羊紅膻二氯甲烷部位的化學(xué)成分研究

郝晶晶，張府君，甄會(huì)賢，馮 貞

（1.山西藥科職業(yè)學(xué)院，山西 太原030031；2.山西省食品藥品檢驗(yàn)所，山西 太原030006）

羊紅膻是雙子葉植物藥傘形科茴芹屬植物缺刻葉茴芹的根或全草，為多年生草本植物。別名羊洪膻、六月寒［1］。產(chǎn)地分布在東北、陜西、內(nèi)蒙古、河北、山西、臺(tái)灣、廣東、山東等地。夏秋季采集，洗凈，切段，曬干備用或鮮用。藥理研究表明其具有降壓、降低心肌耗氧量，增加心、腦、腎血流量，預(yù)防外源性甘油三酯升高的作用，并且有顯著增強(qiáng)體力的功效［2］。臨床觀察中也發(fā)現(xiàn)羊紅膻對(duì)治療慢性氣管炎及克山病有良好療效，并且在心電圖上也有一定的改善［3］。本文對(duì)羊紅膻二氯甲烷部分進(jìn)行化學(xué)成分研究。

1 試劑與器材

1.1 試劑

二氯甲烷（色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；硫酸、甲醇、二氯甲烷、石油醚（60-90）、乙酸乙酯、甲酸、冰乙酸、鹽酸及氫氧化鈉均為AR。

1.2 藥材

羊紅膻藥材的藥用部位為全草或根，本實(shí)驗(yàn)對(duì)羊紅膻全草進(jìn)行研究，采購(gòu)于陜西省黃安縣，經(jīng)由山西藥科職業(yè)學(xué)院楊紅教授鑒定為羊紅膻藥材。

1.3 材料

AB－8大孔吸附樹(shù)脂（批號(hào)：HG 2-885-76，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所），80～100目硅膠（青島海洋化工廠分廠），200～300目硅膠（青島邦凱高新技術(shù)材料有限公司），硅膠G板（30×100 mm，50×100 mm，100×100 mm，青島海洋化工廠分廠），Sephadex LH-20凝膠（GE Healthcare）。

1.4 儀器設(shè)備

分析天平（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（SY-5000，上海亞榮生化儀器廠），循環(huán)水式真空泵（SHZ-D（Ⅲ），鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司），層析柱（24 mm×670 mm，10 mm×200 mm，20 mm×350 mm），超聲波清洗機(jī)（SB-5200 DTDN，寧波新芝生物科技股份有限公司），點(diǎn)樣毛細(xì)管（0.3 mm，長(zhǎng)城科學(xué)儀器商店經(jīng)銷）。

2 方法

2.1 餾分的制備

羊紅膻藥材陰干，粉碎成粗粉，稱取藥材5 kg，加60%乙醇，浸泡12小時(shí)，加熱回流提取，濃縮得浸膏1 401 g。分別用石油醚、二氯甲烷、水飽和正丁醇對(duì)混懸液依次進(jìn)行萃取，萃取至無(wú)色，回收有機(jī)溶劑，得到二氯甲烷部位A 43 g，石油醚部位B 32 g，正丁醇部位C 65 g。A部位用少量二氯甲烷溶解，進(jìn)行硅膠柱層析，用二氯甲烷、二氯甲烷：甲醇（100∶1、80∶1、50∶1、20∶1、10∶1、5∶1、1∶1）依次梯度洗脫。每500 mL（柱體積1 800 mL）收集一份餾分，流速3～5 mL／min，濃縮之后裝到10 mL西林瓶?jī)?nèi)。

2.2 大孔樹(shù)脂吸附法100∶1餾分除色素

將50 mm×500 mm層析柱洗凈、干燥，垂直固定在鐵架臺(tái)上；AB-8大孔樹(shù)脂用無(wú)水乙醇浸泡約24 h后裝柱，用80%乙醇沖至樹(shù)脂表面平整后，使洗脫劑液面降低至高于樹(shù)脂表面1～2 cm處；用80%乙醇溶解樣品，用滴管緩慢加入，附在柱壁上的使用80%乙醇沿壁緩慢沖洗；待樣品吸附2～3 h后，用80%乙醇洗脫，待所接溶液泛綠時(shí)停止操作，回收乙醇。

2.3 化合物的分離與精制

用薄層色譜進(jìn)行跟蹤檢測(cè)，顯色劑為10%硫酸-乙醇，顯色后根據(jù)餾分的斑點(diǎn)情況，合并相近餾分。本實(shí)驗(yàn)選擇合并餾分100∶1中11～17進(jìn)行進(jìn)一步純化分離。取層析柱（24 mm×670 mm），將硅膠濕法裝柱，樣品拌樣，上樣，以二氯甲烷：乙酸乙酯為洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫。通過(guò)反復(fù)硅膠柱層析、凝膠柱層析分離得到化合物Ⅰ和化合物Ⅱ。

2.4 化合物Ⅰ和化合物Ⅱ的流程圖（圖1）：

圖1 羊紅膻二氯甲烷部分提取分離純化流程圖

3 結(jié)果

3.1 化合物Ⅰ的檢識(shí)及鑒定

3.1.1 化合物Ⅰ的薄層鑒別 三種展開(kāi)劑系統(tǒng)下（二氯甲烷∶乙酸乙酯 ＝1∶1；石油醚∶乙酸乙酯 ＝1∶1；二氯甲烷∶甲醇＝80∶1；顯色劑：10%硫酸－乙醇）化合物均為一個(gè)黃色斑點(diǎn)。

3.1.2 化合物Ⅰ的鑒定 化合物Ⅰ：無(wú)色液體，極易溶于二氯甲烷，微溶于甲醇，10%硫酸－乙醇（95%）顯色后呈黃色斑點(diǎn)。1H NMR（600 MHz，CD2Cl2）：δ7.16（d，J＝8.4 Hz，2H，C2，6－H），6.79（d，J＝8.4 Hz，2H，C3，5－H），4.11（d，J＝4.9 Hz，1H，C1′－H），3.91（m，1H，C2′－H），3.39（dd，J＝9.4，7.1 Hz，2H，C1″－H），1.17（t，J＝7.0 Hz，3H，C2″－H），1.08（d，J＝6.4 Hz，3H，C3′－H），7.288（寬短峰，Ar－OH），13 C NMR（151 MHz，CD2Cl2）δ156.28（C1），129.48（C2，6），115.58（C3，5），130.96（C4），85.58（C1′），71.28（C2′），64.84（C1″），18.44（C3′），15.52（C2″）經(jīng)碳譜和氫譜綜合分析，并參考文獻(xiàn)確定化合物為4-（1′-乙氧基-2′-羥基丙基）苯酚（結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖2）［2］。

圖2 化合物Ⅰ的結(jié)構(gòu)式

3.2 化合物Ⅱ的檢識(shí)及鑒定

3.2.1 化合物Ⅱ的薄層鑒別 三種不同展開(kāi)系統(tǒng)下（二氯甲烷∶甲醇 ＝30∶1；二氯甲烷∶乙酸乙酯 ＝1∶1；石油醚∶乙酸乙酯＝1∶1。顯色劑為10%硫酸－乙醇。）化合物均為一個(gè)橘黃斑點(diǎn)。

3.2.2 化合物Ⅱ的鑒定 化合物Ⅱ：無(wú)色液體，易溶于二氯甲烷，微溶于甲醇，10%硫酸－乙醇（95%乙醇）顯色后為橘黃色。1H NMR（600 MHz，CD2Cl2）：δ7.37（m，3H），7.05（dd，J＝8.6，3.4 Hz，3H），4.63（d，J＝4.3 Hz，1H），3.95（dd，J＝6.4，4.4 Hz，1H），2.43（d，J＝7.1 Hz，1H），1.81（d，J＝13.7 Hz，1H），1.62（s，1H），1.27（d，J＝7.0 Hz，4H），1.07－0.99（m，11H），13C NMR（151 MHz，CD2Cl2）：δ175.66（C1″），150.90（C1），138.78（C2），128.20（C3，5），121.85（C6），77.46（C1′），71.66（C2′），41.58（C2″），26.31（C3″），22.58（Ar－CH3），17.61（C3′），16.74（C4″），11.79（C5″），53.84（CD2CL2）。經(jīng)過(guò)碳譜和氫譜綜合分析，并參考文獻(xiàn)確定化合物為2-甲基丁酸-4-甲基-2-（1′，2′-二羥基丙基）苯酚酯（化合物結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖3）［3］。

圖3 化合物Ⅱ的結(jié)構(gòu)式

4 討論

4.1 葡聚糖凝膠裝柱

本實(shí)驗(yàn)中化合物溶于二氯甲烷中，凝膠裝柱時(shí)使用洗脫劑為二氯甲烷，凝膠較二氯甲烷輕，浮于上層，凝膠裝柱時(shí)若保留洗脫劑高于凝膠面6～7 cm時(shí)，總有一部分凝膠浮于上層，需加較厚的一層棉花將其壓下，保證凝膠沉降完成。

4.2 薄層鑒別

本次實(shí)驗(yàn)中當(dāng)用展開(kāi)系統(tǒng)為二氯甲烷∶甲醇＝60∶1時(shí)，兩種化合物斑點(diǎn)顏色及Rf均相同，但換展開(kāi)系統(tǒng)為二氯甲烷∶乙酸乙酯＝1∶1時(shí)，兩種化合物雖斑點(diǎn)顏色相近，但比移值卻相差甚遠(yuǎn)。

4.3 化合物分子量的測(cè)定

在本次實(shí)驗(yàn)中，曾使用ESI-HRMS測(cè)定兩種化合物的精確分子量，但在實(shí)驗(yàn)條件下，兩種化合物均無(wú)響應(yīng)，說(shuō)明化合物的極性較小。因此如需測(cè)定這兩種化合物的分子量需采用APCI-MS進(jìn)行。