液相色譜法測定果醬中的檸檬黃、日落黃、莧菜紅、胭脂紅、亮藍

為了改善食品的顏色或外觀，從而有利于產(chǎn)品銷售，著色劑在食品工業(yè)中得到了很廣泛的應用。與天然色素相比，合成著色劑的著色力強、色澤鮮艷、不易褪色、穩(wěn)定性好、易溶解、易調(diào)色、成本低，但安全性低，所以國家對合成著色劑的監(jiān)管很嚴格。

根據(jù)GB 2760-2014《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》的規(guī)定，果醬（食品分類號04.01.02.05）產(chǎn)品允許使用合成著色劑，限值為：檸檬黃0.5g/kg、日落黃0.5g/kg、莧菜紅0.3g/kg、胭脂紅0.5g/kg、亮藍0.5g/kg。不過，GB 5009.35-2016《食品安全國家標準 食品中合成著色劑的測定》只適用于巧克力豆、硬糖、著色糖衣制品、蜜餞、配制酒、飲料、淀粉軟糖等7種產(chǎn)品的測定，對于允許而且經(jīng)常使用合成著色劑的果醬產(chǎn)品，則不在適用范圍內(nèi)。

本文通過檢出限、回收率和精密度等檢驗數(shù)據(jù)，驗證GB 5009.35-2016《食品安全國家標準 食品中合成著色劑的測定》的檢測方法是否適用于果醬產(chǎn)品的檢測，從而解決實驗室選擇測試方法的問題。

一、實驗材料

1 .試劑及配制方法。甲醇：色譜純。乙酸銨（CH3COONH4）溶液（0.02mol/L）：稱量乙酸銨1.54g，加水至1L，后經(jīng)微孔濾膜（0.45μm）過濾。檸檬酸（C6H8O7·H2O）溶液（20g/100mL水），用該濃度的檸檬酸溶液把水調(diào)到pH6和pH4。氨水溶液：氨水含量要求20%-25%，把2mL的氨水加水稀釋至100mL。甲醇-甲酸溶液：把甲醇、甲酸按體積比（6+4）混勻。無水乙醇-氨水-水溶液：把無水乙醇、氨水溶液、水按體積比（7+2+1）混勻。聚酰胺粉（尼龍6）：過200μm（目）篩。無水乙醇（CH3CH2OH），乙酸（CH3COOH）。

2.標準品。檸檬黃（CAS︰1934-21-0）；莧菜紅（CAS︰915-67-3）；胭脂紅（CAS︰2611-82- 7）；日落黃（CAS︰2783-94-0）；亮藍（CAS︰3844-45-9）。

3.標準溶液配制。購買濃度為0.500mg/L合成著色劑標準溶液，吸取2.0mL標準溶液，加pH6的水定容至10.0mL，配成濃度為0.100mg/mL的標準使用液。分別吸取濃度為0.100mg/mL標準溶液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0mL加pH6的水定容至10.0mL，配成每毫升相當1.0μg、2.0μg、5.0μg、10.0μg、20.0μg的合成著色劑。

二、儀器和設(shè)備

配有紫外可見光檢測器的LC-2010AHT高效液相色譜儀，日本島津公司。電子天平，美國賽多利斯丹佛，型號TP-213，感量為0.001g。HWS-12恒溫水浴鍋，上海一恒科學儀器有限公司。G3垂融漏斗。

三、實驗方法

1.試樣制備。稱取果醬產(chǎn)品3-5g（精確至0.001g），放入100mL的小燒杯中，加入約30mL水，攪拌溶解（不溶解的樣品可以適當延長時間或提升溫度至全部溶解）。如果溶解后的樣品溶液pH較高，可用檸檬酸溶液把樣品溶液的酸堿度調(diào)成pH6。

2.色素提取。果醬產(chǎn)品的色素提取選用聚酰胺吸附法，試驗過程要注意溶液的溫度和pH值。先稱量1g聚酰胺粉于小燒杯中，加少許水調(diào)成粥狀備用；再把樣品溶液加熱到60℃，趁熱把準備好的聚酰胺粉倒入樣品溶液中，攪拌1分鐘后，用G3垂融漏斗對樣品溶液進行抽濾；將大約20mL的水（pH為4，溫度為60℃）倒入燒杯進行洗滌，并把洗滌水倒入G3垂融漏斗中抽濾；上述洗滌操作重復3-5次，然后用甲醇-甲酸溶液洗滌3-5次，再用水洗滌至樣品溶液為中性。換一個接收瓶，用乙醇-氨水-水混合溶液進行解吸，重復3-5次，直到聚酰胺粉上的色素被完全解吸出來；收集全部解吸液，加入乙酸中和，水浴加熱蒸發(fā)至近干，加水溶解，定容到10mL；經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾后，上機分析。根據(jù)保留時間定性，以外標峰面積法定量。

3.液相色譜條件。色譜柱為SHIMSEN Ankylo C18（250mm×4.6mm，5μm），檢測波長為254nm，柱溫控制在35℃，流速為1.0mL/min，進樣量為10μL。其中，流動相A為乙酸銨溶液，流動相B為甲醇（色譜純），梯度洗脫程序詳見表1。

四、結(jié)果計算

試樣中著色劑含量的計算公式如下：

其中，X為樣品著色劑含量，g/kg；m為樣品質(zhì)量，g；v為試樣稀釋總體積，mL；1000為換算系數(shù)。

五、檢出限、回收率和精密度

1.檢出限。將濃度為1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL的標準溶液分別上機測定得出峰面積數(shù)據(jù)，以色素的含量（μg/mL）為橫坐標X，以峰面積為縱坐標Y，繪制坐標圖，進行線性回歸分析，回歸方程如表2所示。

2.回收率。在相同基質(zhì)的空白樣品中加入6個目標色素（加標量1mL，濃度為20μg/mL），加標后進行前處理，上機測定，經(jīng)計算得出加標回收率及相對標準偏差，詳見表3。

六、綜述

根據(jù)GB 5009.35-2016《食品安全國家標準 食品中合成著色劑的測定》規(guī)定，檸檬黃、日落黃、莧菜紅、胭脂紅的方法檢出限為0.5mg/kg，亮藍為1.0mg/kg。在上述檢出限驗證試驗中，色素線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)R2達到0.999以上，說明方法檢出限滿足標準要求。果醬產(chǎn)品中目標色素的回收率在83.1%-100.7%之間，對于樣品前處理經(jīng)過吸附、解析再上機測定的實驗過程來說，回收率已經(jīng)滿足要求?；厥章?次試驗的相對標準偏差RSD在3.3%-5.3%之間，均在6%以內(nèi)，數(shù)據(jù)穩(wěn)定。目標色素在重復條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值占算術(shù)平均值的百分比在3.4%-8.9%之間，符合國家標準不超過10%的規(guī)定。

綜上所述，果醬產(chǎn)品中檸檬黃、日落黃、莧菜紅、胭脂紅、亮藍的測定可參照GB 5009.35-2016《食品安全國家標準 食品中合成著色劑的測定》執(zhí)行，其檢出限、回收率和精密度均滿足該標準規(guī)定。

作者簡介：劉少梅（1980-），女，漢族，質(zhì)量工程師，大學本科，研究方向為質(zhì)量管理、食品檢驗。