彭 婧 肖傳斌 王春秀

1.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，鄭州450001；2.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，鄭州450001

中國傳統(tǒng)中草藥板藍(lán)根性寒味苦，內(nèi)含靛甙、靛玉紅、生物堿和多糖等成分，具有清熱解毒、涼血消腫、利咽之功效[1-2]。板藍(lán)根多糖（IRP）是從板藍(lán)根中提取出的一類具有多種生理功能的活性多糖，由于其具有多種免疫調(diào)節(jié)功能，且天然、低毒、無殘留等優(yōu)點(diǎn)，成為近年人們研究的熱點(diǎn)。郭新華等[3]研究表明，板藍(lán)根多糖能顯著增加雛雞胸腺、脾臟和法氏囊等免疫器官指數(shù)，促進(jìn)B細(xì)胞發(fā)育，提高雛雞新城疫疫苗免疫后血清抗體滴度；Qiu 等[4]研究證實(shí)，板藍(lán)根多糖能明顯促進(jìn)T淋巴細(xì)胞增殖，進(jìn)而提高雛雞ND-IB 二聯(lián)弱毒疫苗的血清抗體水平；許益明等[5]報道小鼠通過腹腔注射IRP 對非特異性免疫和特異性免疫均有一定的增強(qiáng)作用；張婷婷等[6]研究表明，在缺乳仔鼠飼料中添加一定劑量的板藍(lán)根多糖可以促進(jìn)缺乳仔鼠免疫器官發(fā)育，增加正常小鼠的脾和胸腺指數(shù)；趙珊珊等[7]研究證明，板藍(lán)根多糖可以促進(jìn)無初乳仔鼠十二指腸黏膜IgG 和SIgA陽性細(xì)胞的表達(dá)，增強(qiáng)無初乳仔鼠的消化道黏膜免疫功能。目前，對板藍(lán)根多糖的研究多限于其免疫增強(qiáng)功能，而對其促進(jìn)消化道發(fā)育及增強(qiáng)黏膜免疫功能等研究甚少。賀琴等[8]報道酵母壁多糖能提高斷奶仔豬生產(chǎn)性能，促進(jìn)斷奶仔豬消化道黏膜上皮細(xì)胞發(fā)育；路萬平等[9]證明，板藍(lán)根多糖可以促進(jìn)缺乳仔鼠十二指腸發(fā)育，增加小腸黏膜絨毛高度，增強(qiáng)消化道消化吸收功能。本試驗(yàn)?zāi)康氖翘接懓逅{(lán)根多糖對少乳仔鼠空腸形態(tài)學(xué)的影響，通過為板藍(lán)根多糖的開發(fā)應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 器材及藥品

BM-VII 生物包埋機(jī)，購自孝感宏業(yè)醫(yī)用儀器有限公司；YD-A 智能型組織攤片機(jī)，購自金華益迪醫(yī)療設(shè)備廠；石蠟切片機(jī)，購自德國LEICA 公司；Leica 顯微鏡DM 2 000，購自德國LEICA 公司；圖像分析系統(tǒng)Moticam 2 306 3.0 Mplexl，購自美國Moti?cam公司；板藍(lán)根，購自河南省藥材公司。

1.2 試驗(yàn)動物

40 只♀鼠、20 只♂鼠（2.5月齡SPF 級SD 大鼠）均購于鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心。

1.3 試驗(yàn)方法

1）板藍(lán)根多糖的提取純化及測定。板藍(lán)根→粉碎→稱量→乙醚脫脂→熱水浸提→離心取上清液→殘渣重復(fù)浸提2次→合并上清液→減壓濃縮→透析→測含糖量→乙醇沉淀→有機(jī)溶劑洗滌→真空干燥，采用硫酸蒽酮法檢測板藍(lán)根多糖含量為89.89%。板藍(lán)根多糖用去離子水溶解，常規(guī)高壓消毒備用。

2）試驗(yàn)動物分組和不同處理。2.5月齡SPF 級SD 大鼠，♀40 只、♂20 只，按雌雄比2∶1 隨機(jī)分20 組自由繁殖。母鼠分娩后，0日齡仔鼠按剪腳指（趾）甲法隨機(jī)分為4 組：A 組（初乳組）、B 組（少乳組）、C組（少乳+板藍(lán)根多糖中劑量組）、D 組（少乳+板藍(lán)根多糖高劑量組）。A 組仔鼠正常飼養(yǎng)，B、C 組仔鼠每天08:00 與母鼠分籠，20:00 與母鼠合籠。A～D組仔鼠每天19:00 分別灌胃0.9% NaCl、0.9% NaCl、20 mg/kg 板藍(lán)根多糖和40 mg/kg 板藍(lán)根多糖，灌胃劑量均按20μL 配制，1 次/d，連續(xù)灌胃7 d。各試驗(yàn)組仔鼠均在21日齡斷奶。

3）試驗(yàn)動物取材。試驗(yàn)結(jié)束后，分別在仔鼠7、14、21、28日齡時取材，小鼠斷頭致死，迅速取空腸2～3 mm，浸入新配制的生理鹽水涮洗掉腸內(nèi)容物，Boin，s 固定液固定24 h，石蠟切片，片厚7 μm，常規(guī)H-E染色。

4）測量指標(biāo)與方法。組織切片置于Leica 顯微鏡下觀察，利用Moticom2306/3.0 pixel圖象分析系統(tǒng)拍照并測量空腸的絨毛高度、隱窩深度、計算V/C值。每組選6 張切片，每張取5 個最高絨毛、最深隱窩進(jìn)行統(tǒng)計分析。用SPSS 11.0 對數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，試驗(yàn)結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 各試驗(yàn)組空腸黏膜絨毛高度

由表1可知，各日齡A組仔鼠空腸黏膜絨毛高度顯著大于B、C、D組，各日齡B組仔鼠空腸絨毛高度顯著小于C、D組；7日齡時，A、C組空腸絨毛高度顯著大于B、D組；14日齡時，A組空腸絨毛高度顯著大于B、C、D組，B、C、D各組仔鼠空腸黏膜絨毛高度差異不顯著；21日齡時，C組腸黏膜絨毛高度顯著大于B、D組；28日齡時，D組腸黏膜絨毛高度顯著大于B、C組。

表1 各試驗(yàn)組空腸黏膜絨毛高度mm

2.2 各試驗(yàn)組空腸隱窩深度

由表2可知，7日齡時，B 組仔鼠空腸隱窩深度顯著小于A、D 組，與C 組差異不顯著；14日齡時，C組仔鼠空腸隱窩深度小于A、B、D組，與A、D組差異顯著，與B 組差異不顯著；21日齡時，C 組仔鼠空腸隱窩深度小于A、B、D 組，差異不顯著；28日齡時，D組仔鼠空腸隱窩深度顯著小于A、B、C組。

表2 各試驗(yàn)組空腸隱窩深度mm

2.3 各試驗(yàn)組空腸V/C值

由圖1可知，隨著日齡的增長，V/C值呈下降趨勢，這可能是因?yàn)樵诔跗谧惺筇幱诳焖偕L期，絨毛長度增大速度小于隱窩深度增大速度。0～21日齡時，C 組V/C值顯著大于B、D 組；其中7日齡時，C組V/C值顯著大于A、B、D 組；14日齡時，A、B、C 組V/C值顯著大于D 組；21日齡時，C 組V/C值顯著大于B 組，與A、D 組差異不顯著；28日齡時，D 組V/C值顯著大于A、B、C組。

圖1 各試驗(yàn)組仔鼠V/C值

比較圖2和圖3可以看出，C 組21日齡少乳仔鼠空腸腸絨毛高度明顯大于A組。

圖2 A組21日齡空腸（10×40倍）

圖3 C組21日齡空腸（10×40倍）

3 討 論

空腸絨毛是由空腸黏膜上皮和固有膜呈指狀突起突向腸腔而成，是動物營養(yǎng)物質(zhì)吸收的主要部位，其發(fā)育狀況決定著營養(yǎng)物質(zhì)的吸收率和利用率?？漳c是動物營養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的最重要部位，空腸絨毛高度與吸收上皮細(xì)胞數(shù)量呈顯著正相關(guān)?？漳c絨毛高度的增加，使得吸收細(xì)胞面積增大，營養(yǎng)物質(zhì)的吸收效率提高，同時也有利于物質(zhì)的合成。當(dāng)空腸絨毛變矮時，表明空腸黏膜絨毛上皮吸收細(xì)胞數(shù)量減少，消化吸收能力降低。腸隱窩是腸絨毛基部上皮細(xì)胞下陷至固有膜形成的管狀結(jié)構(gòu)，隱窩深度的變化反映小腸黏膜上皮吸收細(xì)胞的更新速率[10]。隱窩深度變淺則說明腸黏膜上皮吸收細(xì)胞成熟率上升，上皮吸收細(xì)胞更新速率加快，小腸消化吸收功能增強(qiáng)。小腸絨毛高度與隱窩深度的比值（V/C值）是影響動物消化道消化吸收功能的形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，V/C值增大，表明消化道黏膜面積變大，消化吸收能力增強(qiáng)；V/C值減小，說明腸黏膜面積變小，消化吸收能力減弱。

板藍(lán)根多糖能增加空腸絨毛高度，降低隱窩深度，增加V/C值，可能有以下2 個方面的原因：①許多研究[11-15]證實(shí)，寡乳糖、寡半乳糖、甘露寡糖等多糖均可調(diào)節(jié)動物消化道微生物群系，抑制消化道有害微生物群，促進(jìn)消化道雙歧桿菌和乳酸菌等有益菌的增長，故推測板藍(lán)根多糖降解后能形成各種寡糖和單糖，抑制有害病原微生物群的黏附和繁殖，促進(jìn)有益菌群的發(fā)育，調(diào)節(jié)消化道微生態(tài)平衡，減少病原微生物產(chǎn)生的毒素對腸道絨毛上皮細(xì)胞的破壞作用，促進(jìn)腸道絨毛的發(fā)育。②陳群等[16]報道，動物消化道黏膜上皮細(xì)胞更新是一個耗能過程，約占全身能量的24%，而植物多糖能夠促進(jìn)胰島素分泌，影響糖代謝酶的活性，促使外周組織對葡萄糖的作用，抑制糖異生，加速葡萄糖代謝供能，促進(jìn)消化道黏膜上皮細(xì)胞的更新和發(fā)育。有關(guān)板藍(lán)根多糖促進(jìn)腸道發(fā)育的機(jī)理仍需進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

板藍(lán)根多糖是從中草藥板藍(lán)根中提取的植物活性多糖，具有天然、低毒、無殘留等優(yōu)點(diǎn)。給少乳仔鼠灌注不同劑量的板藍(lán)根多糖試驗(yàn)結(jié)果顯示：使用板藍(lán)根多糖能顯著增加空腸絨毛高度，降低隱窩深度，增大V/C值，促進(jìn)空腸的發(fā)育，增強(qiáng)空場消化吸收功能。使用中質(zhì)量濃度（20 mg/kg）的板藍(lán)根多糖對0～21日齡仔鼠空腸的發(fā)育效果明顯，而使用高質(zhì)量濃度（40 mg/kg）的板藍(lán)根多糖對21～28日齡仔鼠的空腸發(fā)育效果明顯。