林家達(dá)，溫必盛，陳綿富，蘇慶輝，劉 陽(yáng)

潰瘍性結(jié)腸炎（Ulcerative colitis，UC）是一種直腸慢性非特異性炎癥性疾病，重度患者多見(jiàn)每日多次血性腹瀉，伴發(fā)熱、嚴(yán)重腹痛等癥狀，腸道菌群發(fā)生明顯紊亂，最終可引起腸源性感染，嚴(yán)重威脅患者的生命健康［1］。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)UC患者黏膜相關(guān)菌群研究報(bào)道相對(duì)較少［2］。本研究觀察腸黏膜相關(guān)菌群與老年UC患者疾病活動(dòng)程度的相關(guān)性，旨在為臨床疾病的診治及防控提供參考依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1對(duì)象 選擇2016年10月～2019年10月定安縣人民醫(yī)院消化科收治的UC患者90例，設(shè)為觀察組，另選擇同期進(jìn)行體檢的90名健康對(duì)照者為對(duì)照組。觀察組中男50例，女40例；年齡50～85歲，平均（62.25±3.26）歲；體質(zhì)量指數(shù)（BMI）14.26～28.41 kg/m2，平均（18.23±4.32）kg/m2；輕度活動(dòng)45例，中度活動(dòng)32例，重度活動(dòng)13例。對(duì)照組中男47名，女43名；年齡50～85歲，平均（63.32±3.35）歲；BMI 14.25～28.36 kg/m2，平均（18.25±4.26）kg/m2，兩組基礎(chǔ)資料信息比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本次研究開(kāi)展之初上報(bào)本院倫理委員會(huì)，經(jīng)準(zhǔn)許后實(shí)施。

納入標(biāo)準(zhǔn)（1）患者均符合UC的診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］；（2）對(duì)照組身體各指標(biāo)均無(wú)異常；（3）研究對(duì)象均對(duì)本研究知情同意，并簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)（1）因腸道致病菌、真菌及結(jié)核分枝桿菌以及病毒等病原體引起的腸道感染者；（2）免疫類疾病及感染性疾病者；（3）血液疾病或惡性腫瘤者；（4）心、肝、腎等臟器功能嚴(yán)重障礙者；（5）妊娠及哺乳期患者。

1.2方法 所有受試者均由同一名經(jīng)驗(yàn)豐富的內(nèi)鏡醫(yī)師對(duì)UC患者及健康對(duì)照者進(jìn)行結(jié)腸鏡檢查，在結(jié)腸觀察結(jié)束后退鏡時(shí)使用一次性活檢鉗在乙狀結(jié)腸鉗取3塊新鮮組織，觀察組從乙狀結(jié)腸的病變部位鉗取組織標(biāo)本，對(duì)照組從乙狀結(jié)腸的正常腸黏膜鉗取組織標(biāo)本。以0.1%的焦碳酸二乙酯（DEPC）水洗2次，0.2 mol/L鹽酸、10 mg/l溶菌酶分別消化15～20 min，隨后以0.1%的DEPC水浸泡10 min，滴加封閉液后于55℃封閉2 h。結(jié)束后，將稀釋好的0.4 mol/L的細(xì)菌探針于37℃平衡后滴加于組織上，加蓋玻片以橡膠膠水封固，后于38℃避光存放16～18 h。后使用檸檬酸鈉緩沖液洗4次，每次15 min，于暗處?kù)o置15 min后用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察并攝片。在熒光顯微鏡下計(jì)數(shù)細(xì)菌總數(shù)，每塊組織沿上皮層隨機(jī)計(jì)數(shù)3個(gè)高倍鏡視野（高倍鏡視野的長(zhǎng)度為200μm），取其中位數(shù)進(jìn)行比較，并記為細(xì)菌數(shù)/200μm。探針選自廣州外顯子生物技術(shù)有限公司，以EREC482探針檢測(cè)梭菌屬、Bac303探針檢測(cè)擬桿菌屬、E.coli1531探針檢測(cè)腸桿菌屬、TaqMan探針檢測(cè)腸球菌屬、Lab158探針檢測(cè)乳酸桿菌屬、Bif164探針檢測(cè)雙歧桿菌屬。

1.3觀察指標(biāo) （1）對(duì)比兩組腸黏膜菌群數(shù)量，包括梭菌屬、擬桿菌屬、腸桿菌屬、腸球菌屬、乳酸桿菌屬、雙歧桿菌屬。（2）對(duì)比不同活動(dòng)程度老年UC患者腸黏膜菌群數(shù)量，活動(dòng)程度根據(jù)潰瘍性活動(dòng)Mayo評(píng)分判定［4］。評(píng)估項(xiàng)目包括：排便次數(shù)、便血情況、內(nèi)鏡情況、醫(yī)師評(píng)價(jià)，各項(xiàng)根據(jù)嚴(yán)重程度分為0～3分，總分3～5分為輕度活動(dòng)（45例）、6～10分為中度活動(dòng)（32例）、11～12分為重度活動(dòng)（13例）。（3）分析老年UC患者疾病活動(dòng)情況與腸黏膜相關(guān)菌群數(shù)量的相關(guān)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 19.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以（±s）表示，組間比較行t檢驗(yàn)，多組間行單因素方差分析，偏態(tài)分布的計(jì)量資料以中位數(shù)（范圍）表示，組間差異比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)，多組間比較采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性采用Pearman秩相關(guān)分析檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1對(duì)比兩組腸黏膜菌群數(shù)量 觀察組腸黏膜內(nèi)梭菌屬、擬桿菌屬、乳酸桿菌屬、雙歧桿菌屬菌群數(shù)量顯著低于對(duì)照組，腸桿菌屬、腸球菌屬菌群數(shù)量顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組受檢者腸黏膜菌群數(shù)量［細(xì)菌數(shù)/200μm，中位數(shù)（范圍）］

2.2對(duì)比不同活動(dòng)程度老年UC患者腸黏膜菌群數(shù)量 重度活動(dòng)程度老年UC患者腸黏膜內(nèi)梭菌屬、擬桿菌屬、乳酸桿菌屬、雙歧桿菌屬菌群數(shù)量顯著低于中度、輕度活動(dòng)患者，腸桿菌屬、腸球菌屬菌群數(shù)量顯著高于中度、輕度活動(dòng)患者，中度活動(dòng)程度老年UC患者腸黏膜內(nèi)梭菌屬、擬桿菌屬、乳酸桿菌屬、雙歧桿菌屬菌群數(shù)量顯著低于輕度活動(dòng)患者，腸桿菌屬、腸球菌屬菌群數(shù)量顯著高于輕度活動(dòng)患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2對(duì)比不同活動(dòng)程度老年UC患者腸黏膜菌群數(shù)量［細(xì)菌數(shù)/200μm，中位數(shù)（范圍）］

2.3老年UC患者疾病活動(dòng)情況與腸黏膜相關(guān)菌群的相關(guān)性分析 老年UC患者疾病活動(dòng)情況與梭菌屬、擬桿菌屬、乳酸桿菌屬、雙歧桿菌屬菌群數(shù)量呈負(fù)相關(guān)，與腸桿菌屬、腸球菌屬菌群數(shù)量呈正相關(guān)（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 90例老年UC患者疾病活動(dòng)情況與腸黏膜相關(guān)菌群的相關(guān)性分析

3 討論

UC是一種慢性非特異性炎癥類疾病，患者通常會(huì)出現(xiàn)腹痛、腹瀉、黏液膿血便等腸道癥狀，病灶區(qū)主要分布在大腸黏膜和黏膜下層，具有連續(xù)性及彌漫性的特質(zhì)，可反復(fù)發(fā)作，對(duì)患者日常工作及生活具有較大影響［5］。

本研究中觀察組腸黏膜內(nèi)梭菌屬、擬桿菌屬、乳酸桿菌屬、雙歧桿菌屬菌群數(shù)量顯著低于對(duì)照組，腸桿菌屬、腸球菌屬菌群數(shù)量顯著高于對(duì)照組，UC患者由于長(zhǎng)期腹瀉、腸道炎癥的存在，腸道菌群發(fā)生明顯紊亂，腸球菌、腸桿菌等機(jī)會(huì)性致病菌大量增殖并移位，而乳酸桿菌、雙歧桿菌等典型的優(yōu)勢(shì)菌群則減少，這種菌群變化是UC患者發(fā)病的重要原因［6］。

在本研究中，重度活動(dòng)程度老年UC患者腸黏膜內(nèi)梭菌屬、擬桿菌屬、乳酸桿菌屬、雙歧桿菌屬菌群數(shù)量顯著低于輕度活動(dòng)患者，腸桿菌屬、腸球菌屬菌群數(shù)量顯著高于輕度活動(dòng)患者，其原因在于每個(gè)菌群屬下面有多個(gè)分類，菌群屬數(shù)量在相對(duì)平衡狀態(tài)下可維持患者腸道定植抗力，而腸道定植抗力可有效抑制腸道內(nèi)潛在致病菌群數(shù)量［7-8］。因此UC患者病情越重代表其腸道內(nèi)上皮細(xì)胞損傷越嚴(yán)重，當(dāng)腸道黏膜被破壞即會(huì)加重腸道菌群紊亂的情況［9］。在本研究中老年UC患者疾病活動(dòng)情況與梭菌屬、擬桿菌屬、乳酸桿菌屬、雙歧桿菌屬菌群數(shù)量呈負(fù)相關(guān)，與腸桿菌屬、腸球菌屬菌群數(shù)量呈正相關(guān)。因此可檢測(cè)UC患者腸道菌群變化情況能夠?yàn)榧膊』顒?dòng)程度的判斷提供幫助。

綜上所述，UC患者腸道菌群變化情況與UC患者疾病活動(dòng)程度有密切聯(lián)系，需引起臨床重視。