菌落總數(shù)測定不確定度分析

聶慶麗 樊云霄

隨著經(jīng)濟(jì)的高速發(fā)展和GDP的不斷增長以及人們生活水平的不斷提高，人們對于飲食的安全性要求也在不斷提高。食品中微生物的檢測已經(jīng)得到了有關(guān)部門的高度重視，特別是食品中菌落總數(shù)的測定已經(jīng)被國家列為食品檢測的強(qiáng)制檢測項(xiàng)目。因此，菌落總數(shù)測定不確定度分析是很有必要的。為了減少實(shí)驗(yàn)誤差，提高檢測結(jié)果準(zhǔn)確性，檢測實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具有并應(yīng)用評定測量不確定度的程序。微生物檢驗(yàn)的性質(zhì)決定其無法運(yùn)用計(jì)量學(xué)和統(tǒng)計(jì)學(xué)正確評估測量的不確定度，但我們旨在找出影響不確定度的各個(gè)分量，并評估出它們對結(jié)果的影響程度，從而作出合適的質(zhì)量控制。微生物不確定度的評定主要針對定量測試。

測量的目的是為了得到測量結(jié)果是否準(zhǔn)確或者有效。如果報(bào)告中只表述測量結(jié)果而未給出其可信程度或者可信的范圍，則測量結(jié)果是不準(zhǔn)確的。判斷測量結(jié)果是否準(zhǔn)確需要多次測量結(jié)果的重復(fù)性，也就是測量的質(zhì)量和準(zhǔn)確度，這就需要使用不確定度來表示。文章主要介紹了測量不確定度的方法程序，分析了不確定度來源等。

一、測量方法程序

實(shí)驗(yàn)室依照ISO《測量不確定度表示指南》2005版分析評估本實(shí)驗(yàn)室菌落總數(shù)測試的測量不確定度的評定方法與結(jié)果。程序如下：（1）培養(yǎng)基及稀釋液配制;（2）樣品稀釋;（3）樣品培養(yǎng);（4）菌落計(jì)數(shù)。

二、建立數(shù)學(xué)模型

根據(jù)測量原理及計(jì)算公式，建立測定不確定度評定所需數(shù)學(xué)模型：

三、不確定度分析來源

菌落總數(shù)測定主要是稱/吸取25g（mL）樣品置于盛有225mL磷酸鹽緩沖液的無菌袋中，均質(zhì)，制成1∶10的樣品勻液。用1mL無菌吸管吸取1∶10樣品勻液1mL，沿管壁緩慢注于盛有9mL稀釋液的無菌試管內(nèi)，混勻，制成1∶100的樣品勻液。以此類推梯度稀釋。選擇2-3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液，吸取1mL樣品勻液于無菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平行。同時(shí)，分別吸取1mL空白稀釋液加入兩個(gè)無菌平皿內(nèi)作空白對照。及時(shí)將15-20mL冷卻到50℃的平板計(jì)數(shù)瓊脂傾注平皿，并混合均勻。待瓊脂凝固后將平板翻轉(zhuǎn)，（36±1）℃培養(yǎng)48h左右。整個(gè)過程未使用任何設(shè)備進(jìn)行量測，所以誤差來源均為人為操作的隨機(jī)誤差。

四、實(shí)驗(yàn)中不確定度分析

檢測過程中重復(fù)性測量引起的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度Ui屬于A類不確定度，菌落總數(shù)測定結(jié)果見表1。

根據(jù)上述公式計(jì)算得標(biāo)準(zhǔn)偏差： S=0.0905，則其相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度為Ui=0.064。

五、合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度

合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度相關(guān)內(nèi)容見表2。

六、擴(kuò)展不確定度

由t分配之概率表，可查得在95%置信水平上，自由度為14時(shí)t值等于2.145，因此在95%置信水平時(shí)，若以對數(shù)log的方式表示此測試方法之不確定度時(shí)，樣品編號(hào)1值如下：

logX=（logX1+logX2）/2±（0.064×2.145）

=（logX1+logX2）/2±0.13728

=2.6946±0.13728

即分布在2.55732-2.83188之間取反對數(shù)antilog之值，其結(jié)果分布于361-679之間。擴(kuò)展不確定度結(jié)果見表3。

七、結(jié)語

目前測量不確定度的評定方法在我國已得到了廣泛應(yīng)用，測量不確定度的評定和表示方法是計(jì)量科學(xué)領(lǐng)域發(fā)展的一個(gè)新進(jìn)展，人們在測量不確定度的宣傳和貫徹上也做出了很多努力，在今后的測量不確定度應(yīng)用中應(yīng)不斷總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)存在的問題，不斷完善測量不確定度的評定方法。

作者簡介：聶慶麗（1979-），女，漢族，河南平頂山人，大學(xué)本科，研究方向?yàn)槲⑸飳W(xué)。