王佳

摘要：本次課題主要針對自制品牌和國際品牌的4-甲基苯傘形酮葡糖酸苷。在檢測食品中大腸桿菌活菌素的應(yīng)用效果進(jìn)行探討，最終的研究結(jié)果表明，使用自制品牌4-甲基苯傘形酮葡糖酸苷的進(jìn)行檢測工作與國際品牌的4-甲基苯傘形酮葡糖酸苷檢測工作最后獲得的大腸桿菌活菌數(shù)，所得的結(jié)果具有較大的相似性。所以我們可以認(rèn)為自制的4-甲基苯傘形酮葡糖酸苷產(chǎn)品，可以完全替代國際品牌的4-甲基苯傘形酮葡糖酸苷應(yīng)用于食品檢測的大腸桿菌活菌素檢測工作中。

關(guān)鍵詞：大腸桿菌;快速檢測原料;4-甲基苯傘形酮葡糖酸苷;應(yīng)用效果

1.材料

1.1試驗材料

本次課題在進(jìn)行研究的過程當(dāng)中，試驗期間使用的所有材料都是來自當(dāng)?shù)氐氖称烦?，使用隨機(jī)選取的方式對所有未打開包裝的產(chǎn)品進(jìn)行購買，并對樣品進(jìn)行提前準(zhǔn)備。所有的產(chǎn)品類型11種，每種類型的材料購買30份。

1.2主要試劑及儀器

在試用的過程當(dāng)中，我們需要的所有試劑以及儀器，包括水相濾膜，胰蛋白酶，366nm紫外燈，真空泵以及分析純等等。

1.3試驗方法

在進(jìn)行樣品檢測操作之前，我們需要對所有的樣品進(jìn)行提前處理工作，如果樣品屬于固體，那么我們就需要使用無菌操作的方式對樣品進(jìn)行爭取，稱取量為25克，將其放置到255毫升的滅菌生理鹽水容器當(dāng)中，搖合混勻。液體的樣品在提前處理時需要于23℃到37℃的環(huán)境下，經(jīng)過蛋白酶處理工作。只有牛奶樣品需要進(jìn)行蛋白酶處理，其他樣品不需要進(jìn)行處理。接著再使用無菌吸管吸取25毫升的樣品，放置到225毫升的滅菌生理鹽水當(dāng)中。在完成以上操作之后，需要以30厘米幅度，7秒內(nèi)，振搖25次的方式進(jìn)行稀釋備用。接著我們需要將滅菌過濾的裝置連接到真空抽濾瓶上，使用無菌操作的方式把無菌濾膜放置到抽濾的底座當(dāng)中，進(jìn)行固定操作，而在完成以上操作之后，仍然需要使用無菌操作的方式，將10毫升到20毫升的無菌蒸餾水加入到過濾器當(dāng)中，打開真空泵之后進(jìn)行抽取和過濾的操作。最后，將過濾之后的樣品濾膜放置在瓊脂平板表面，而且濾膜和瓊脂表面之間不能存在氣泡，接著開展培養(yǎng)工作，培養(yǎng)時間為兩個小時，最后使用菌落計算的方式，對藍(lán)白色熒光的菌落進(jìn)行計算，再乘以稀釋倍數(shù)，計算樣品當(dāng)中大腸桿菌的具體數(shù)量。

1.4產(chǎn)品合格評價方法

以產(chǎn)品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)與檢測結(jié)果對產(chǎn)品是否合格，進(jìn)行綜合性評價。不同類型的產(chǎn)品，飲用天然礦泉水，膨化食品，方便面，飲料，以及巴氏殺菌乳等產(chǎn)品的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，在內(nèi)容方面存在比較明顯的差異。

2.結(jié)果與分析

通過對收集的數(shù)據(jù)進(jìn)行綜合性分析，可以了解到自制4-甲基苯傘形酮葡糖酸苷和進(jìn)口品牌4-甲基苯傘形酮葡糖酸苷用于食品的大腸桿菌數(shù)量檢測工作，其最終的結(jié)果表現(xiàn)為下。而從該表當(dāng)中我們也可以了解到，不同類型的4-甲基苯傘形酮葡糖酸苷應(yīng)用在食品檢測工作當(dāng)中，其最終所得的大腸桿菌數(shù)幾乎一致。

3.結(jié)論與討論

在進(jìn)行樣品試驗的過程當(dāng)中，我們選擇的方法具有多樣性的特點，但是可以按照其具體方案的內(nèi)容分成傳統(tǒng)檢測法以及新型檢測法。傳統(tǒng)檢測法有4種不同的類型，分別是多管發(fā)酵法，平板計數(shù)法，測試片法以及濾膜法。新型檢測方法主要有ATP生物發(fā)光技術(shù)，免疫磁珠法以及免疫學(xué)檢測，基因芯片法，自動化儀器法，生物傳感器檢測法。所有的樣品在檢測之前都必須要先開展樣品前處理，操作固體樣品和液體樣品需要采用不同的處理方法。

在使用多管發(fā)酵法進(jìn)行4-甲基苯傘形酮葡糖酸苷的大腸桿菌數(shù)量檢測工作，需要先將樣品放置在44.5℃的飛行器當(dāng)中，進(jìn)行24小時的培養(yǎng)工作。在培養(yǎng)結(jié)束之后，使用紫外光源對培養(yǎng)基進(jìn)行照射，如果發(fā)現(xiàn)檢測樣品當(dāng)中有熒光出現(xiàn)，那么就可以認(rèn)為該樣品當(dāng)中有大腸桿菌，可以通過具體分析熒光量對大腸桿菌的含量進(jìn)行檢測。這種檢測的方法需要對樣品進(jìn)行發(fā)酵處理，讓其在發(fā)酵管當(dāng)中發(fā)酵之后，再針對待測菌進(jìn)行分離及純化工作，接著對分離之后的樣品進(jìn)行二次發(fā)酵。最后工作人員還需要使用格蘭仕染色以及顯微鏡觀察的方式，對熒光的數(shù)量進(jìn)行分析，從而明確大腸桿菌的具體含量。多管發(fā)酵法的操作過程比較簡單，而且成本低，在檢測的過程當(dāng)中卻很容易受到其他因素的影響，對最終的檢測準(zhǔn)確性產(chǎn)生消極的影響。

使用平板計數(shù)法對4-甲基苯傘形酮葡糖酸苷檢測，需要先對樣品進(jìn)行稀釋工作，將樣品當(dāng)中含有的微生物通過稀釋的方式分散成單個細(xì)胞，接著再對這些已經(jīng)稀釋的稀釋液進(jìn)行培養(yǎng)工作。經(jīng)過一段時間的培養(yǎng)之后，這些細(xì)菌就會逐漸長成肉眼科觀察的菌落，那么我們就可以通過收集稀釋度以及樣本數(shù)量的方式，對大腸桿菌的數(shù)量進(jìn)行計算。

使用測試片法，對4-甲基苯傘形酮葡糖酸苷進(jìn)行測試工作，可以最大程度的縮短培養(yǎng)基的培養(yǎng)時間，他在接種后，測試片人員需要進(jìn)行培養(yǎng)，時間可以控制在24小時到48小時之內(nèi)，所以他也不能滿足快速檢測的實際需求。

使用濾膜法進(jìn)行大腸桿菌的測試工作，這種方法是常見的微生物檢測方法，在進(jìn)行檢測的過程當(dāng)中，檢測人員需要先將待測的樣本放在0.65納米的濾膜上進(jìn)行過濾，而樣本當(dāng)中的細(xì)菌就會留在濾膜上，將濾膜放在培養(yǎng)基進(jìn)行24小時的培養(yǎng)工作，那么大腸桿菌群就會導(dǎo)致濾膜呈現(xiàn)出紫紅色，此時檢測人員就可以通過計算內(nèi)膜上的菌落，推斷出樣本當(dāng)中具體大腸桿菌的含量。

在多種類型的新型檢測方法當(dāng)中ATP生物發(fā)光技術(shù)的檢測使用概率相對較高。 Att是活細(xì)胞當(dāng)中最常見的能量，而它的代謝物主要是為細(xì)胞提供正?；顒有枰母鞣N能量，所以它在生物體當(dāng)中的含量具有穩(wěn)定性的特點，那么活細(xì)胞在熒光素酶的催化下，也會產(chǎn)生較為明顯的熒光反應(yīng)。所以我們可以將熒光素買放入到樣品當(dāng)中，如果樣品當(dāng)中的微生物ATP含量越多，那么發(fā)出的熒光也就越多，此時檢測人員就可以通過熒光量對活細(xì)胞代謝水平進(jìn)行了解，從而獲取到大腸桿菌的具體數(shù)量。

使用免疫磁珠法進(jìn)行大腸桿菌的測試工作需要以磁珠作為抗體的載體，在磁珠和大腸桿菌結(jié)合之后就會通過磁力實現(xiàn)大腸桿菌的分離操作。它可以整體提高大腸桿菌的檢測效率，并且快速完成樣品的微生物檢測工作，這種方法在一天當(dāng)中就可以獲得94%的捕捉效率，而且不會出現(xiàn)交叉反應(yīng)的情況。

使用免疫學(xué)檢測法進(jìn)行大腸桿菌的檢測工作，可以在40分鐘之內(nèi)完成檢測的結(jié)果，它的檢測靈敏度非常高。與此同時，不會對其他類型的腸桿菌科細(xì)菌產(chǎn)生影響作用或者出現(xiàn)交叉反應(yīng)。免疫學(xué)檢測法的原理是將抗原的抗體的特異性反應(yīng)作為原理對食品當(dāng)中的大腸桿菌進(jìn)行特定的抗體檢測工作，它的操作方法簡單，而且檢測速度非?？臁?/p>

基因芯片法可以對極低濃度狀態(tài)下的大腸桿菌進(jìn)行檢測工作，它的檢測靈敏度非常高，但是它需要制作帶有標(biāo)記的基因芯片，所以是其成本相對較高，與此同時對于檢測人員也具有較高的要求。

自動免疫測定分析儀的使用方法非常簡單，而且它的靈敏度和準(zhǔn)確度也非常高，使用自動化儀器對大腸桿菌進(jìn)行檢測工作，目前僅局限于實驗室使用，因為它的配套試劑價格非常的昂貴。

使用生物傳感器檢測法，對大腸桿菌進(jìn)行檢測工作具有成本低，穩(wěn)定性高，靈敏度高以及選擇性多的特點，與此同時，它還是一種可以對復(fù)雜成分進(jìn)行快速在線檢測的技術(shù)。在實際操作的過程當(dāng)中，我們需要將DNA雜交抗原抗體反應(yīng)信號轉(zhuǎn)化為光信號和電信號，并且通過儀器對信號進(jìn)行分析之后，得出最終的檢測結(jié)果。

此次課題的研究結(jié)果顯示：兩種類型的4-甲基苯傘形酮葡糖酸苷在食品檢測工作當(dāng)中獲得的結(jié)果是一致的，所以我們可以認(rèn)為自制的4-甲基苯傘形酮葡糖酸苷可以代替國外品牌的4-甲基苯傘形酮葡糖酸苷進(jìn)行產(chǎn)品的檢測工作。

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