠色生產(chǎn)關(guān)鍵技術(shù)的研究，盡快開發(fā)出成套實用的美洲鰣苗種綠色技術(shù)，以滿足市場需求。