姚利蘭綜述，陳鵬宇審校

0 引 言

單基因病又稱單基因遺傳病或單基因缺陷，通常指因點(diǎn)突變、片段缺失/重復(fù)、移碼突變、融合基因、動(dòng)態(tài)突變等單個(gè)基因變異而導(dǎo)致的疾病。人類單基因疾病種類繁多，超過(guò)10000種，并且每年以約10～50種的速度不斷增加[1]。同時(shí)，人群中約3%～5%的人患某種單基因病，面臨妊娠、診斷、治療等多重難題，給患兒本身、孕婦及其家庭帶來(lái)沉重的身心壓力及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。近年來(lái)，單基因遺傳病植入前遺傳學(xué)檢測(cè)(preimplantation genetic testing for monogenic/ single gene defects，PGT-M)技術(shù)的蓬勃發(fā)展[2]，可有效阻斷單基因病的垂直傳遞，通過(guò)加強(qiáng)遺傳咨詢和生殖管理，為人類輔助生殖及提高人口質(zhì)量提供了新的選擇和希望，日益成為單基因遺傳病預(yù)防控制的重要手段。PGT-M的檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展促使植入前胚胎中可檢測(cè)到的遺傳缺陷數(shù)量及精度不斷提高。同時(shí)，隨著單基因病罹患率增加、人口結(jié)構(gòu)和生育意識(shí)的變化，單基因病診治需求呈現(xiàn)出快速增長(zhǎng)的趨勢(shì)。隨之，引發(fā)了一系列PGT-M技術(shù)臨床應(yīng)用相關(guān)倫理問(wèn)題的熱議。因此，有必要對(duì)PGT-M的檢測(cè)技術(shù)發(fā)展歷程、應(yīng)用范圍和現(xiàn)狀以及相關(guān)倫理問(wèn)題等作一綜述，以期為臨床應(yīng)用提供參考。

1 PGT-M的新定義

PGT-M于2017年國(guó)際輔助生殖技術(shù)監(jiān)督委員會(huì)(ICMART)和世界衛(wèi)生組織(WHO)最新命名規(guī)范提出。該命名規(guī)范以植入前遺傳學(xué)檢測(cè)(preimplantation genetic testing , PGT)取代并涵蓋了原來(lái)的植入前遺傳學(xué)診斷(preimplantation genetic diagnosis, PGD)和植入前遺傳學(xué)篩查(preimplantation genetic screening, PGS)，指對(duì)卵母細(xì)胞(極體)或胚胎(卵裂期或囊胚期)DNA的HLA基因分型和遺傳異常進(jìn)行的檢測(cè)分析[3]，也就是所謂的“第三代試管嬰兒”。同時(shí)，進(jìn)一步將PGT細(xì)分為HLA分型的植入前遺傳學(xué)檢測(cè)(PGT-HLA)、非整倍體植入前遺傳學(xué)檢測(cè)(PGT for aneuploidies, PGT-A)、結(jié)構(gòu)變異植入前遺傳學(xué)檢測(cè)(PGT for chromosomal structural rearrangements, PGT-SR)以及PGT-M[2-4]。其中，PGT-M被明確定義為針對(duì)單基因遺傳病或單基因缺陷在體外受精胚胎植入之前對(duì)胚胎進(jìn)行遺傳學(xué)檢測(cè)的方法[5]。其意義在于PGT-M可作為單基因遺傳病的一級(jí)預(yù)防措施，識(shí)別、排除攜帶單基因異常的致病突變胚胎，選擇正常胚胎進(jìn)行移植，進(jìn)而阻斷單基因遺傳病的垂直傳遞，避免相關(guān)缺陷兒的降生。

2 PGT-M技術(shù)的發(fā)展歷程

1990年，Handyside等[6]首次報(bào)道了基于聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction, PCR)手段進(jìn)行Y染色體特異性重復(fù)區(qū)段標(biāo)記檢測(cè)以避免伴X-性連鎖隱性遺傳病的男胎出生，開(kāi)創(chuàng)了PGT-M在人類輔助生殖領(lǐng)域中應(yīng)用的先河。PGT-M經(jīng)歷了極體-卵裂球-囊胚期滋養(yǎng)外胚層細(xì)胞三個(gè)階段[7-10]，從一代試管嬰兒技術(shù)到第三代試管嬰兒技術(shù)跨越了30年。為盡可能的避免胚胎損傷和影響胚胎后期發(fā)育，并建立較為準(zhǔn)確的檢測(cè)體系，一直以來(lái)PGT-M只能是針對(duì)單細(xì)胞水平進(jìn)行的檢測(cè)，我們面臨的最大的挑戰(zhàn)從早期采用技術(shù)中面臨的DNA量不足的難題轉(zhuǎn)向現(xiàn)在采用全基因組擴(kuò)增技術(shù)(whole gene amplification, WGA)后的等位基因脫扣(allele dropout, ADO)等問(wèn)題。一系列技術(shù)的發(fā)展與成熟使得PGT-M的診斷能力逐漸提高，解決ADO問(wèn)題的能力成為了評(píng)估診斷準(zhǔn)確性的關(guān)鍵。發(fā)展至今，PGT-M的檢測(cè)方式主要分為直接檢測(cè)和間接檢測(cè)。直接檢測(cè)法指利用一系列的技術(shù)對(duì)變異位點(diǎn)進(jìn)行直接檢測(cè)，主要包括PCR[11]、WGA技術(shù)[12]以及基于WGA進(jìn)行的熒光原位雜交技術(shù)(fluorescence in situ hybridization, FISH)、比較基因組雜交或微陣列比較基因組雜交技術(shù)(comparative genomic hybridization, CGH and array comparative genomic hybridization, CGH-array)[13]、單核苷酸多態(tài)性微陣列(single nucleotide polymorphism array, SNP array)[14]、高通量測(cè)序技術(shù)(high-throughput sequencing, HTS)等；而間接檢測(cè)方法中最常見(jiàn)的就是單倍型連鎖分析法[15]。目前包括單細(xì)胞全基因組測(cè)序技術(shù)在內(nèi)的直接檢測(cè)方法尚不能有效解決ADO的問(wèn)題，而單倍型連鎖分析作為一種可規(guī)避該問(wèn)題的間接檢測(cè)和分析方法被廣泛應(yīng)用于臨床。

2.1PCRPCR技術(shù)是最早用于PGT-M的檢測(cè)技術(shù)，通過(guò)定制引物，可針對(duì)DNA序列的特定變異進(jìn)行檢測(cè)[16]。但PCR受限于技術(shù)本身及單細(xì)胞樣本，操作過(guò)程中極易發(fā)生DNA的丟失或污染，導(dǎo)致擴(kuò)增失敗或擴(kuò)增效率較低。此外，自發(fā)的細(xì)胞裂解和無(wú)核片段或退化細(xì)胞的活檢也是導(dǎo)致擴(kuò)增效率降低的其他原因。因此，在早期對(duì)胚胎單細(xì)胞水平的檢測(cè)局限在于無(wú)法獲取足夠量的DNA模板[17]。

2.2WGA因?yàn)镻GT能用的胚胎細(xì)胞較少，WGA的出現(xiàn)成功解決了單細(xì)胞水平檢測(cè)中DNA不足的難題[20]。近10年來(lái)，WGA技術(shù)取得了巨大的進(jìn)步，主要包含3類技術(shù)。第一類是基于PCR發(fā)展而來(lái)的引物延伸預(yù)擴(kuò)增法(primer extension preamplification, PEP)[18]和簡(jiǎn)并寡核苷酸引物聚合酶鏈反應(yīng)(degenerate oligonucleotide primed PCR, DOP-PCR)[19]技術(shù)，二者是較早應(yīng)用單細(xì)胞的擴(kuò)增技術(shù)，均只能對(duì)特異位點(diǎn)擴(kuò)增，且存在嚴(yán)重的擴(kuò)增偏倚問(wèn)題，擴(kuò)增前后偏倚倍數(shù)分別為220倍和61倍左右，因極高的錯(cuò)誤率使其在臨床實(shí)際應(yīng)用中被其他發(fā)展起來(lái)的技術(shù)取代。2001年，Lasken等[20]提出基于Φ29聚合酶和等溫隨機(jī)引物擴(kuò)增的多重置換擴(kuò)增技術(shù)，成為單細(xì)胞擴(kuò)增的又一類新技術(shù)，與PEP和DOP-PCR比較，可將DNA模板擴(kuò)增約106倍，擴(kuò)增前后偏倚率顯著下降，但擴(kuò)增偏倚率依然較高(約50%)，單基因變異檢測(cè)仍無(wú)法適用，后續(xù)主要用于拷貝數(shù)變異分析。第三類是近年來(lái)發(fā)展的一項(xiàng)新技術(shù)——多重退火環(huán)狀循環(huán)擴(kuò)增法[21]，與前面的技術(shù)相比，除使用隨機(jī)引物外，還利用了新的共同序列和溫度循環(huán)，極大降低了對(duì)模板量的要求，擴(kuò)增較均勻，擴(kuò)增前后偏倚倍數(shù)僅2倍左右，可滿足對(duì)單個(gè)細(xì)胞的檢測(cè)，并且該技術(shù)的基因組覆蓋度達(dá)到了90%以上，已在多領(lǐng)域應(yīng)用。總體而言，WGA技術(shù)雖然同PCR一樣無(wú)法避免單細(xì)胞擴(kuò)增導(dǎo)致的ADO、污染等問(wèn)題。但與PCR技術(shù)相比，全基因組擴(kuò)增技術(shù)是一種單細(xì)胞擴(kuò)增困難的有效解決辦法，顯著降低了擴(kuò)增偏倚率和ADO，同時(shí)使得DNA模板呈線性擴(kuò)增，為全基因組大規(guī)模研究提供了保障。

2.3FISHFISH技術(shù)的原理是依賴帶熒光色素的特異性DNA探針和染色體特異序列雜交，通過(guò)熒光顯微鏡觀察，對(duì)單細(xì)胞水平多個(gè)靶標(biāo)進(jìn)行定位、定量分析DNA的表達(dá)狀況。該技術(shù)是最早用于胚胎植入前染色體異常的檢測(cè)技術(shù)，尤其在性別選擇、非整倍體檢測(cè)中應(yīng)用較多[22]，但能檢測(cè)的染色體數(shù)目較少，僅針對(duì)13、18、21、X和Y染色體，且雜交能力有限、信號(hào)易重疊、多次檢測(cè)又會(huì)發(fā)生DNA降解，分辨率較低，現(xiàn)已逐漸被其他方法所取代[23]。

2.4CGH-arrayCGH技術(shù)的本質(zhì)是消減雜交技術(shù)與FISH技術(shù)的結(jié)合，利用熒光染料分別對(duì)待測(cè)胚胎和正常樣本進(jìn)行熒光標(biāo)記，并與正常細(xì)胞中期染色體進(jìn)行共雜交，然后采用參照組與對(duì)照組的熒光強(qiáng)度比率來(lái)反映待測(cè)樣本中DNA表達(dá)差異量，再借助于圖像分析技術(shù)實(shí)現(xiàn)DNA序列拷貝數(shù)變異及變異定位的檢測(cè)[24]。最重要的是該技術(shù)彌補(bǔ)了FISH技術(shù)的染色體檢測(cè)覆蓋不足的缺點(diǎn)。CGH-array技術(shù)，是CGH與基因芯片相結(jié)合的技術(shù)，較CGH技術(shù)的靈敏度、精確度、自動(dòng)化程度更高，主要用于嵌合體、非平衡易位、微缺失、微重復(fù)等異常的檢測(cè)，但仍無(wú)法檢測(cè)DNA序列的變化、平衡重排(羅氏易位、相互易位、倒位)、UPD和三倍體等，準(zhǔn)確性較低[14,21]。

2.5SNP arraySNP array技術(shù)也稱芯片技術(shù)，其原理是將大量SNP位點(diǎn)固定在芯片上，然后再與樣品雜交捕獲、激光掃描，可通過(guò)全基因組水平的SNP單倍型連鎖分析，檢測(cè)所有染色體的數(shù)目或結(jié)構(gòu)變異，區(qū)分正常及染色體平衡易位或倒位、UPD、三倍體等[24,25]。通常，SNP芯片含有大約30萬(wàn)個(gè)檢測(cè)位點(diǎn)，與FISH技術(shù)相比，其位點(diǎn)數(shù)量顯著增加，這些位點(diǎn)幾乎覆蓋了整個(gè)基因組所有已知的基因或染色體片段，理論上可獲知染色體的全部情況，且分辨率高，可達(dá)1.5kb[26-28]。但該技術(shù)的缺點(diǎn)是技術(shù)要求高、重復(fù)性差、費(fèi)用昂貴，無(wú)法檢測(cè)單堿基變異。

2.6HTSHTS最早是從焦磷酸測(cè)序的原理上發(fā)展而來(lái)的。自10余年前HTS首次用于植入前遺傳學(xué)檢測(cè)以來(lái)，逐步實(shí)現(xiàn)了非整倍體、結(jié)構(gòu)變異、堿基變異的檢測(cè)，成為了PGT-M領(lǐng)域最有潛力的技術(shù)。隨著二代測(cè)序技術(shù)(next generation sequencing, NGS)的不斷成熟，NGS幾乎是HTS技術(shù)代名詞。盡管三代、四代測(cè)序技術(shù)已經(jīng)出現(xiàn)，但仍面臨許多挑戰(zhàn)，現(xiàn)主要應(yīng)用于科研平臺(tái)，目前各大基因檢測(cè)公司針對(duì)PGT-M領(lǐng)域的應(yīng)用仍以二代測(cè)序技術(shù)為主要平臺(tái)。但是，基于NGS的全基因組檢測(cè)在PGT-M上的應(yīng)用價(jià)格昂貴，操作繁瑣且生物信息分析過(guò)程復(fù)雜，使其無(wú)法作為一種常規(guī)的臨床應(yīng)用的檢測(cè)方式[19,29]。此外，NGS與其他技術(shù)直接對(duì)單個(gè)胚胎細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)均面臨樣本量的不足、DNA模板量極低的客觀現(xiàn)實(shí)[30]。盡管WGA技術(shù)的產(chǎn)生為后續(xù)大規(guī)模的研究提供了保障，但由于起始模板量極低(單個(gè)細(xì)胞DNA含量?jī)H6～10pg)，模板成倍擴(kuò)增隨之產(chǎn)生ADO的問(wèn)題，是當(dāng)前直接檢測(cè)面臨的主要挑戰(zhàn)[12,31]。因此，直接對(duì)胚胎突變位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)的結(jié)果將變得不可靠，易造成誤診。

2.7單倍型分析技術(shù)單倍型分析技術(shù)通過(guò)短串聯(lián)重復(fù)序列或SNP單倍型連鎖分析，在疾病基因定位識(shí)別、探索順式互作在基因表達(dá)調(diào)控中的作用、種群歷史分析、進(jìn)化遺傳學(xué)研究等方面發(fā)揮著重要作用。2006年，Renwick等[32]率先提出“植入前單倍型分析”概念。植入前單倍型分析是指在體外受精-胚胎移植之前，基于單倍型連鎖分析，利用一系列檢測(cè)手段對(duì)胚胎的遺傳標(biāo)記進(jìn)行檢測(cè)，推斷親本間同源染色體不同遺傳位點(diǎn)的組合，判斷變異來(lái)源，對(duì)突變基因進(jìn)行定位分析。這種基于疾病相關(guān)基因內(nèi)部和附近的多個(gè)遺傳標(biāo)記的檢測(cè)方式，借助特定位點(diǎn)的靶標(biāo)檢測(cè)，設(shè)計(jì)不同的試劑盒以涵蓋更多的變異，進(jìn)而可實(shí)現(xiàn)整條染色體的疾病定位及病因分析，可間接規(guī)避特定位點(diǎn)的高ADO問(wèn)題，將正常染色體與突變基因所在的染色體區(qū)分開(kāi)來(lái)，展示了其極高的準(zhǔn)確性和可靠性[33-35]。因此，目前市面上基于NGS的單倍型分析技術(shù)被廣泛應(yīng)用于臨床作為單基因病胚胎植入前遺傳學(xué)檢測(cè)的解決方案，針對(duì)特定疾病進(jìn)行精細(xì)化設(shè)計(jì)及檢測(cè)，大幅降低了檢測(cè)成本，具有高靈敏度、高準(zhǔn)確性、高檢出率，適用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)。但在一些特殊情況下單倍型分析法也面臨著嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)，如利用家系推斷法推斷單倍型時(shí)在家系成員缺失或難以獲取時(shí)將無(wú)法實(shí)現(xiàn)[36]；其次，受連鎖不平衡的影響，借助群體數(shù)據(jù)庫(kù)的群體推斷法往往會(huì)遺漏群體中極低突變率的個(gè)體，最終導(dǎo)致漏診[35]；此外，對(duì)于一些新發(fā)變異，這里指父母無(wú)突變而子代存在突變的情形，單倍型分析法也易出現(xiàn)漏診[36-38]。因此，一種既能直接獲得單倍型(只需檢測(cè)夫妻雙方樣本及胚胎樣本)又能兼顧成本的方法將是今后發(fā)展的方向。

3 PGT-M的應(yīng)用范圍

單基因病遵循孟德?tīng)栠z傳規(guī)律，從親代向子代傳遞，故PGT-M的常規(guī)適應(yīng)證取決于潛在的遺傳變異背景。PGT-M通過(guò)一系列技術(shù)及分析方法可診斷胚胎是否攜帶異常單基因突變，并獲知其變異的親本來(lái)源。PGT-M的應(yīng)用范圍主要包括：①父母均攜帶已知基因的常染色體隱性遺傳病，如囊性纖維化、地中海貧血、鐮狀細(xì)胞病等；②父母一方或雙方常染色體顯性遺傳病，如脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)癥、亨廷頓氏舞蹈病等；③X性連鎖疾病，如血友病等；④父母具有不完全外顯率的突變，如可導(dǎo)致癌癥易發(fā)綜合征的BRCA1/2突變；⑤父母攜帶某些染色體平衡易位或倒置；⑥HLA分型，尋找相同HLA配型進(jìn)行干細(xì)胞治療；⑦不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)，旨在減少反復(fù)流產(chǎn)引起的并發(fā)癥和副作用[238-40]。隨PGT檢測(cè)能力的不斷提高，越來(lái)越多的單基因病被納入其中。值得注意的是，PGT-M作為國(guó)家、社會(huì)、家庭控制生育質(zhì)量、實(shí)現(xiàn)優(yōu)生優(yōu)育而采取的積極的輔助生殖措施，雖然已在世界各地廣泛應(yīng)用，但大多數(shù)國(guó)家將PGT-M的適應(yīng)證僅限制于嚴(yán)重性單基因遺傳病[6-7]。而不對(duì)其他類型單基因疾病進(jìn)行檢測(cè)，如在下述情況下卻不適用：①父母尚未確定是否存在明確遺傳疾??；②性別選擇，如平衡男女比例；③表型選擇，如頭發(fā)顏色、重瞼等。這種應(yīng)用性受到限制的原因在于PGT-M打破了傳統(tǒng)自然妊娠的模式，面臨諸多倫理、社會(huì)、法律等問(wèn)題[39]。

4 PGT-M相關(guān)倫理思考

除技術(shù)、法律、經(jīng)濟(jì)等因素外，倫理問(wèn)題是決定PGT-M未來(lái)發(fā)展的一個(gè)關(guān)鍵因素[41]。PGT-M在倫理上是有爭(zhēng)議的，因?yàn)閷?duì)受試者、胚胎和子代有潛在的影響。國(guó)際上關(guān)于PGT-M的本身爭(zhēng)論主要集中在是否應(yīng)該允許這樣的技術(shù)，其對(duì)胚胎進(jìn)行篩選的行為改變了人性，必然會(huì)威脅到人類尊嚴(yán)和自由民主權(quán)，并且將越來(lái)越多地導(dǎo)致市場(chǎng)驅(qū)動(dòng)的不平等[42]。盡管PGT-M是針對(duì)胚胎植入前進(jìn)行的干預(yù)措施，不違反“不傷害”原則，但為保證健康胎兒無(wú)差錯(cuò)的出生，實(shí)際應(yīng)用中仍需牽涉體外授精、基因檢測(cè)、植入后/產(chǎn)前檢測(cè)三個(gè)領(lǐng)域，而每個(gè)領(lǐng)域都引發(fā)了各自的倫理問(wèn)題[43]。圍繞PGT-M相關(guān)胚胎的道德和法律地位及其潛在的優(yōu)生維度的核心倫理問(wèn)題，進(jìn)而引發(fā)胚胎是否是一個(gè)完整生命，能否享有尊重、不傷害、生命自主權(quán)等基本權(quán)益以及最新關(guān)于人類基因庫(kù)的潛在弱化、人倫關(guān)系、子代安全責(zé)任問(wèn)題和社會(huì)上越來(lái)越多的不孕癥等爭(zhēng)論[44]。同時(shí)，PGT-M尚存在一定的誤診、漏診風(fēng)險(xiǎn)，若錯(cuò)誤淘汰了正常胚胎，剝奪了其生命自主權(quán)；若在產(chǎn)前檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)其漏診，產(chǎn)婦不得已引產(chǎn)，又將違反了不傷害和尊重原則。此外，一些反對(duì)PGT-M的論點(diǎn)甚至是反對(duì)任何形式的技術(shù)干預(yù)生育的“自然選擇過(guò)程”，進(jìn)而衍生了“定制胎兒”這一消極看法，認(rèn)為PGT-M可能導(dǎo)致“無(wú)意義的選擇”，被濫用于特定表型篩選和性別選擇等。實(shí)際上PGT-M的本質(zhì)是一種尋求確保孩子出生時(shí)無(wú)明顯不良的單基因遺傳疾病方法，強(qiáng)調(diào)了非強(qiáng)制性和賦權(quán)性，以胚胎的生物學(xué)定位、濫用的可能性、子代遠(yuǎn)期安全責(zé)任問(wèn)題等并不能作為PGT-M被禁止的充分理由，不應(yīng)妨礙在當(dāng)前采取行動(dòng)預(yù)防子代不必要的疾病和身心痛苦[41]。鑒于科學(xué)、文化和宗教的不同，對(duì)PGT-M的態(tài)度在全球各個(gè)國(guó)家各個(gè)地區(qū)存在較大差異。PGT-M是否應(yīng)該被接受用于哪些單基因疾病或新的醫(yī)療/非醫(yī)療用途，應(yīng)取決于針對(duì)各國(guó)政策、宗教、信仰等仔細(xì)評(píng)估擬定的共識(shí)和對(duì)受試者的重要性及其可能造成的有害影響[41]。當(dāng)前PGT-M尚處于發(fā)展中，存在技術(shù)和應(yīng)用上的局限性，因此如何擅用各種PGT-M檢測(cè)技術(shù)降低漏診、誤診風(fēng)險(xiǎn)，加速輔助生殖醫(yī)學(xué)倫理建設(shè)及完善，并在實(shí)際應(yīng)用中結(jié)合各個(gè)國(guó)家的政策及專家指南/共識(shí)顯得尤為重要。

5 國(guó)內(nèi)PGT-M發(fā)展現(xiàn)狀

2000年，“中華試管嬰兒之父”莊廣倫教授帶領(lǐng)團(tuán)隊(duì)率先在中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院行胚胎篩選、阻斷了血友病攜帶者夫婦的致病基因向子代傳遞，完成了國(guó)內(nèi)首例PGT-M，意味著中國(guó)自此之后進(jìn)入了第三代試管嬰兒的發(fā)展進(jìn)程中。繼之，北京大學(xué)喬杰院士團(tuán)隊(duì)、中信湘雅生殖與遺傳?？漆t(yī)院、上海國(guó)際和平婦幼保健院、南京婦幼保健院等陸續(xù)通過(guò)植入前遺傳學(xué)檢測(cè)技術(shù)成功實(shí)現(xiàn)了家族遺傳性多發(fā)性骨軟骨瘤病、家族性罕見(jiàn)病視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、Leri-Weill軟骨發(fā)育不良癥、MAGEL2基因相關(guān)變異、先天性骨骼發(fā)育不良等疾病的阻斷[45-46]。單基因病并不罕見(jiàn)，作為人口基數(shù)大國(guó)，中國(guó)約有2000萬(wàn)單基因病患者[45]，而相較歐美國(guó)家，我國(guó)PGT-M發(fā)展仍較緩慢，尚能解決的單基因病范圍有限，但其需求卻呈現(xiàn)爆發(fā)式增長(zhǎng)。截至2020年12月31日，國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)官網(wǎng)(http://www.nhc.gov.cn)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示國(guó)內(nèi)體外受精治療周期數(shù)為1082192個(gè)，獲批開(kāi)展人類輔助生殖技術(shù)的醫(yī)療機(jī)構(gòu)共536家，其中僅78家可開(kāi)展胚胎植入前遺傳學(xué)診斷技術(shù)。伴隨分子測(cè)序技術(shù)的不斷發(fā)展與成熟，將全面加速中國(guó)PGT-M的市場(chǎng)進(jìn)程，現(xiàn)有的PGT-M技術(shù)和檢測(cè)機(jī)構(gòu)遠(yuǎn)無(wú)法滿足市場(chǎng)需求，尚有廣袤的發(fā)展前景。如今我國(guó)已經(jīng)將PGT-M歸為人類輔助生殖技術(shù)進(jìn)行管理，并頒布了《人類輔助生殖技術(shù)管理辦法》、《人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用規(guī)劃指導(dǎo)原則(2021版)》、《人類輔助生殖技術(shù)和人類精子庫(kù)倫理原則》、《人類輔助生殖技術(shù)管理專項(xiàng)整治行動(dòng)方案》等；同時(shí)，2018年《胚胎植入前遺傳學(xué)診斷/篩查技術(shù)專家共識(shí)》發(fā)布[39]，均促進(jìn)了整個(gè)市場(chǎng)進(jìn)入規(guī)范化、專業(yè)化時(shí)代。未來(lái)，PGT-M技術(shù)將為中國(guó)更多的單基因病攜帶者的優(yōu)生優(yōu)育帶來(lái)曙光，對(duì)我國(guó)“全面開(kāi)放三孩政策”的實(shí)施執(zhí)行以及單基因病出生缺陷兒發(fā)生率的降低做出進(jìn)一步的貢獻(xiàn)。

6 結(jié)語(yǔ)與展望

隨著單基因病種類及患病率的不斷增加，PGT-M作為單基因病一級(jí)預(yù)防措施及輔助生殖的重要手段，無(wú)疑是人類遺傳學(xué)和臨床領(lǐng)域關(guān)注的焦點(diǎn)。體外受精的胚胎在不同時(shí)期發(fā)育潛能、診斷能力有所差異，近年來(lái)在獲取更高質(zhì)量的胚胎單細(xì)胞數(shù)據(jù)方面取得了重大進(jìn)展，胚胎細(xì)胞分離技術(shù)的提升，基因組擴(kuò)增、測(cè)序和分析方法的改進(jìn)以及PGT-M市場(chǎng)的規(guī)范化，無(wú)疑使PGT-M的應(yīng)用更具前景。諸如單倍型分析技術(shù)，作為一種新型的檢測(cè)技術(shù)間接規(guī)避了ADO的影響，為PGT-M在越來(lái)越多的遺傳缺陷疾病中的應(yīng)用開(kāi)辟了道路，繼之可檢測(cè)的病種數(shù)量和應(yīng)用范圍也在逐年增加和擴(kuò)大。因此，如何優(yōu)化檢測(cè)技術(shù)，克服ADO、降低成本，同時(shí)為臨床應(yīng)用提供合理的技術(shù)指導(dǎo)，將成為我們今后進(jìn)一步探索的方向。同時(shí)，我們相信隨著測(cè)序技術(shù)地不斷完善與成熟，當(dāng)前PGT-M面臨的難點(diǎn)將會(huì)逐一攻破，低成本、高精準(zhǔn)測(cè)序?qū)⒉辉龠b遠(yuǎn)。