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      液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測食品中 托曲珠利及其殘留標(biāo)志物

      2021-09-04 02:58:08柯麗群王同珍張泳儀
      現(xiàn)代食品 2021年11期
      關(guān)鍵詞:工作液乙腈液相

      ◎ 柯麗群,王同珍,張泳儀

      (廣東省中鼎檢測技術(shù)有限公司,廣東 東莞 523000)

      托曲珠利是三嗪類抗球蟲藥物,具有高效、低毒和廣譜的驅(qū)蟲特性,在畜牧業(yè)生產(chǎn)中作為抗球蟲藥物被廣泛應(yīng)用。托曲珠利被動物吸收后,通過代謝轉(zhuǎn)化為托曲珠利標(biāo)志物,即托曲珠利砜[1-3]。托曲珠利的藥效時間短,實際生產(chǎn)中需要長期給藥,才能達到防治球蟲的目的,因此此藥物容易造成殘留積累,經(jīng)過食物鏈傳遞至消費者體內(nèi),影響消費者的身體健康。在生產(chǎn)中托曲珠利藥物的使用有嚴格的限量標(biāo)準,《食品安全國家標(biāo)準 食品中獸藥最大殘留限量》 (GB 31650—2019)規(guī)定了托曲珠利標(biāo)志物托曲珠利砜在家禽(產(chǎn)蛋期禁用)和所有哺乳類食品動物(泌乳期禁用)的肌肉中的最高殘留限量為100 μg·kg-1[4-5]。

      目前對托曲珠利的測定方法主要有液相色譜法[6-9]和液質(zhì)法[10-11]。液相色譜法,測定時各種化合物之間的相互干擾較大,容易造成各個目標(biāo)峰的結(jié)果不準確。由于托曲珠利的特征碎片離子較少,因此采用液質(zhì)法測定該化合物時,通常采用母離子碎片信息定性定量,容易受基質(zhì)效應(yīng)的影響,造成測試結(jié)果不準確。本文對樣品的提取、凈化和儀器方法條件進行了優(yōu)化,建立了具有高靈敏度和高選擇性的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法,同時快速準確檢測托曲珠利及其標(biāo)志物托曲珠利砜,內(nèi)標(biāo)法定量,能夠降低基質(zhì)效應(yīng)的影響。

      1 材料與方法

      1.1 儀器與試劑

      H-Class-TQS-Micro液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀(美國Waters公司);氮吹儀(上海安譜實驗科技股份有限公司);離心機(北京時代北利離心機有限公司)。

      托曲珠利、托曲珠利砜,采購于德國DR.E公司;托曲珠利-D3、托曲珠利砜-D3,采購于德國WITEGA Laboratorien公司。

      乙腈、甲醇、甲酸(色譜純,Merck公司);HLB固相萃取柱(6 mL,200 mg,Waters公司);0.22 μm水系濾膜(天津津滕公司);實驗室用水為Milli-Q超純水。

      1.2 試驗方法

      1.2.1 溶液配制

      (1)標(biāo)準貯存溶液配制。分別準確稱取10 mg托曲珠利、托曲珠利砜及托曲珠利-D3、托曲珠利砜 -D3于10 mL的容量瓶中,用乙腈配成4份濃度各為 1 000 mg·L-1標(biāo)準貯備液,-20 ℃保存。

      (2)混合標(biāo)準中間液配制。量取托曲珠利、托曲珠利砜貯備液置棕色容量瓶中,用乙腈稀釋成濃度為10 mg·L-1混合標(biāo)準工作液。

      (3)混合內(nèi)標(biāo)中間液配制。量取托曲珠利-D3、托曲珠利砜-D3貯備液置棕色容量瓶中,用乙腈稀釋成濃度為10 mg·L-1混合標(biāo)準工作液。

      (4)標(biāo)準工作曲線溶液配制。準確移取適量混合標(biāo)準工作液及混合內(nèi)標(biāo)工作液,用10%乙腈水稀釋配制成1~500 ng·mL-1的系列標(biāo)準溶液(內(nèi)標(biāo)均為40 ng·mL-1)。

      (5)0.5%甲酸-30%甲醇提取液配制。取5 mL甲酸,300 mL甲醇置于1 L容量瓶中,用水定容至刻度。

      1.2.2 樣品前處理

      (1)提取。準確稱取5.0 g(精確至0.01 g)樣品置于50 mL離心管中,準確加入混合內(nèi)標(biāo)工作液100 μL, 20 mL 30%甲醇水(含0.5%甲酸)溶液,漩渦混勻,超聲提取15 min,4 500 r·min-1離心5 min,上清液備用。

      (2)凈化。HLB凈化柱(200 mg,6 mL),預(yù)先依次用5 mL甲醇、5 mL水活化,精確移取4 mL備用液,以1~2滴/s的速度通過凈化柱,用5 mL 5%甲醇水淋洗,5 mL 90%乙腈10%甲醇洗脫,收集全部洗脫液于15 mL離心管中,置于45 ℃水浴下,氮吹至近干,準確加入1 mL 10%乙腈水溶解殘余物,過0.22 μm聚砜醚針式濾頭。濾液供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定。

      1.2.3 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件

      (1)液相色譜條件。Waters CORTECST UPLC C18色譜柱(2.1 mm×100 mm,1.6 μm);流動相: 5 mmol·L-1乙酸銨水溶液(A)-乙腈(B);流速:0.3 mL·min-1;進樣體積:2 μL;柱溫:45 ℃。液相色譜梯度洗脫程序:0~1.0 min,10% B;1.0~2.0 min,10%~90% B;2.0~4.0 min,90% B;4.0~4.1 min, 90%~10% B;4.1~7.0 min,10% B。

      (2)質(zhì)譜條件。離子源:電噴霧電離(ESI-),毛細管:2.0 kV;錐口電壓:25V;離子源溫度:150 ℃; 碰撞氣:氬氣;脫溶劑管溫度:500 ℃;掃描模式:多反應(yīng)監(jiān)測模式。

      2 結(jié)果與分析

      2.1 質(zhì)譜條件優(yōu)化

      分別將托曲珠利、托曲珠利砜及2種內(nèi)標(biāo)的標(biāo)準溶液配制成100 μg·L-1濃度的標(biāo)準溶液,確定化合物的質(zhì)譜條件,質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化結(jié)果見表1。

      表1 托曲珠利等化合物質(zhì)譜參數(shù)表

      2.2 流動相的選擇

      本研究優(yōu)化色譜流動相時,首先比較了乙腈-水體系和甲醇-水體系的分離效果。結(jié)果表明,當(dāng)使用甲醇-水體系作為分離流動相時,化合物峰出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象,故選擇乙腈-水體系作為分離流動相。采用負離子掃描的質(zhì)譜方法,為避免抑制負離子掃描模式下的離子化效果,流動相為不含酸體系。為進一步改善峰形,使用5 mmol·L-1醋酸銨代替純水。

      2.3 前處理條件優(yōu)化

      分別考察了乙腈-水(3∶7,V/V)、含0.5%甲酸的乙腈-水(3∶7,V/V)、甲醇-水(3∶7,V/V)、含0.5%甲酸的甲醇-水(3∶7,V/V)溶液的提取效果。乙腈和甲醇體系作為提取溶劑進行提取,均能得到良好的提取效果,但其中乙腈體系能夠更好的沉淀蛋白,減少雜質(zhì)的干擾,有利于下一步用HLB凈化,因此選用乙腈體系作為提取溶劑。對比乙腈-水(3∶7,V/V)與含有0.5%甲酸的乙腈-水(3∶7,V/V)的提取效果,發(fā)現(xiàn)使用含有0.5%的乙腈-水(3∶7,V/V)時整體表現(xiàn)出更好的回收率,因此最終選用含有0.5%的乙腈-水(3∶7,V/V)作為提取溶劑。

      2.4 線性范圍及定量限

      準確移取適量混合標(biāo)準工作液及混合內(nèi)標(biāo)工作液,用10%乙腈水稀釋配制成5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、20 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1、200 ng·mL-1、500 ng·mL-1的系列標(biāo)準溶液(內(nèi)標(biāo)均為40 ng·mL-1),依次從低濃度到高濃度進行分析,按照峰面積與對應(yīng)的溶液的質(zhì)量濃度做標(biāo)準曲線,見表2。

      表2 托曲珠利、托曲珠利砜的線性范圍、相關(guān)系數(shù)及檢出限表

      2.5 回收率及精密度實驗

      以空白雞蛋為樣品,在5 μg·kg-1、20 μg·kg-1和100 μg·kg-13個水平下進行加標(biāo)回收實驗,每個水平平行測定7次,計算回收率和相對標(biāo)準偏差,在優(yōu)化后的實驗條件下托曲珠利及其標(biāo)志物的回收率為73.4%~104.7%,RSD≤9.2%,滿足日常檢測的要求,結(jié)果見表3。

      表3 托曲珠利及其標(biāo)志物回收率和相對標(biāo)準偏差表(n=7)

      3 結(jié)論

      本研究建立一種托曲珠利及其殘留標(biāo)志物的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法,樣品經(jīng)30%乙腈水(含0.5%甲酸)溶液提取,過HLB固相萃取柱凈化。本方法中托曲珠利及其殘留標(biāo)志物在一定范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)均大于0.99。通過優(yōu)化前處理過程的提取溶劑,提高回收率和穩(wěn)定性。該方法操作簡便,靈敏度高,可滿足食品中托曲珠利及其殘留標(biāo)志物的日常檢測要求。

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