糧油食品中的黃曲霉毒素檢測(cè)技術(shù)分析

◎ 趙 亮

（中衛(wèi)市糧油質(zhì)量檢驗(yàn)和應(yīng)急物資儲(chǔ)備中心，寧夏 中衛(wèi) 755000）

隨著社會(huì)的發(fā)展和人們生活水平的不斷提高，人們對(duì)個(gè)人的健康和高品質(zhì)食品的要求越來越迫切。黃曲霉毒素易存在于各種堅(jiān)果中，誤食黃曲霉毒素能夠?qū)θ梭w造成極大損害，因此對(duì)糧油食品中的黃曲霉毒素檢測(cè)尤為重要。黃曲霉毒素不但會(huì)增加人體患癌的概率，嚴(yán)重超標(biāo)時(shí)會(huì)導(dǎo)致中毒死亡，因此本文將介紹幾類糧油食品中黃曲霉毒素檢測(cè)的技術(shù)。

1 黃曲霉毒素以及黃曲霉毒素的毒性特征

1.1 黃曲霉毒素

在所有糧油產(chǎn)品中影響品質(zhì)和質(zhì)量最為嚴(yán)重的毒素就是黃曲霉毒素，黃曲霉毒素屬于一類真菌毒素，是由黃曲霉、寄生曲霉以及特曲霉等產(chǎn)毒真菌，侵染寄主后產(chǎn)生的一類有毒次生代謝產(chǎn)物。目前，國內(nèi)及國外科學(xué)家已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了二十多類黃曲霉毒素及其衍生物，例如黃曲霉毒素B1（AFB1）、黃曲霉毒素B2（AFB2）、黃曲霉毒素G1（AFG1）等，在糧油食品中以AFB1數(shù)量最多。目前國內(nèi)及國際眾多檢測(cè)機(jī)構(gòu)已在包括花生、大豆、玉米等100多種農(nóng)產(chǎn)品和食品中檢測(cè)出了黃曲霉毒素，以花生和玉米中的檢測(cè)含量最多[1]。

1.2 黃曲霉毒素的毒性特征

黃曲霉毒素是目前人們所發(fā)現(xiàn)的毒性最強(qiáng)的真菌毒素。人體攝入過量的黃曲霉毒素后，對(duì)人體的肝臟、腎臟等眾多器官造成損害，長期攝入會(huì)引發(fā)各組織器官的癌變，嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致器官衰竭。黃曲霉毒素種類繁多，不同類型的黃曲霉毒素毒性也有著一定的區(qū)別。其中AFB1的毒性最強(qiáng)，毒性遠(yuǎn)高于砒霜等一些有毒物質(zhì)。

在長期的醫(yī)學(xué)觀察和研究中發(fā)現(xiàn)，AFB1和人體患肝癌之間有著非常密切的聯(lián)系。盡管黃曲霉毒素?zé)o論是在毒性上還是對(duì)人體所產(chǎn)生的致癌表現(xiàn)上都比較強(qiáng)，但因黃曲霉毒素所造成的急性中毒案件數(shù)量卻沒有很多。

2 糧油食品中幾類常見的黃曲霉毒素檢測(cè)技術(shù)

當(dāng)前用于檢測(cè)糧油食品中的黃曲霉毒素的方法有很多，有高效液相色譜法、免疫分析法或薄層色譜法等。其中高效液相色譜法是最為常見和應(yīng)用最為廣泛的檢測(cè)方式，受國內(nèi)外眾多檢測(cè)機(jī)構(gòu)的歡迎和認(rèn)可[2]。

2.1 高效液相色譜法

高效液相色譜法，在糧油食品黃曲霉毒素的檢測(cè)中總體表現(xiàn)較好，使用簡單，精準(zhǔn)度較高，操作便捷，高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)組成見圖1。

圖1 高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)組成圖

高效液相色譜法屬于色譜法的一類，甲醇作為流動(dòng)相，利用四元泵將一些緩沖液及溶劑泵入色譜柱中。高效液相色譜法能將所采集的糧油食品樣品中的不同組成部分成功分離，分離后借助先進(jìn)的檢測(cè)記錄系統(tǒng)，能準(zhǔn)確的發(fā)現(xiàn)樣品中的各相關(guān)元素。高效液相色譜法在對(duì)糧油食品中的黃曲霉毒素進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，基本上會(huì)有以下3個(gè)主要的環(huán)節(jié)：①技術(shù)人員使用甲醇等溶液的提取溶劑，對(duì)所要檢測(cè)的糧油食品樣品物質(zhì)進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚怼＂谔崛〕鰳悠泛笫褂脼V膜過濾并放置在反向色譜柱中，通過熒光檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。③通過對(duì)獲得的峰高以及峰面積利用綜合外標(biāo)法進(jìn)行分析，能夠成功確定被檢測(cè)樣品中的黃曲霉毒素含量。

在技術(shù)人員使用高效液相色譜法檢測(cè)糧油食品的黃曲霉毒素的過程中，為使樣品的純度保持在較高水平，技術(shù)人員會(huì)將高效液相色譜法與其他技術(shù)相融合，從而準(zhǔn)確測(cè)定黃曲霉毒素包括特異性在內(nèi)的眾多數(shù)據(jù)。除此之外，為了能夠準(zhǔn)確提取出糧油食品中所存在的黃曲霉毒素，提高整個(gè)實(shí)驗(yàn)的靈敏度，使用三氟乙酸柱前衍生化技術(shù)結(jié)合高效液相色譜檢測(cè)，能夠顯著提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度、科學(xué)性和靈敏度。同時(shí)還能夠?qū)Χ喾N黃曲霉毒素進(jìn)行分析，得到更加可靠且詳實(shí)的數(shù)據(jù)。

黃曲霉毒素種類眾多，技術(shù)人員在區(qū)分各種類型的黃曲霉毒素時(shí)需要付出大量的時(shí)間。除此之外，一些種類的黃曲霉毒素檢驗(yàn)的靈敏度較低，在檢測(cè)時(shí)需要技術(shù)人員嚴(yán)格按照規(guī)范的操作流程來進(jìn)行操作，同時(shí)也要詳細(xì)的進(jìn)行觀察，并結(jié)合衍生化的方式作進(jìn)一步處理[3]。

2.2 免疫分析法

除高效液相色譜法以外，免疫分析法也被廣泛應(yīng)用于檢測(cè)糧油食品中的黃曲霉毒素。免疫分析法的應(yīng)用原理是化學(xué)反應(yīng)，當(dāng)糧油產(chǎn)品中存在黃曲霉毒素時(shí)，黃曲霉毒素抗原抗體會(huì)與免疫分析方法中的相關(guān)試劑進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，最終確定出是否存在黃曲霉毒素，以及黃曲霉毒素的實(shí)際含量。免疫分析法操作比較簡單，檢測(cè)的準(zhǔn)確度較高，技術(shù)人員在進(jìn)行操作時(shí)能夠快速完成整個(gè)操作流程。免疫分析法能夠清晰地得出糧油食品樣品中的黃曲霉毒素的具體種類，同時(shí)比較清晰的判斷出樣品中所摻雜的黃曲霉毒素的主要分子結(jié)構(gòu)。免疫分析檢測(cè)方法主要包括酶聯(lián)免疫吸附法和競爭法，根據(jù)具體的檢測(cè)要求或者現(xiàn)場(chǎng)的設(shè)備需要選擇應(yīng)用。

2.2.1 酶聯(lián)免疫吸附法

酶聯(lián)免疫吸附法是根據(jù)黃曲霉毒素中的酶進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，提升自身的退化作用，增強(qiáng)抗原抗體的反應(yīng)，提升黃曲霉毒素中酶的特異性，在酶發(fā)生化學(xué)反應(yīng)后，根據(jù)實(shí)際顏色的變化情況，借助專門的檢測(cè)儀器測(cè)定糧油食品樣本中黃曲霉毒素的詳細(xì)含量。

2.2.2 競爭法

競爭法指的是糧油食品中樣品的黃曲霉毒素與克隆體之間產(chǎn)生競爭關(guān)系后將其中的微孔進(jìn)行顯色，根據(jù)吸收光值的數(shù)量測(cè)量其中黃曲霉毒素的變化，光值吸收的數(shù)量越來越多，樣品中黃曲霉毒素的含量就越來越少。反之，如果光值吸收的數(shù)量越來越少，那么樣品中的黃曲霉毒素含量就越來越多[4]。競爭法在檢測(cè)糧油食品中的黃曲霉毒素屬于一類較為準(zhǔn)確且高效的方法，也是在實(shí)踐應(yīng)用中使用次數(shù)較多的方法。

2.3 薄層色譜法

薄層色譜方法是根據(jù)各種成分對(duì)同一種吸附劑所表現(xiàn)出來的吸附能力的差異對(duì)其進(jìn)行分離。糧油食品中的樣品溶劑流過吸附劑時(shí)，樣品中各成分吸附能力不同導(dǎo)致各成分進(jìn)行分離。薄層色譜法最早出現(xiàn)于20個(gè)世紀(jì)五六十年代，隨著該技術(shù)的不斷發(fā)展和不斷創(chuàng)新，設(shè)備的先進(jìn)水平不斷提升和人員技術(shù)水平的顯著提高，薄層色譜法的檢測(cè)準(zhǔn)確率和操作簡便性也在逐步提高，但相較于其他兩類檢測(cè)技術(shù)，薄層色譜法檢測(cè)所需的時(shí)間更長。

薄層色譜法在進(jìn)行測(cè)定時(shí)，檢測(cè)人員用適宜的提取溶劑將黃曲霉毒素從糧油食品樣品中分離出來，經(jīng)過溶劑萃取純化后在薄層板上層析展開，之后再進(jìn)行分離，同時(shí)借助黃曲霉毒素的熒光特性，判斷熒光斑點(diǎn)的大小和強(qiáng)弱，進(jìn)而有效測(cè)出樣品中的黃曲霉毒素含量。

一般來說，薄層色譜法分單向和雙向展開法兩種，樣品在檢測(cè)前需進(jìn)行多個(gè)步驟處理，在提取、萃取等眾多環(huán)節(jié)所表現(xiàn)出來的質(zhì)量和效果并不十分顯著。如果提取液中包含的雜質(zhì)較多，那么在利用儀器來檢測(cè)熒光斑點(diǎn)的大小和強(qiáng)弱時(shí)就會(huì)出現(xiàn)誤差。雙向展開法在一定程度上有效提高了提取液的純度，防止了提取液中雜質(zhì)對(duì)于檢測(cè)結(jié)果的干擾，但工作步驟增加，檢測(cè)時(shí)間延長。薄層色譜雙向展開法能夠提高雜質(zhì)的去除率，保障結(jié)果的準(zhǔn)確度。

3 結(jié)語

黃曲霉毒素是一種毒性極強(qiáng)的真菌毒素，經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)在糧食產(chǎn)品中，如玉米、花生、大豆等。為保障人們的飲食安全，防止含有黃曲霉毒素的糧油食品流入市場(chǎng)，對(duì)糧油產(chǎn)品中的黃曲霉毒素進(jìn)行準(zhǔn)確且有效地檢測(cè)具有重要的意義[5]?？傊?，未來技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)根據(jù)實(shí)際技術(shù)條件以及目標(biāo)需求來運(yùn)用相應(yīng)的檢測(cè)手段，及時(shí)準(zhǔn)確地對(duì)糧油產(chǎn)品黃曲霉毒素進(jìn)行檢測(cè)，保障糧油食品的安全，從而確保人體健康。