分光光度法測(cè)定不同食品基質(zhì)中氰化物的方法驗(yàn)證

◎ 許 萍，王春華，劉曉丹，馬金龍，于寶平

（1.上海城建職業(yè)學(xué)院，上海 201415；2.通標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)服務(wù)（上海）有限公司，上海 200233；3.中檢科（上海）測(cè)試技術(shù)有限公司，上海 201206）

氰化物分為有機(jī)氰化物和無(wú)機(jī)氰化物，均屬于高毒性化合物[1]。氰化物是具有極高活性的小分子物質(zhì)，在細(xì)菌、真菌、節(jié)肢動(dòng)物、脊椎動(dòng)物和植物中均能自然產(chǎn)生[2]。日常生活中常見(jiàn)的糧食類食品，例如木薯、玉米、小麥、豆類等都有天然氰化物的存在。在使用糧食作為釀酒原料時(shí)，氰化物會(huì)被帶入成品酒中。因此，針對(duì)糧食和蒸餾酒及其配制酒，氰化物的安全風(fēng)險(xiǎn)必須得到重視。

為了控制糧食和蒸餾酒及其配制酒的氰化物風(fēng)險(xiǎn)，國(guó)內(nèi)外監(jiān)管機(jī)構(gòu)規(guī)定了詳細(xì)的限量要求。歐盟于2007年發(fā)布通報(bào)，規(guī)定直接食用的杏仁中氫氰酸不得大于20 mg·kg-1。日本對(duì)水果、蔬菜、豆類谷物、小麥粉等食品的氰化物含量（以氫氰酸計(jì)）作出不同限量的具體規(guī)定[3]。我國(guó)是蒸餾酒生產(chǎn)、消費(fèi)大國(guó)，因此加強(qiáng)對(duì)蒸餾酒及其配制酒的氰化物監(jiān)管非常重要。在《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 蒸餾酒及其配制酒》（GB 2757—2012）中明確規(guī)定氰化物（按100%酒精度）不大于8.0 mg·L-1。

目前氰化物的測(cè)試方法較多，主要有分光光度法、氣相色譜法、離子色譜法[4]和滴定法等。我國(guó)測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)以GB 5009.36—2016為主，包括分光光度法、氣相色譜法和定性法。分光光度法儀器成本低，并且操作簡(jiǎn)便、可靠性好[5]，適合不同規(guī)模的實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)用較廣泛。本文參照GB 5009.36—2016分光光度法，對(duì)不同食品基質(zhì)中氰化物進(jìn)行測(cè)試，驗(yàn)證了方法的線性關(guān)系、精密度、回收率，建立了可靠的測(cè)試能力。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

瓦里安Cary 100 Scan型紫外分光光度計(jì)；梅特勒-托利多ME 204E電子天平。

異煙酸、吡唑酮（分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）、N-二甲基甲酰胺、氯胺T（有效氯含量≥11%）、水中氰標(biāo)準(zhǔn)溶液（50 mg·L-1，中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院）。

樣品為市售木薯粉、市售高粱酒。

1.2 氰標(biāo)準(zhǔn)使用液的配制

配制濃度為1 g·L-1的氫氧化鈉溶液，用氫氧化鈉溶液將水中氰標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋50倍，得到濃度為1 μg·mL-1的氰標(biāo)準(zhǔn)使用液。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 木薯粉氰化物含量測(cè)定

稱取試樣于蒸餾裝置，加水、乙酸鋅溶液、酒石酸，用氫氧化鈉溶液收集餾液。吸取樣液及0.0 mL、0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL和5.0 mL氰標(biāo)準(zhǔn)使用液（相當(dāng)于0.0 μg、0.1 μg、0.2 μg、0.5 μg、1.0 μg、2.0 μg、4.0 μg和5.0 μg氫氰酸）。分別加入氫氧化鈉溶液和酚酞指示液，用乙酸調(diào)至紅色消失，加磷酸鹽緩沖溶液，加溫至37 ℃，加入氯胺T溶液，放置5 min，加入5 mL異煙酸-吡唑酮溶液，加水后于40 ℃放置40 min，用2 cm比色杯于波長(zhǎng)638 nm處測(cè)吸光度。

1.3.2 高粱酒氰化物含量測(cè)定

吸取試樣，加氫氧化鈉溶液，放置10 min。吸取0 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL和2.0 mL氰標(biāo)準(zhǔn)使用液（相當(dāng)于0 μg、0.5 μg、1.0 μg、1.5 μg和2.0 μg氫氰酸），加入氫氧化鈉溶液。加入酚酞指示劑，用乙酸溶液調(diào)至紅色褪去，用氫氧化鈉溶液調(diào)至近紅色，加磷酸鹽緩沖溶液、氯胺T溶液，放置3 min，加入2 mL異煙酸-吡唑酮溶液，加水稀釋，30 ℃放置30 min，用1 cm比色杯于波長(zhǎng)638 nm處測(cè)吸光度。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性關(guān)系

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，分光光度法線性良好。木薯粉的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=6.514 03x+0.040 49，高粱酒標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=0.144 28x+0.000 44，相關(guān)系數(shù)均為0.999。符合GB/T 27417—2017的要求，相關(guān)系數(shù)不低于0.99。

2.2 精密度和加標(biāo)回收率

2.2.1 木薯粉

在稱取的10 g木薯粉中加標(biāo)3水平，相當(dāng)于加標(biāo)0.5 μg/10 g、1 μg/10 g、5 μg/10 g 樣品，測(cè)定氰化物含量結(jié)果見(jiàn)表1。表1中加標(biāo)前后氰化物含量的精密度最高7.4%，均不大于10%。結(jié)果顯示分光光度計(jì)法測(cè)試木薯粉精密度高、再現(xiàn)性好。精密度符合GB 5009.36—2016的要求，重復(fù)性條件下獲得的2次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不超過(guò)算術(shù)平均值的10%。表1中3個(gè)加標(biāo)水平最低回收率為80.3%，最高回收率達(dá)93.2%?；厥章史螱B/T 27404—2008的要求，被測(cè)組分含量為0.1～1 mg·kg-1時(shí)回收率范圍在80%～110%。

表1 木薯粉精密度和加標(biāo)回收率表

2.2.2 高粱酒

在吸取的1.0 mL樣品中兩水平加標(biāo)，相當(dāng)于加標(biāo)1 μg·mL-1、2 μg·mL-1樣品，測(cè)定氰化物含量結(jié)果見(jiàn)表2。從表2可以看出，加標(biāo)后測(cè)定氰化物含量的精密度最高3.8%，不大于10%。結(jié)果顯示分光光度計(jì)法測(cè)試高粱酒精密度高、再現(xiàn)性好。精密度符合GB 5009.36—2016的要求，重復(fù)性條件下獲得的2次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不超過(guò)算術(shù)平均值的10%。表2中兩個(gè)加標(biāo)水平最低回收率為90.0%，最高回收率達(dá)96.4%?；厥章史螱B/T 27404—2008的要求，被測(cè)組分含量為1～100 mg·kg-1時(shí)回收率范圍在90%~110%。

表2 高粱酒精密度和加標(biāo)回收率表

3 結(jié)論

本文參照GB 5009.36—2016分光光度法，對(duì)不同食品基質(zhì)中氰化物進(jìn)行測(cè)試，驗(yàn)證了不同食品基質(zhì)的測(cè)試精密度和回收率，均得到了符合要求的測(cè)試結(jié)果。①分光光度法操作簡(jiǎn)單，有利于測(cè)試人員的培訓(xùn)。②通過(guò)本文的方法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)可以看出分光光度法精密度高、重現(xiàn)性好，有利于實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制。③本文分光光度法適用于不同基質(zhì)，木薯粉和高粱酒的方法驗(yàn)證結(jié)果均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的要求。此外，對(duì)于顏色較深的或者混濁的蒸餾酒及其配制酒樣品，需要蒸餾預(yù)處理，預(yù)處理方法可參考糧食類樣品的蒸餾方法。④木薯粉和高粱酒的回收率均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)要求。本文分光光度法準(zhǔn)確度高，結(jié)果可信。

綜上所述，分光光度法可用于實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)糧食類食品和蒸餾酒及其配制酒，均達(dá)到檢測(cè)的質(zhì)量控制要求。