洪體玉，韋 瑩，蘇 華，陳 浩，盤(pán)寶進(jìn)，陳立軍

（南寧海關(guān)技術(shù)中心 530021）

近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物要求越來(lái)越多，科研對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量要求也越來(lái)越高。規(guī)模化養(yǎng)殖，是解決實(shí)驗(yàn)動(dòng)物短缺的有效途徑。但是規(guī)?；B(yǎng)殖密度高，動(dòng)物個(gè)體之間接觸密切，容易導(dǎo)致某些致病性微生物在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物個(gè)體之間傳播，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的健康質(zhì)量產(chǎn)生了很大影響。

沙門(mén)氏菌是一群寄生于人和動(dòng)物腸道內(nèi)的革蘭氏陰性桿菌，廣泛存在自然界中，是一種常見(jiàn)的食源性疾病的病原菌[1]。大部分的沙門(mén)氏菌對(duì)人和動(dòng)物有致病性。在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物規(guī)?；B(yǎng)殖過(guò)程中，沙門(mén)氏菌不僅能引起試驗(yàn)動(dòng)物的感染，還能在環(huán)境中傳播病原體，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的質(zhì)量產(chǎn)生很大的負(fù)面影響。因此，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物規(guī)?；B(yǎng)殖，對(duì)環(huán)境提出了較高的要求。養(yǎng)殖場(chǎng)所日常消毒管理，是保障實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康的重要環(huán)節(jié)。為了解不同消毒劑對(duì)沙門(mén)氏菌的殺滅效果，做好養(yǎng)殖場(chǎng)所有效的消毒工作，本次研究以沙門(mén)氏菌為對(duì)象，觀察復(fù)合酚對(duì)其殺滅效果。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌種：沙門(mén)氏菌，從實(shí)驗(yàn)動(dòng)物糞便檢測(cè)分離所得。

1.1.2 消毒劑：復(fù)合酚。

1.1.3 試劑：胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSA）、胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSB）、吐溫-80、卵磷脂、磷酸鹽緩沖液（PBS）。

1.1.4 儀器：生物安全柜（HR1200-ⅡA2-E）、高壓蒸汽滅菌器（GR60DP）、恒溫培養(yǎng)箱(MIR-254)、低溫恒溫槽（DC-0506）、博世冰箱（BCD-25）、超低溫冰箱（DW-HL398S）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 菌懸液的制備：將活化的沙門(mén)氏菌接種到TSB培養(yǎng)基上，按照《消毒技術(shù)規(guī)范》（衛(wèi)生部2002版）2.1.1有關(guān)規(guī)定制備菌懸液，采用10倍稀釋法，將滅菌PBS稀釋菌懸液，使其濃度在1×107～1×108cfu/mL。

1.2.2 中和劑鑒定試驗(yàn)：根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，采用30g/L卵磷脂+3%的吐溫80作為中和劑[2]。選擇適宜濃度的復(fù)合酚溶液，用沙門(mén)氏菌為受試菌進(jìn)行中和試驗(yàn)。中和試驗(yàn)分為6組，第1組：消毒劑 + 菌懸液，驗(yàn)證消毒劑對(duì)試驗(yàn)菌殺滅效果。第2組：消毒劑+菌懸液+中和劑 ，觀察殘留消毒劑被中和后受到清毒劑作用后的目標(biāo)菌是否能恢復(fù)生長(zhǎng)。第3組：中和劑+菌懸液，觀察中和劑是否抑菌。第4組：（消毒劑+中和劑）+菌液，觀察中和產(chǎn)物，或未被完全中和的殘留消毒劑對(duì)試驗(yàn)菌的生長(zhǎng)繁殖是否有影響。第5組：稀釋液+菌懸液，作為菌數(shù)對(duì)照。第6組：稀釋液+中和劑+培養(yǎng)基，作為陰性對(duì)照。用TSA傾注法培養(yǎng)。

1.2.3 定量殺滅試驗(yàn)

不同濃度消毒劑對(duì)沙門(mén)氏菌殺滅效果的影響。用PBS將消毒劑按照使用說(shuō)明配制成不同濃度：1∶300、1∶300、1∶500、1∶800。取無(wú)菌試管加入0.5mL菌懸液，不同濃度消毒液4.5mL，混勻作用至預(yù)定時(shí)間，分別吸取0.5mL菌懸液加入4.5mL中和劑中，混勻后作用10min后分別吸取1mL樣液接種平皿，37℃培養(yǎng)48h，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，計(jì)算不同條件的殺菌率。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 中和劑的篩選

表中結(jié)果為3次試驗(yàn)平均值，25℃，作用5min；第3、4、5組間誤差率為6.0%。

從表1試驗(yàn)結(jié)果可知，試驗(yàn)所選擇的中和劑符合試驗(yàn)要求。

表1 中和劑鑒定試驗(yàn)結(jié)果

2.2 懸液定量殺滅試驗(yàn)結(jié)果

稀釋倍數(shù) 溫度/℃ 作用時(shí)間/min 平均殺滅率/%98.35 10 99.50 25 5 100 10 100 5 100 4 5 1∶500 1∶800

從表2的結(jié)果可知，復(fù)合酚稀釋度在≥1∶300時(shí)，在4℃、25℃和37℃條件下分別作用5min和10min，其對(duì)沙門(mén)氏菌的殺滅率均為100%。在稀釋度為1∶500時(shí)，在4℃條件下，分別作用5min和10min，復(fù)合酚溶液對(duì)沙門(mén)氏菌均不能完全殺滅。

表2 不同條件下對(duì)沙門(mén)氏菌的殺滅率

3 討論

復(fù)合酚是一種以酚、醋酸和十二烷基苯磺酸為主要成分的消毒劑，其殺菌原理是苯酚為原漿毒，使細(xì)菌蛋白質(zhì)凝固變性而呈現(xiàn)殺菌作用[3]。復(fù)合酚能殺滅多種細(xì)菌和病毒，主要用于養(yǎng)殖場(chǎng)的環(huán)境消毒，如籠舍、墻壁、地面和排泄物等。復(fù)合酚稀釋度在大于1∶300時(shí)，其在4℃、25℃和37℃條件下分別作用5min和10min，對(duì)沙門(mén)氏菌的殺滅率達(dá)到100%。建議疫病期消毒、常規(guī)消毒和消毒池消毒分別按1∶200、1∶300和1∶300稀釋度進(jìn)行配制。