含兩個(gè)手性中心的三唑類殺菌劑色譜分離研究進(jìn)展

唐守英, 王 飛, 孟秀柔, 張鈺萍

(貴州大學(xué) 精細(xì)化工研究開發(fā)中心，綠色農(nóng)藥與農(nóng)業(yè)生物工程國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，教育部綠色農(nóng)藥與生物工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴陽 550025)

據(jù)統(tǒng)計(jì)，中國市場上的手性農(nóng)藥比例約占40%，并且比例還在不斷上升[1]。目前，大部分手性農(nóng)藥仍以外消旋體形式生產(chǎn)和銷售。手性農(nóng)藥的不同對(duì)映異構(gòu)體之間往往存在活性或毒性的差異，其使用進(jìn)入到環(huán)境后在吸收、分布、降解和代謝方面均有可能存在立體選擇性，其中一種異構(gòu)體可能存在高活性且低毒性。因此，使用高活性的異構(gòu)體會(huì)對(duì)生態(tài)環(huán)境更友好。獲得單一異構(gòu)體是從對(duì)映體水平展開研究的基礎(chǔ)。目前獲得單一異構(gòu)體主要有天然提取法和外消旋體分離兩種方法[2]，其中天然提取法主要用于獲得生物體內(nèi)特有的單一異構(gòu)體，如糖類、氨基酸、生物堿等；外消旋體的拆分主要用于化學(xué)合成的手性農(nóng)藥，而色譜技術(shù)則是對(duì)外消旋體進(jìn)行快速拆分的理想方式。現(xiàn)如今，用于手性農(nóng)藥拆分的色譜技術(shù)主要有高效液相色譜 (HPLC)、毛細(xì)管電泳 (CE)、超臨界流體色譜 (SFC)和氣相色譜 (GC) 等。

三唑類殺菌劑具有殺菌譜廣、活性高、殺菌速度快、持效期長及內(nèi)吸傳導(dǎo)性強(qiáng)等特點(diǎn)，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中應(yīng)用廣泛[3]。目前，在中國已商品化的三唑類殺菌劑有30余種，其中除三環(huán)唑和氟硅唑不含手性中心外，有18種含有1個(gè)手性中心，11種含有2個(gè)手性中心，以及1種 (種菌唑) 含有3個(gè)手性中心[4]，而有關(guān)種菌唑?qū)τ钞悩?gòu)體的拆分研究還未見報(bào)道。2009年，張艷川等[5]對(duì)三唑類殺菌劑手性分離進(jìn)行了綜述，但由于時(shí)間較早，很多含兩個(gè)手性中心的三唑類殺菌劑如苯醚甲環(huán)唑、聯(lián)苯三唑醇、葉菌唑、芐氯三唑醇的手性分離情況尚未見報(bào)道。2019年，崔璇等[1]對(duì)農(nóng)產(chǎn)品中殘留的手性農(nóng)藥對(duì)映體的色譜分析研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述，梳理了農(nóng)產(chǎn)品中手性農(nóng)藥殘留分析方法。以上兩篇報(bào)道均未對(duì)含有兩個(gè)手性中心的三唑類殺菌劑對(duì)映異構(gòu)體的色譜分離條件及分離結(jié)果進(jìn)行系統(tǒng)的歸類整理和總結(jié)。鑒于此，本文擬對(duì)國內(nèi)外近年來研究較多的11種含有2個(gè)手性中心的三唑類殺菌劑對(duì)映異構(gòu)體的色譜分離條件及結(jié)果進(jìn)行綜述，旨在為三唑類手性農(nóng)藥的進(jìn)一步研發(fā)提供參考，為多手性中心的三唑類手性農(nóng)藥的分離分析和深入研究提供參考方法。

11種化合物的結(jié)構(gòu)式見圖式1，其異構(gòu)體活性差異等信息見表1。

表1 11種含兩個(gè)手性中心的三唑類殺菌劑基本信息Table 1 Basic information of 11 triazole fungicides with two chiral centers

手性固定相是手性農(nóng)藥進(jìn)行手性識(shí)別和分離的關(guān)鍵，本文提到的色譜分離中所用到的手性柱的具體信息見表2。

表2 手性色譜柱基本信息Table 2 Basic information about chiral columns

1 高效液相色譜法

高效液相色譜法 (HPLC) 是三唑類手性農(nóng)藥對(duì)

映體拆分的主要方法，多使用紫外檢測器 (UV) 和二極管陣列檢測器 (DAD)。為了得到更靈敏的檢測信號(hào)，高效液相色譜也常與質(zhì)譜聯(lián)用。高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法 (HPLC-MS/MS) 具有靈敏度高、分辨率高、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，在農(nóng)藥殘留檢測中得到了廣泛的應(yīng)用。研究表明，在采用HPLC法拆分三唑類手性農(nóng)藥時(shí)，多糖手性固定相 (chiral stationary phase，CSP) 應(yīng)用較為廣泛，其中，Chiralcel OD和Chiralcel OJ兩種手性柱應(yīng)用最多[5]。

1.1 正相色譜法

采用HPLC-UV法對(duì)含有兩個(gè)手性中心的三唑類殺菌劑進(jìn)行拆分，大多是在正相液相色譜條件下進(jìn)行，一般以正己烷為流動(dòng)相主體，用乙醇和異丙醇調(diào)節(jié)流動(dòng)相的極性。其特點(diǎn)是異構(gòu)體在檢測器中不被破壞，流動(dòng)相中成分容易濃縮，非常適用于異構(gòu)體的分析、制備。

采用正相色譜法拆分含有兩個(gè)手性中心的三唑類殺菌劑可分為3種情況：第一，只含有一對(duì)對(duì)映體，拆分時(shí)只涉及到2個(gè)對(duì)映體的分離，如氟環(huán)唑和多效唑；第二，為4個(gè)對(duì)映異構(gòu)體的外消旋體混合物，現(xiàn)有的正相色譜分離技術(shù)還不能在某種手性柱上完全拆分4個(gè)對(duì)映異構(gòu)體，但能將其拆分成兩對(duì)對(duì)映體，如三唑醇和聯(lián)苯三唑醇；第三，由4個(gè)對(duì)映異構(gòu)體組成，且都能成功拆分，如丙環(huán)唑、苯醚甲環(huán)唑和葉菌唑；目前，尚未見采用正相色譜法拆分芐氯三唑醇、環(huán)唑醇、糠菌唑和乙環(huán)唑的報(bào)道。

1.1.1 氟環(huán)唑和多效唑 1985年，巴斯夫公司創(chuàng)制了氟環(huán)唑，其分子中含有2個(gè)手性中心，存在4個(gè)對(duì)映異構(gòu)體，但是商品化的氟環(huán)唑中只包含(2R, 3S)-(+)-氟環(huán)唑和 (2S,3R)-(?)-氟環(huán)唑兩個(gè)對(duì)映體。2008—2010年，韓小茜等[16-17]研究發(fā)現(xiàn)，以正己烷和異丙醇為流動(dòng)相在Chiralcel OD-H和Chiralcel OJ-H柱上拆分氟環(huán)唑能達(dá)到基線分離。2008年，常靜等[18]在Chiralcel AD-H柱上基線分離了氟環(huán)唑，且最佳分離的流動(dòng)相為V(正己烷) :V(無水乙醇) = 70 : 30。具體分離條件及分離度見表3。

商品化的多效唑由 (2R, 3R)-(+)-多效唑和 (2S,3S)-(?)-多效唑一對(duì)對(duì)映體組成。2008年，武彤等[19]利用Chiralcel OD-H和Chiralcel OJ-H手性柱拆分了多效唑。結(jié)果表明，Chiralcel OJ-H柱拆分效果比Chiralcel OD-H柱好，色譜分離條件及分離度見表3。

1.1.2 三唑醇和聯(lián)苯三唑醇 2008年，曹巧[20]研究發(fā)現(xiàn)，三唑醇外消旋體在Chiralpak AS-H柱上能將其4個(gè)對(duì)映異構(gòu)體分開，但是第二、三峰未能達(dá)到基線分離。以V(正己烷) :V(乙醇) = 95 :5為流動(dòng)相，其保留時(shí)間分別為7.172、7.917、8.729和9.330 min，三唑醇的流出順序依次為 (1R,2S)-(+)-、(1S, 2R)-(?)-、(1R, 2R)-(+)- 和 (1S, 2S)-(?)-三唑醇。隨后，Dong等[8]在Chiralpak ASH柱上也以正己烷和乙醇為流動(dòng)相，發(fā)現(xiàn)三唑醇的出峰順序與曹巧的相同。為滿足研究需要，研究人員將反式三唑醇對(duì)映體稱為三唑醇-A，即(1R, 2S) 和 (1S, 2R)，順式三唑醇對(duì)映體稱為三唑醇-B，即 (1R, 2R) 和 (1S, 2S)。2012年，曹雅虹[21]先在非手性硅膠柱上把三唑醇拆分為三唑醇-A和三唑醇-B，再分別在手性柱上對(duì)三唑醇-A和三唑醇-B進(jìn)行了拆分。以V(正己烷) :V(異丙醇) =100 : 3為流動(dòng)相，三唑醇-A在Chiralcel OD-H柱上得到基線分離，且 (1R, 2S)-(+)-三唑醇先于 (1S,2R)-(?)-三唑醇出峰；三唑醇-B在Chiralcel OJH柱上取得很好的分離效果，(1R, 2R)-(+)-三唑醇先于 (1S, 2S)-(?)-三唑醇出峰。正相色譜法分離三唑醇的色譜條件及分離度見表3。

同年，武彤等[19]利用Chiralcel OD-H和Chiralcel OJ-H手性柱拆分了聯(lián)苯三唑醇，結(jié)果只能實(shí)現(xiàn)聯(lián)苯三唑醇兩對(duì)對(duì)映體的基線拆分，且Chiralcel OJ-H柱拆分效果較好。色譜分離條件及分離度見表3。

1.1.3 丙環(huán)唑、苯醚甲環(huán)唑和葉菌唑 目前尚未確定丙環(huán)唑4個(gè)對(duì)映異構(gòu)體的旋光性與絕對(duì)構(gòu)型的關(guān)系。為了方便研究，程有普[10]根據(jù)丙環(huán)唑制劑及標(biāo)準(zhǔn)品中兩對(duì)對(duì)映體的含量，將丙環(huán)唑順式對(duì)映體定義為A體，包括 (2R, 4S) 和 (2S, 4R)；反式對(duì)映體定義為B體，包括 (2R, 4R) 和 (2S, 4S)；并將A體標(biāo)記為 (+)-丙環(huán)唑A，(?)-丙環(huán)唑A；B體標(biāo)記為 (+)-丙環(huán)唑B，(?)-丙環(huán)唑B。2003—2014年，Li等[22]、Bi等[23]、Zhou等[24]和程有普[10]分別報(bào)道了在正相色譜條件下拆分丙環(huán)唑，且丙環(huán)唑4個(gè)對(duì)映異構(gòu)體在Chiralcel OD柱上拆分效果較好。其中，程有普[10]發(fā)現(xiàn)在Chiralcel ODH柱上，丙環(huán)唑4個(gè)對(duì)映異構(gòu)體的出峰順序?yàn)椋?+)-丙環(huán)唑A、(?)-丙環(huán)唑B、(+)-丙環(huán)唑B、(?)-丙環(huán)唑A，在Chiralpak AD-H柱上依次為 (+)-丙環(huán)唑B、(?)-丙環(huán)唑B、(?)-丙環(huán)唑A、(+)-丙環(huán)唑A，且在2種手性柱上丙環(huán)唑4個(gè)對(duì)映異構(gòu)體均實(shí)現(xiàn)了基線分離。丙環(huán)唑在Chiralcel OD、Chiralcel OD-H和Chiralcel AD-H柱上典型的分離條件及分離度見表3。

表3 正相色譜法分離檢測三唑類手性農(nóng)藥Table 3 Separation and detection of chiral triazole pesticides by normal phase chromatography

此外，Zhou等[24]、李晶[11]和Dong等[25]研究表明，正相條件下，苯醚甲環(huán)唑在Chiralcel OD柱上沒能拆分，而在Chiralcel OJ-H柱上以正己烷和乙醇為流動(dòng)相的拆分效果比其在Chiralcel OD柱上好，洗脫順序?yàn)?(2R, 4R)、(2R, 4S)、(2S,4R)、(2S, 4S)-苯醚甲環(huán)唑[25]。賀敏[4]利用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法 (UPLC-MS/MS) 以正己烷和甲醇梯度洗脫，在Chiralpak IB-3柱上實(shí)現(xiàn)了苯醚甲環(huán)唑4個(gè)對(duì)映異構(gòu)體的基線分離；出峰順序分別為 (2R, 4R)、(2S, 4S)、(2S, 4R)、(2R, 4S)-苯醚甲環(huán)唑，保留時(shí)間分別為5.96、6.38、6.82、7.37 min。分離度見表3。2018年，He等[12]采用Enantiopak OD和Enantiopak AD柱成功拆分了葉菌唑4個(gè)對(duì)映異構(gòu)體，分離度均大于1.5。

1.2 反相色譜法

反相色譜系統(tǒng)的流動(dòng)相以水為主體，以甲醇、乙腈等調(diào)節(jié)流動(dòng)相的極性。根據(jù)報(bào)道，反向色譜法拆分含兩個(gè)手性中心的三唑類殺菌劑多是用質(zhì)譜做檢測器，通常使用HPLC-MS/MS或UPLCMS/MS技術(shù)分析。為了提高質(zhì)譜信號(hào)，流動(dòng)相中經(jīng)常加入少量甲酸、乙酸、醋酸銨等調(diào)節(jié)pH值。

采用反相色譜法拆分含兩個(gè)手性中心的三唑類殺菌劑可分為4種情況﹕第一，只含有一對(duì)對(duì)映體，如氟環(huán)唑和多效唑；第二，對(duì)于含有4個(gè)對(duì)映異構(gòu)體的外消旋體混合物，反相色譜分離技術(shù)能將其拆分成兩對(duì)對(duì)映體，如芐氯三唑醇；第三，能夠?qū)崿F(xiàn)4個(gè)對(duì)映異構(gòu)體的基線分離，如三唑醇、聯(lián)苯三唑醇、丙環(huán)唑、環(huán)唑醇和糠菌唑；第四，沒有完全實(shí)現(xiàn)4個(gè)對(duì)映異構(gòu)體的基線分離，如苯醚甲環(huán)唑。上述9種殺菌劑的色譜分離條件及分離度見表4。特別的是，在反相系統(tǒng)下能成功拆分正相色譜法無法完成4個(gè)對(duì)映異構(gòu)體拆分的3種殺菌劑 (三唑醇、聯(lián)苯三唑醇和環(huán)唑醇)，但是尚未見采用反相色譜法成功拆分乙環(huán)唑和葉菌唑的報(bào)道。

1.2.1 氟環(huán)唑和多效唑 在反相色譜條件下，氟環(huán)唑和多效唑能在多種固定相中實(shí)現(xiàn)基線分離。如韓小茜等[16]、Zhang等[26]、李遠(yuǎn)播[27]、梁宏武[28]、Chen等[29]、Kaziem等[6]和Qi等[30]采用CDMPC固定相成功拆分了氟環(huán)唑和多效唑，結(jié)果均為(2S, 3R)-(?)-氟環(huán)唑先于 (2R, 3S)-(+)-氟環(huán)唑出峰；(2R, 3R)-(+)-多效唑先于 (2S, 3S)-(?)-多效唑出峰。此外，Zhang[26]還在CCMPC固定相中成功拆分了氟環(huán)唑和多效唑。Zhao等[31-32]和Matías等[33]在ACMPC固定相中也成功拆分了氟環(huán)唑和多效唑。采用反相色譜法拆分氟環(huán)唑和多效唑的分離條件及分離度見表4。

1.2.2 芐氯三唑醇 目前，采用反相色譜法尚未實(shí)現(xiàn)對(duì)芐氯三唑醇4個(gè)對(duì)映異構(gòu)體的完全拆分，但是能將其拆分成兩對(duì)對(duì)映體。2012年，Zhang等[26]采用反相HPLC-MS/MS法研究發(fā)現(xiàn)，芐氯三唑醇4個(gè)對(duì)映異構(gòu)體在Lux cellulose-1和Lux amylose-2柱上均只能拆分成兩對(duì)對(duì)映體，分離條件及分離度見表4。

1.2.3 三唑醇、聯(lián)苯三唑醇、丙環(huán)唑、環(huán)唑醇和糠菌唑 環(huán)唑醇、丙環(huán)唑、三唑醇、聯(lián)苯三唑醇和糠菌唑在反相色譜條件下均能夠?qū)崿F(xiàn)4個(gè)對(duì)映異構(gòu)體的基線拆分。2006年，Buerge等[34]在由純多孔硅膠微球制成的Zorbax Rx-C18柱 [25 cm ×4.6 mm (i.d)] 上分離了環(huán)唑醇，以V(水) :V(乙腈) :V(甲醇) = 55 : 35 : 10為流動(dòng)相，在11.25～12.00 min處收集提取A組分，在12.75～13.75 min收集提取B組分。2012年，Zhang等[26]在4種手性柱 (Lux cellulose-1、Lux cellulose-2、Lux cellulose-3、Lux amylose-2) 上研究了環(huán)唑醇、丙環(huán)唑、糠菌唑、三唑醇和聯(lián)苯三唑醇的拆分。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，以上5個(gè)化合物的4個(gè)對(duì)映異構(gòu)體均能實(shí)現(xiàn)基線分離，分離條件及分離度見表4。之后，李遠(yuǎn)播[27]利用超高效液相色譜-串聯(lián)四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀 (Acquity UPLC-TQD) 在ChiralpakOD-RH柱上以V(乙腈) :V(2 mmol/L乙酸銨水溶液) = 55 :45為流動(dòng)相拆分了三唑醇。結(jié)果表明，三唑醇4個(gè)對(duì)映異構(gòu)體的出峰順序依次為 (1S, 2R)-(?)-三唑醇、(1R, 2S)-(+)-三唑醇、(1S, 2S)-(?)-三唑醇、(1R, 2R)-(+)-三唑醇。2020年，Li等[9]采用UPLCMS/MS技術(shù)，在Chiralcel OD-3R手性柱上實(shí)現(xiàn)了聯(lián)苯三唑醇手性異構(gòu)體的基線分離。

表4 反相色譜法分離檢測三唑類手性農(nóng)藥Table 4 Separation and detection of triazole chiral pesticides by reversedphase chromatography

1.2.4 苯醚甲環(huán)唑 采用反向色譜系統(tǒng)尚未實(shí)現(xiàn)對(duì)苯醚甲環(huán)唑4個(gè)對(duì)映異構(gòu)體的基線分離。Zhang等[26]采用Lux cellulose-3手性柱對(duì)苯醚甲環(huán)唑進(jìn)行了分離，其分離度為1.48、1.18和1.25。Matías等[33]在Chiralpak IG-3柱上拆分苯醚甲環(huán)唑，發(fā)現(xiàn)第一和第二峰沒有基線分離，但第二、三、四峰均獲得了基線分離，分離度為 <1.00、2.95和3.95。

2 超臨界流體色譜法

超臨界流體色譜 (supercritical fluid chromatography，SFC) 作為一種綠色的色譜分離技術(shù)，也被用于含兩個(gè)手性中心的三唑類殺菌劑的分離。超臨界二氧化碳流體的黏度接近于氣體，密度接近于液體，溶質(zhì)的傳質(zhì)阻力小，傳質(zhì)速度快，具有高效、快速的特點(diǎn)，但超臨界CO2極性較弱，在色譜分離中需加入一定量的極性溶劑以提高洗脫強(qiáng)度和選擇性。

超臨界流體色譜法拆分含兩個(gè)手性中心的三唑類殺菌劑可分為4種情況：

第一，商品藥中只含有一對(duì)對(duì)映體，如氟環(huán)唑和多效唑。研究發(fā)現(xiàn)[37-39]，氟環(huán)唑和多效唑在Chiralcel OD-H柱上能實(shí)現(xiàn)最優(yōu)分離。

第二，商品藥為4個(gè)對(duì)映異構(gòu)體的外消旋體混合物，但只能將其拆分成兩對(duì)對(duì)映體，如三唑醇；在SFC條件下，三唑醇在Chiralpak AD柱上拆分效果最好[40]。

第三，商品藥中含有4個(gè)對(duì)映異構(gòu)體，且都能實(shí)現(xiàn)成功拆分，如丙環(huán)唑、聯(lián)苯三唑醇、芐氯三唑醇、葉菌唑和糠菌唑。Toribio等[41]采用Chiralpak AD柱實(shí)現(xiàn)了丙環(huán)唑的分離。此外，繆葉隆等[38]、鄭夏瓊[39]分別用Chiralcel OD-H、Chiralpak IB和Sino-Chiral OJ柱實(shí)現(xiàn)了聯(lián)苯三唑醇、芐氯三唑醇、葉菌唑和糠菌唑的拆分。

第四，化合物的4個(gè)對(duì)映異構(gòu)體沒有實(shí)現(xiàn)完全基線分離，如苯醚甲環(huán)唑、環(huán)唑醇和乙環(huán)唑。但苯醚甲環(huán)唑和乙環(huán)唑在Chiralcel OD-H柱上實(shí)現(xiàn)了最優(yōu)分離。Toribio等[41]采用Chiralpak AD柱實(shí)現(xiàn)了環(huán)唑醇的部分分離；此外，環(huán)唑醇4個(gè)對(duì)映異構(gòu)體在Enantiopak OD手性柱上通過V(乙腈) :V(水) =60 : 40的洗脫順序?yàn)?(2R, 3R)-(+)-、(2R,3S)-(+)-、(2S, 3S)-(?)-、(2S, 3R)-(?)-環(huán)唑醇[35]。超臨界流體色譜法拆分11種農(nóng)藥的色譜分離條件及分離度見表5。

表5 超臨界流體色譜法分離檢測含兩個(gè)手性中心的三唑類殺菌劑Table 5 Separation and detection of ten triazole fungicides with two chiral centers by supercritical fluid chromatography

3 毛細(xì)管電泳法

毛細(xì)管電泳 (capillary electrophoresis，CE) 以其高分辨能力在各個(gè)分析領(lǐng)域被認(rèn)為是一種高效的分離技術(shù)[42]。近年來，在醫(yī)藥和農(nóng)業(yè)科學(xué)領(lǐng)域，毛細(xì)管電泳在微尺度和快速分析方面得到了廣泛的應(yīng)用[43]。在三唑類手性農(nóng)藥的分離中，毛細(xì)管電泳也顯示了良好的拆分能力。

目前，已有采用毛細(xì)管電泳成功拆分三唑醇、氟環(huán)唑、環(huán)唑醇、丙環(huán)唑、多效唑、聯(lián)苯三唑醇、三唑醇及苯醚甲環(huán)唑的報(bào)道。如Wu等[44]以磺酸化-β-環(huán)糊精 (S-β-CD) 作為手性選擇劑成功拆分了三唑醇種對(duì)映異構(gòu)體；之后，Otsuka等[45]以衍生化-γ-環(huán)糊精 (HP-γ-CD) 為手性選擇劑，在膠束電動(dòng)毛細(xì)管電泳技術(shù) (CD-MEKC) 模式及pH7.0的條件下，也實(shí)現(xiàn)了三唑醇4種對(duì)映異構(gòu)體的完全拆分。不久，Wu等[44]課題組進(jìn)一步成功拆分了多效唑、三唑醇、聯(lián)苯三唑醇、丙環(huán)唑、苯醚甲環(huán)唑及環(huán)唑醇。此外，Buerge等[34]曾使用自制的HP-β-CD分別成功拆分了氟環(huán)唑和環(huán)唑醇，在20 min內(nèi)，對(duì)映體均能得到很好的拆分。Ibrahim等[46]和Garrison等[47]采用環(huán)糊精修飾的CD-MEKC，以HP-γ-CD為手性選擇劑，在pH值分別為7和3的情況下，實(shí)現(xiàn)了丙環(huán)唑4種異構(gòu)體的基線分離。相對(duì)來說，采用毛細(xì)管電泳拆分三唑類手性農(nóng)藥的研究較少，還有待進(jìn)一步研究。

4 氣相色譜法

氣相色譜 (gas chromatography，GC) 是一種高效的分離技術(shù)，具有足夠的靈敏度，并且很容易與質(zhì)譜結(jié)合，這些特性使GC成為分析農(nóng)藥殘留和污染物的合適工具。然而，有限的適用于氣相色譜分離的固定相數(shù)量限制了GC的使用。2010年，Kenneke等[48]利用GC-MS結(jié)合瑞士BGB 172 (20%三-丁基二甲基硅烷基-β-環(huán)糊精) 手性毛細(xì)管氣相色譜柱實(shí)現(xiàn)了三唑醇4個(gè)對(duì)映異構(gòu)體的基線分離。2011年，Garrison等[47]報(bào)道了用BGB 172柱能夠?qū)崿F(xiàn)丙環(huán)唑一對(duì)對(duì)映體的基線分離，但另一對(duì)對(duì)映體分離程度僅達(dá)到13%。

5 合相色譜法

超高效合相色譜 (ultra performance convergence chromatography, UPC2) 利用超臨界狀態(tài)下液化氣體的密度差異進(jìn)行色譜分離，兼具正相色譜的優(yōu)勢及選擇性和反相色譜的易用性及簡便的方法開發(fā)功能。2014年，程有普[10]采用UPC2-MS/MS和Chiralpak IA-3柱，以含1.0%甲酸的甲醇為流動(dòng)相，在流速2.2 mL/min、30 ℃條件下丙環(huán)唑4個(gè)對(duì)映異構(gòu)體的分離度分別為1.77、1.61和2.80，且最后出峰時(shí)間約5 min，出峰順序?yàn)?(+)-丙環(huán)唑B、(?)-丙環(huán)唑B、(?)-丙環(huán)唑A和(+)-丙環(huán)唑A。

6 總結(jié)及展望

三唑類殺菌劑具有長久的應(yīng)用前景和研究價(jià)值。迄今為止，含一個(gè)手性中心的三唑類殺菌劑的分離及對(duì)映體毒性、環(huán)境行為差異性已有廣泛的研究，但是含兩個(gè)手性中心的三唑類殺菌劑因具有4個(gè)對(duì)映異構(gòu)體，在分離檢測時(shí)難度相對(duì)更大，有的農(nóng)藥分離效果并不理想，純對(duì)映體的獲得和檢測方法均受到一定程度的限制，導(dǎo)致其對(duì)映體毒性、環(huán)境行為差異性研究還不是很充分，所以還有待進(jìn)一步深入研究。從本文綜述內(nèi)容可知，11種含兩個(gè)手性中心的三唑類殺菌劑中除了乙環(huán)唑沒能實(shí)現(xiàn)4個(gè)對(duì)映異構(gòu)體的基線分離外，其他10種已均有使其異構(gòu)體實(shí)現(xiàn)基線分離的方法。從分析方法看，目前仍是以高效液相色譜法為主，其中反相色譜法結(jié)合質(zhì)譜檢測的HPLC-MS/MS技術(shù)因其對(duì)復(fù)雜樣品的高分離能力、高選擇性、高靈敏度等優(yōu)點(diǎn)，在手性農(nóng)藥對(duì)映異構(gòu)體的分離檢測方面表現(xiàn)出較好的應(yīng)用前景。手性農(nóng)藥中往往存在活性體和非活性體，并且其毒性及環(huán)境行為存在差異?，F(xiàn)階段，含兩個(gè)手性中心的三唑類殺菌劑在對(duì)映體水平上開展的活性、非靶標(biāo)毒性、毒性機(jī)制、生物降解、生物富集、對(duì)映異構(gòu)體穩(wěn)定性等研究還相當(dāng)缺乏。三唑類殺菌劑手性分離與檢測技術(shù)的開發(fā)，將為上述對(duì)映體水平上的相關(guān)研究提供良好的技術(shù)基礎(chǔ)，對(duì)未來更好地開發(fā)一類高效、超低用量、高選擇性、對(duì)人類健康安全的手性三唑類殺菌劑具有重要的科學(xué)意義。