袁媛 蔣全睿 吳瓊 朱曉晴 匡小霞 江玉婷 李鐵浪 李武 李江山

〔摘要〕 目的 研究按法刺激激痛點(diǎn)是否通過(guò)激活辣椒素受體1（transient receptor potential vanillic acid subtype 1， TRPV1）進(jìn)而產(chǎn)生效應(yīng)，初步探討按法止痛的作用機(jī)制。方法 60只SD大鼠隨機(jī)分為空白組10只和造模組50只，空白組不進(jìn)行造模和干預(yù)操作，僅正常飼養(yǎng);造模組以局部擊打配合離心跑臺(tái)法建立大鼠慢性激痛點(diǎn)模型。造模成功后，將40只成模大鼠再隨機(jī)分為模型組、按法組、按法+抑制劑組、按法+溶劑組，每組10只。模型組不進(jìn)行干預(yù);按法組給予局部按法治療;按法+抑制劑組給予腹腔注射辣椒平溶液（TRPV1抑制劑）和局部按法治療;按法+溶劑組給予腹腔注射溶劑和局部按法治療。按法操作由自制按法儀器進(jìn)行。取材后以免疫組化法檢測(cè)TRPV1;以酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定內(nèi)皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide sgnthase， eNOS）、一氧化氮（nitric oxide， NO）和五羥色胺（5-hydroxytryptamine， 5-HT）含量。結(jié)果 （1）與空白組相比，模型組TRPV1平均光密度值增高（P<0.05）;與模型組相比，按法組和按法+溶劑組TRPV1平均光密度值增高（P<0.05），按法+抑制劑組平均光密度值僅有數(shù)值降低但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;與按法組和按法+溶劑組相比，按法+抑制劑組TRPV1平均光密度值降低（P<0.05）。（2）與空白組相比，模型組NO 和eNOS含量增高（P<0.05）;與模型組相比，按法組、按法+抑制劑組和按法+溶劑組的NO和eNOS含量增高（P<0.05）;與按法組和按法+溶劑組相比，按法+抑制劑組的NO和eNOS含量降低（P<0.05）。（3）與空白組相比，模型組5-HT含量增高（P<0.05）;與模型組相比，按法組、按法+抑制劑組和按法+溶劑組的5-HT含量降低（P<0.05）;與按法組和按法+溶劑組相比，按法+抑制劑組的5-HT含量升高（P<0.05）。結(jié)論 按法刺激激痛點(diǎn)產(chǎn)生去活化效應(yīng)，其機(jī)制可能與激活TRPV1受體、上調(diào)eNOS和NO含量、降低5-HT含量有關(guān)。

〔關(guān)鍵詞〕 推拿;按法;激痛點(diǎn);辣椒素受體1;一氧化氮;內(nèi)皮型一氧化氮合酶;五羥色胺

〔中圖分類(lèi)號(hào)〕R244? ? ? ?〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A? ? ? ?〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2021.08.013

Effect of Local Pressing Stimulation on TRPV1 of Myofascial Trigger Point in Rats

YUAN Yuan， JIANG Quanrui， WU Qiong， ZHU Xiaoqing， KUANG Xiaoxia， JIANG Yuting， LI Tielang*， LI Wu*， LI Jiangshan

（Tui-na Teaching and Research Office， College of Acupuncture & Moxibustion and Tui-na， Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China）

〔Abstract〕 Objective To investigate whether transient receptor potential vanillic acid subtype 1 （TRPV1） could be activated by stimulation of myofascial trigger point （MTrP） by the pressing and to preliminary explore the mechanism of analgesia by pressing. Methods 60 SD rats were randomly divided into blank group （n=10） and model-establishment group （n=50）. The blank group did not carry out modeling and intervention， but only fed normally. In the model-establishment group， the model of MTrP was established by local hitting combined with eccentric running. After the evaluation of the model， the model rats were randomly divided into model group， pressing group， pressing + inhibitor group and pressing + solvent group， with 10 rats in each group. The model group did not intervene. The pressing group was given local pressing treatment. Pressing + inhibitor group was given intraperitoneal injection of capsaicin solution （TRPV1 inhibitor） and local pressing treatment. The pressing + solvent group was given intraperitoneal injection of solvent and local pressing treatment. The pressing operation was carried out by a self-made pressing instrument. After sampling， the TRPV1 was detected by immunohistochemical method. The endothelial nitric oxide sgnthase （eNOS）， nitric oxide （NO） and 5-hydroxytryptamine （5-HT） were detected by enzyme-linked immunosorbent assay. Results （1） Compared with the blank group， the average optical density of TRPV1 in the model group was significantly higher （P<0.05）. Compared with the model group， the average optical density of TRPV1 in the pressing group and pressing + solvent group increased （P<0.05）， while the average optical density of the pressing + inhibitor group was only decreased， but the difference was not statistically significant （P>0.05）. （2） Compared with the blank group， the content of NO and eNOS in the model group increased （P<0.05）. Compared with the model group， the content of NO and eNOS in the pressing group， pressing + inhibitor group and pressing + solvent group increased （P<0.05）. Compared with the pressing group and pressing + solvent group， the content of NO and eNOS in the pressing + inhibitor group decreased （P<0.05）. （3） Compared with the blank group， the content of 5-HT in the model group was significantly higher （P<0.05）. Compared with the model group， the content of 5-HT in the pressing group， pressing + inhibitor group and pressing + solvent group decreased （P<0.05）. Compared with the pressing group and the pressing + solvent group， the content of 5-HT in the pressing + inhibitor group was increased （P<0.05）. Conclusion The deactivation effect of MTrP by the pressing may be related to the activation of TRPV1 receptor， up-regulation of eNOS and NO content and decrease of 5-HT content.

〔Keywords〕 massage; pressing; myofascial trigger point; transient receptor potential vanillic acid subtype 1; nitric oxide; endothelial nitric oxide synthase; 5-hydroxytryptamine

肌筋膜激痛點(diǎn)（myofascial trigger point， MTrP），又叫扳機(jī)點(diǎn)、觸發(fā)點(diǎn)，是骨骼肌緊繃肌帶內(nèi)高度敏感的應(yīng)激點(diǎn)，根據(jù)是否伴有自發(fā)性疼痛，可分為活性激痛點(diǎn)與隱性激痛點(diǎn)，隱性激痛點(diǎn)無(wú)自發(fā)疼痛，但是肌肉損傷、疲勞和營(yíng)養(yǎng)缺乏等均可使MTrP活化，產(chǎn)生疼痛、活動(dòng)受限、感覺(jué)異常和自主神經(jīng)紊亂等癥狀[1]。激痛點(diǎn)相關(guān)癥狀易發(fā)易反復(fù)，頸肩腰腿等部位為高發(fā)區(qū)域，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致抑郁、焦慮和睡眠障礙，大大降低生活質(zhì)量[2]。

激痛點(diǎn)相關(guān)疼痛的藥物治療包括肌肉松弛劑、抗炎藥和鎮(zhèn)痛藥等[3]，但長(zhǎng)期療效不理想，且易產(chǎn)生不良反應(yīng)。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為激痛點(diǎn)屬于“筋結(jié)”范疇，其痛癥屬于“經(jīng)筋病”，以“以痛為腧”為治療大法[4]，即對(duì)激痛點(diǎn)局部進(jìn)行針刺或點(diǎn)按彈撥等刺激。臨床實(shí)驗(yàn)[5]證實(shí)，按壓可以使MTrP去活化，緩解疼痛，但其作用機(jī)制不明確。目前，認(rèn)為微循環(huán)障礙和致痛物質(zhì)釋放是MTrP形成機(jī)制中的重要環(huán)節(jié)[6]。有研究[7]表明，辣椒素受體1（transient receptor potential vanillic acid subtype 1， TRPV1）激活后可以通過(guò)激活內(nèi)皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide sgnthase， eNOS）的途徑增加一氧化氮（nitric oxide， NO）釋放，改善局部微循環(huán)。本研究擬建立慢性大鼠激痛點(diǎn)模型，對(duì)大鼠激痛點(diǎn)進(jìn)行按法干預(yù)，并加入TRPV1抑制劑作為對(duì)照，檢測(cè)組織中TRPV1、eNOS、NO和五羥色胺（5-hydroxytryptamine， 5-HT）表達(dá)，探索按法刺激激痛點(diǎn)是否與激活TRPV1有關(guān)，從而揭示按法治療激痛點(diǎn)相關(guān)疼痛的部分作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1? 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組

SPF級(jí)健康SD大鼠60只，雄性，體質(zhì)量180～200 g，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)：SYXK（湘）：2019-0009。飼養(yǎng)溫度24～26 ℃，濕度50%～70%。實(shí)驗(yàn)方案中動(dòng)物倫理的問(wèn)題由湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)討論并批準(zhǔn)通過(guò)。60只大鼠隨機(jī)分為空白組10只和造模組50只?？瞻捉M不進(jìn)行造模和干預(yù)操作，僅正常飼養(yǎng);造模組經(jīng)造模評(píng)價(jià)成功后，選取40只成模大鼠隨機(jī)分為模型組、按法組、按法+抑制劑組和按法+溶劑組，每組10只。

1.2? 主要試劑與儀器

呼吸麻醉機(jī)（深圳瑞沃德，型號(hào)：R500通用型）;跑步機(jī)（金華市宇晟運(yùn)動(dòng)，型號(hào)：C100型）;按法治療儀與擊打器（自制）;超微量分光光度計(jì)（Thermo，型號(hào)：NanoDrop2000型）;瑞士帝肯IF50酶標(biāo)儀（瑞士帝肯，型號(hào)：IF50型）;辣椒平（MedChemExpress，貨號(hào)：HY-15640）;異氟烷（深圳瑞沃德，貨號(hào)：R510-22）;4%多聚甲醛溶液（武漢賽維爾生物科技有限公司，貨號(hào)：G1101-500ML）;TRPV1多克隆抗體（北京博奧森，貨號(hào)：BS-23926R）;山羊抗兔IgG聚合物（北京中杉金橋，貨號(hào)：PV-9001）;大鼠NO ELISA試劑盒（南京建成生物工程研究所，貨號(hào)：A013-2-1）;大鼠eNOS ELISA試劑盒（南京建成生物工程研究所，貨號(hào)：H195）;大鼠五羥色胺 ELISA試劑盒（南京建成生物工程研究所，貨號(hào)：H104）。

1.3? 動(dòng)物模型建立

造模參考黃強(qiáng)民團(tuán)隊(duì)改良并驗(yàn)證的離心運(yùn)動(dòng)結(jié)合鈍性打擊法[8]，分為適應(yīng)期、造模期和恢復(fù)期，其中，適應(yīng)期1周、造模期8周、恢復(fù)期4周，具體如下。經(jīng)過(guò)評(píng)價(jià)，滿(mǎn)足觸診和肌電評(píng)價(jià)造模成功共計(jì)42只。

1.3.1? 適應(yīng)期? 所有大鼠在造模前，在實(shí)驗(yàn)跑臺(tái)內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前訓(xùn)練，即跑臺(tái)-16°水平放置下，大鼠訓(xùn)練跑15 min，持續(xù)1周，使大鼠熟悉環(huán)境。

1.3.2? 造模期? 造模期每周第1天進(jìn)行鈍性打擊，采用異氟烷呼吸麻醉大鼠后，固定于打擊器底端，打擊器的鈍性木棒從20 cm高度落下，打擊大鼠左側(cè)股內(nèi)側(cè)肌標(biāo)記位置，動(dòng)能為2.352 J。打擊前由有經(jīng)驗(yàn)的臨床醫(yī)師對(duì)大鼠進(jìn)行觸診，確定大鼠股內(nèi)側(cè)肌位置并標(biāo)記，每次打擊位置均為該標(biāo)記位置。第2天進(jìn)行離心跑臺(tái)，將小動(dòng)物跑臺(tái)設(shè)置在-16°下坡跑模式，跑臺(tái)速度為16 m/min，對(duì)需要造模的所有大鼠進(jìn)行離心運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練，在跑臺(tái)過(guò)程中通過(guò)機(jī)械刺激與聲音刺激等方式驅(qū)趕大鼠，保證完成連續(xù)90 min的離心運(yùn)動(dòng)。其余5 d時(shí)間正常喂養(yǎng)，不作干預(yù)，持續(xù)8周。

1.3.3? 恢復(fù)期? 不進(jìn)行任何處理，每天正常喂養(yǎng)大鼠，正常活動(dòng)，持續(xù)4周?；謴?fù)期為大鼠激痛點(diǎn)能否穩(wěn)定存在的一個(gè)重要因素，排除急性損傷對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響。

1.3.4? 模型評(píng)價(jià)? 造模評(píng)價(jià)方法參考黃強(qiáng)民團(tuán)隊(duì)的標(biāo)準(zhǔn)[8]，即以觸診結(jié)合肌電的方法，具體操作為：觸摸鈍性打擊點(diǎn)肌肉，存在明顯的緊張帶，在緊張帶上尋找膨大結(jié)節(jié)，用電極插入膨大結(jié)節(jié)內(nèi)能引出局部抽搐反應(yīng)，肌電檢測(cè)出自發(fā)電位，則提示激痛點(diǎn)模型形成。

1.4? 激痛點(diǎn)定位和干預(yù)方法

1.4.1? 激痛點(diǎn)定位? 根據(jù)鈍性打擊點(diǎn)，先用手觸摸確定緊張帶位置，再在緊張帶上尋找硬結(jié)，用指甲掐按大鼠有抽搐反應(yīng)。

1.4.2? 按法操作? 選用自制的中醫(yī)按法刺激儀器[9]操作。將實(shí)驗(yàn)大鼠仰臥位放置固定，操作部位局部備皮，自制的儀器按照前期研究[10]調(diào)整好參數(shù)（力量0.7 kg、時(shí)間7.5 min、頻率10次/min），在相應(yīng)的激痛點(diǎn)上進(jìn)行按壓刺激。

1.4.3? 干預(yù)方法? 模型組不進(jìn)行干預(yù);按法組給予局部按法治療（參數(shù)如“1.4.2”，2 d/次，一共7次，共計(jì)14 d）;按法+抑制劑組給予腹腔注射辣椒平溶液（辣椒平粉末溶于10% Tween80+10% DMSO+80%生理鹽水，10 mg/kg，2 d/次，在按法操作前30 min進(jìn)行）和按法（同前）治療;按法+溶劑組給予腹腔注射溶劑和按法（同前）治療。

1.5? 組織標(biāo)本采集和處理

治療與檢測(cè)結(jié)束后，空氣栓塞法處死大鼠，再對(duì)標(biāo)記激痛點(diǎn)處進(jìn)行肌肉組織取材，將組織置于預(yù)冷生理鹽水中，并用生理鹽水清洗血跡，洗滌3次以上盡可能減少殘留血液，濾紙吸干，以-80 ℃冰箱或4%多聚甲醛保存。

1.6? 指標(biāo)檢測(cè)

1.6.1? TRPV1含量檢測(cè)? 采用免疫組化法檢測(cè)。激痛點(diǎn)組織取材后沖洗固定，石蠟切片脫蠟至水，置于盛滿(mǎn)檸檬酸抗原修復(fù)緩沖液（pH 6.0）的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)，放入3%雙氧水溶液阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，滴加3% BSA均勻覆蓋組織，室溫封閉30 min，加一抗和二抗，DAB顯色，蘇木素復(fù)染脫水封片。拍攝并通過(guò)Image-Pro Plus 6.0觀察分析其平均光密度值。

1.6.2? 組織eNOS、NO和5-HT含量測(cè)定? 采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定。按照說(shuō)明書(shū)要求操作，制備組織勻漿液樣本。室溫平衡后取出板條，按要求加樣設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，按要求滴加各步驟需要的試劑、37 ℃水浴孵育和洗板。在450 nm波長(zhǎng)測(cè)定各孔的OD值，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線并計(jì)算各樣本濃度值。

1.7? 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均使用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以“x±s”表示，進(jìn)行正態(tài)性、方差齊性檢驗(yàn)：滿(mǎn)足正態(tài)性者，組間比較采用單因素方差分析，方差齊時(shí)選擇LSD法，方差不齊時(shí)選擇Dunnett T3法;不滿(mǎn)足正態(tài)性時(shí)選擇秩和檢驗(yàn)。均以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1? 各組大鼠激痛點(diǎn)組織TRPV1平均光密度值比較

與空白組相比，模型組、按法組和按法+溶劑組TRPV1平均光密度值增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;按法+抑制劑組平均光密度值無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與模型組相比，按法組和按法+溶劑組TRPV1平均光密度值增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;按法+抑制劑組平均光密度值僅有數(shù)值降低，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與按法組、按法+溶劑組相比，按法+抑制劑組平均光密度值降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。按法組與按法+溶劑組平均光密度值比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表1、圖1。

2.2? 各組大鼠激痛點(diǎn)組織NO、eNOS和5-HT含量比較

與空白組相比，模型組、按法組、按法+抑制劑組和按法+溶劑組的NO、eNOS、5-HT含量均增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與模型組相比，按法組、按法+抑制劑組和按法+溶劑組的NO、eNOS含量增高，5-HT含量降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與按法組和按法+溶劑組相比，按法+抑制劑組的NO、eNOS含量降低，5-HT含量增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;按法組和按法+溶劑組的NO、eNOS、5-HT含量比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表2。

3 討論

慢性MTrP是急性損傷繼發(fā)局部供能障礙所致的一種慢性肌肉病變結(jié)構(gòu)，“能量危機(jī)學(xué)說(shuō)”[11]認(rèn)為，慢性勞損導(dǎo)致肌肉運(yùn)動(dòng)終板功能障礙，神經(jīng)末梢ACh過(guò)度釋放，使肌纖維膜持續(xù)去活化，肌質(zhì)網(wǎng)Ca2+通道開(kāi)放釋放Ca2+，同時(shí)，損傷導(dǎo)致肌細(xì)胞膜機(jī)械性破裂，細(xì)胞外Ca2+內(nèi)流，使得細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度升高，肌纖維收縮。攣縮肌節(jié)壓迫局部血管，導(dǎo)致微循環(huán)障礙，產(chǎn)生能量危機(jī)，其產(chǎn)生疼痛的重要因素之一是缺血缺氧導(dǎo)致周?chē)纳窠?jīng)血管反應(yīng)物大量釋放敏化此區(qū)域的致痛物質(zhì)（如5-HT和P物質(zhì)等）刺激感覺(jué)神經(jīng)[12]。

5-HT廣泛存在于哺乳動(dòng)物的組織中，但是其在中樞系統(tǒng)和外周系統(tǒng)的效應(yīng)不同：在中樞系統(tǒng)中，5-HT作為一種重要的神經(jīng)遞質(zhì)，調(diào)節(jié)機(jī)體的心理與生理活動(dòng)中，是多種生理、行為和認(rèn)知功能的關(guān)鍵[13];在外周組織中，5-HT是一種強(qiáng)血管收縮劑和平滑肌收縮刺激劑，并參與疼痛信號(hào)的傳導(dǎo)，與痛覺(jué)過(guò)敏密切相關(guān)[14]。本實(shí)驗(yàn)主要觀測(cè)5-HT在激痛點(diǎn)組織（外周）中的含量變化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與空白組相比，模型組的5-HT含量較高（P<0.05），表明激痛點(diǎn)造模后，局部5-HT含量增加。這與既往的研究類(lèi)似，即在疼痛模型大鼠中，組織局部5-HT含量上升[15]。此外，與模型組相比，按法組5-HT含量降低（P<0.05），這表明按法干預(yù)可以減少5-HT含量，也間接說(shuō)明按法緩解激痛點(diǎn)相關(guān)疼痛的作用，即激痛點(diǎn)的去活化作用，與本課題組前期研究[16]一致。

TRPV1是存在于細(xì)胞膜上的一種非選擇性的配體門(mén)控性陽(yáng)離子通道，是傷害性刺激的分子感受器，在傷害性刺激信息傳導(dǎo)過(guò)程中起著關(guān)鍵作用[17]。TRPV1參與了機(jī)體對(duì)刺激的感知、疼痛的傳遞以及鎮(zhèn)痛的機(jī)制，被認(rèn)為是疼痛調(diào)節(jié)的關(guān)鍵受體[18]，在疼痛、炎癥、溫度覺(jué)、調(diào)節(jié)血管功能等方面有重要意義[19]，其能夠被炎癥、疼痛、辣椒素、機(jī)械壓力等體內(nèi)多種因素激活。長(zhǎng)時(shí)間激活TRPV1可以使內(nèi)皮細(xì)胞舒張，改善內(nèi)皮細(xì)胞和血管功能[20]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，與空白組相比，模型組、按法組和按法+溶劑組的TRPV1平均光密度值增高（P<0.05），表明激痛點(diǎn)造模后，局部TRPV1受體含量增加。與模型組相比，按法組和按法+溶劑組的TRPV1平均光密度值增高（P<0.05）;與按法組和按法+溶劑組相比，按法+抑制劑組的TRPV1平均光密度值降低（P<0.05），表明按法刺激可以進(jìn)一步上調(diào)TRPV1的表達(dá)，而TPRV1抑制劑可以部分抑制該作用。

研究[21]認(rèn)為，激痛點(diǎn)局部組織循環(huán)灌注不佳，局部組織缺氧，出現(xiàn)氧耐量及氧適應(yīng)降低的病理特點(diǎn)。在調(diào)節(jié)血液循環(huán)方面，TRPV1可以促使eNOS生成NO，NO促進(jìn)cGMP與cAMP生成，進(jìn)而舒張血管改善血液循環(huán)[22]。NO是一種內(nèi)源性氣體分子，在人體內(nèi)作為信號(hào)分子具有重要的生物學(xué)功能，包括調(diào)節(jié)血流和舒張血管，抑制血管平滑肌的增生和調(diào)節(jié)代謝活動(dòng)等[23]。NO由NO合成酶（NOS）的3種亞型合成，即神經(jīng)元型（nNOS或NOS1）、誘導(dǎo)型（iNOS或NOS2）和內(nèi)皮型（eNOS或NOS3）[24]，調(diào)節(jié)NO可以改善局部組織微循環(huán)血流運(yùn)行，從而調(diào)節(jié)局部組織血液與營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)而改善其缺血缺氧病理狀態(tài)，促進(jìn)能量代謝，修復(fù)損傷[25]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與空白組相比，模型組大鼠NO與eNOS含量增高（P>0.05），這可能與激痛點(diǎn)造模后局部損傷組織應(yīng)激性保護(hù)相關(guān)，與既往研究結(jié)果類(lèi)似[26-27]。與模型組相比，按法組、按法+抑制劑組和按法+溶劑組的eNOS和NO含量增高（P<0.05）;與按法組和按法+溶劑組相比，按法+抑制劑組的eNOS和NO含量降低（P<0.05），表明按法刺激激痛點(diǎn)可以提高局部eNOS和NO含量，當(dāng)同時(shí)運(yùn)用TRPV1抑制劑時(shí)，可以部分抑制該作用。結(jié)合前述5-HT的變化趨勢(shì)：與按法組和按法+溶劑組相比，按法+抑制劑組的5-HT含量升高（P<0.05），即按法刺激激痛點(diǎn)可以降低局部5-HT含量，而同時(shí)使用TRPV1抑制劑可以部分阻斷該作用。

綜上所述，按法刺激激痛點(diǎn)可以減少5-HT的含量，在TRPV1被抑制情況下，該作用也被抑制。按法可以提高激痛點(diǎn)組織TRPV1、eNOS和NO含量，其中eNOS和NO與改善局部血液循環(huán)密切相關(guān)，當(dāng)TRPV1被抑制時(shí)，eNOS和NO含量減少，這表明按法刺激激痛點(diǎn)可能是通過(guò)激活TRPV1實(shí)現(xiàn)其效應(yīng)，即TRPV1是按法刺激激痛點(diǎn)的起效環(huán)節(jié)之一。

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