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      川、浙麥冬質(zhì)量差異研究概況

      2021-12-03 01:01:19楊乾展張加余韓麗娟
      亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥 2021年6期
      關(guān)鍵詞:麥冬產(chǎn)地皂苷

      王 麗,楊乾展,張加余,李 寧*,韓麗娟

      (1.康美華大基因技術(shù)有限公司,廣東 深圳 518000;2.康美藥業(yè)股份有限公司,廣東 揭陽 522000; 3.賽默飛世爾科技(中國)有限公司,四川 成都 610000;4.濱州醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院,山東 煙臺 264003)

      麥冬為百合科植物麥冬Ophiopogonjaponicus(L.f.) Ker-Gawl.的干燥塊根,夏季采挖,洗凈,反復(fù)暴曬、堆置,至七八成干,除去須根,干燥即可入藥;具有養(yǎng)陰生津,潤肺清心之功效,用于肺燥干咳、陰虛癆嗽、喉痹咽痛、津傷口渴、內(nèi)熱消渴、心煩失眠、腸燥便秘等[1]。麥冬為常用中藥,具有悠久的用藥歷史,其傳統(tǒng)主產(chǎn)地為四川和浙江兩省,分別稱為川麥冬和浙麥冬[2]。

      麥冬最早于1781年由CARL VON LINNE定種,歸入鈴蘭屬(Convallaria),1807年由KER-GAWLER歸入沿階草屬,《中國植物志》及《中國藥典》均沿用此分類方法[3]。浙麥冬的學(xué)名和分類學(xué)地位曾經(jīng)存在爭議。日本學(xué)者曾將移植到日本的浙江杭州產(chǎn)麥冬定名為OphiopogonChekiangensisK.Kimura et H.Migo。余伯陽等利用經(jīng)典分類學(xué)、主要分類特征定量分析,并結(jié)合花粉粒、葉表面掃描電鏡特征以及塊根根被組織特征,對浙麥冬、日本產(chǎn)麥冬、日本引種的浙麥冬進(jìn)行了研究,認(rèn)為浙麥冬的原植物學(xué)名仍應(yīng)為Ophiopogonjaponicus(L.f.) Ker-Gawl.。以上研究為川、浙麥冬的正本清源做了基礎(chǔ)性研究工作,為后續(xù)研究提供了前提條件。

      道地藥材是中藥特有的質(zhì)量概念。我國歷代醫(yī)家均十分重視中藥的產(chǎn)地,在總結(jié)藥性變遷與地域環(huán)境關(guān)系的基礎(chǔ)上提出了道地藥材這一概念。古籍的記載及現(xiàn)代研究均認(rèn)為,產(chǎn)地是道地藥材形成的一個重要原因[4]。近年來,麥冬逐漸成為國內(nèi)外中藥、天然藥物領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。然而相當(dāng)多的文獻(xiàn)僅標(biāo)注其拉丁學(xué)名,而未對產(chǎn)地進(jìn)行區(qū)分。這一現(xiàn)象一定程度上造成了川、浙麥冬的混淆。研究表明,川、浙麥冬具有較大的質(zhì)量差異,本研究以此為切入點(diǎn)做一簡要綜述,以期為麥冬的進(jìn)一步研究開發(fā)提供參考。

      1 麥冬本草考證

      麥冬始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,列為上品,歷代重要本草均有記載。唐代陳藏器《本草拾遺》載其“出江寧者小潤,出新安者大白”,指明產(chǎn)地為江蘇南京及浙江淳安周邊地區(qū)。宋代蘇頌《本草圖經(jīng)》認(rèn)為麥冬“或云吳地者尤勝”。明代李時珍《本草綱目》曰:“古人惟用野生者,后世所用多是種蒔而成……浙中來者甚良?!苯鼙隆对鲇唫嗡帡l辨》記載:“出杭州筧橋者,色白有神,為最佳。安徽寧國七寶,浙江余姚出者,名花園子,肥短體重,心粗,色白帶黃,略次,近時市用,以此種最多。四川出者,色呆白短實(shí),質(zhì)重性粳,亦次?!备鶕?jù)以上記載,川麥冬、浙麥冬均有出產(chǎn)和藥用歷史,但浙麥冬的評價要高于川麥冬。

      2 種植栽培及產(chǎn)地加工情況

      麥冬商品藥材以栽培品為主。浙麥冬為傳統(tǒng)“浙八味”道地藥材之一,原產(chǎn)于杭州筧橋、蕭山、慈溪、余姚等地。浙麥冬的生長周期較長,通常為2~4年。近年來,由于原產(chǎn)地發(fā)生城市化進(jìn)程,土地資源和人力成本升值,加之麥冬藥材價格不高,藥農(nóng)種植積極性下降,栽培面積及產(chǎn)量有所萎縮。川麥冬集中栽培于四川綿陽市三臺縣周邊地區(qū),其栽培期僅1年,生長期短,產(chǎn)量高,該地區(qū)已發(fā)展成為我國最大的麥冬產(chǎn)地。目前,川麥冬是市場主流的麥冬商品藥材。除栽培年限外,川、浙麥冬種植土壤的理化性質(zhì)也有一定差異,在種植方式、種植收獲時間、田間管理、水肥施用等方面均有不同[5]。川麥冬有施用多效唑等膨大劑植物生長調(diào)節(jié)劑的報(bào)道[5-6]。就藥材干燥方式而言,浙麥冬多采用反復(fù)悶曬干燥;川麥冬多用煤炭火烘干,煤炭火烘烤引起的二氧化硫污染逐漸引起了人們的重視[5-7]。

      3 藥材性狀及顯微特征

      川、浙麥冬在藥材性狀上有較明顯的差異。李正等[8]經(jīng)比較研究,認(rèn)為浙麥冬外觀 “縱紋明顯”“中柱明顯且有韌性”“嚼之有黏性”,川麥冬“縱紋不明顯”“中柱細(xì)小”“嚼之黏性不明顯”。此外浙麥冬氣味“芳香濃郁”,川麥冬“氣微”。以上特征對于商品藥材的區(qū)分鑒別較有實(shí)用價值。川、浙麥冬的顯微特征接近,但性狀特征中“中柱細(xì)小”與“中柱明顯”的差異在橫切面顯微中也有所體現(xiàn)。另外兩者髓部大小有一定區(qū)別,浙麥冬髓部占中柱的1/2左右,而川麥冬髓部占中柱的比例一般為3/5左右或更大[9]。

      4 分子生藥學(xué)研究

      國內(nèi)外學(xué)者采用分子生藥學(xué)研究方法對麥冬類藥材的遺傳物質(zhì)進(jìn)行了一系列研究。研究手段包括:RAPD(random amplification polymorphic DNA)分子標(biāo)記[10-11]、RAPD-SCAR(sequence-characterized amplified regions)分子標(biāo)記[12]、SRAP(sequence-related amplified polymorphism)分子標(biāo)記[13]、ISSR(inter-simple sequence repeats)分子標(biāo)記[14]、RSAP(restriction site amplification polymorphism)分子標(biāo)記[15]、rDNA-ITS序列分析[16]等。以上大部分研究的內(nèi)容在于麥冬及包括山麥冬屬(Liriope)在內(nèi)的近緣種的遺傳多樣性分析及區(qū)分鑒別,而非川、浙麥冬的種內(nèi)產(chǎn)地鑒別。盡管如此,許多研究中,川、浙麥冬樣品均包含在內(nèi)。綜合研究結(jié)果,其遺傳背景并不一致。王玉霞等[5]利用基于轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)建立的EST-SSR(express sequence tag-simple sequence repeats)分子標(biāo)記對川、浙麥冬進(jìn)行了研究,認(rèn)為它們之間存在顯著的遺傳差異,不同的藥材品質(zhì)可能與獨(dú)特的遺傳特性相關(guān)。陳士林等[17]在麥冬葉綠體基因非編碼區(qū)psbA-trnH序列上發(fā)現(xiàn)了SEQ ID NO.1序列,并設(shè)計(jì)引物對該序列進(jìn)行了增擴(kuò)和測序,根據(jù)該序列88位堿基的A/G可鑒定川麥冬和浙麥冬,在此基礎(chǔ)上開發(fā)了檢測試劑盒。該研究認(rèn)為,由于長期的生長環(huán)境及栽培方式不同,麥冬形成了一定的種內(nèi)變異,產(chǎn)生了兩種不同的“地方性特化基因型”。

      劉霞等[18]選擇傳統(tǒng)道地藥材麥冬為模型,收集 75 份實(shí)驗(yàn)樣本,通過分子鑒定技術(shù)和生態(tài)因子分析研究川麥冬和浙麥冬的生態(tài)型差異;結(jié)果川麥冬和浙麥冬的 psbA-trnH 序列在49位點(diǎn)處存在變異,川麥冬為堿基腺嘌呤( A),浙麥冬為堿基鳥嘌呤( G),此為兩者序列的差異化特征;生態(tài)因子分析顯示四川、浙江兩大產(chǎn)區(qū)呈現(xiàn)不同的地理生態(tài)型。

      王夢涵等[19]通過高通量測序技術(shù)對川麥冬和杭麥冬葉綠體基因組進(jìn)行測序、拼接及注釋,利用生物信息學(xué)方法對葉綠體基因組結(jié)構(gòu)特征及系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)行分析;結(jié)果川麥冬與杭麥冬的序列長度基本一致,川麥冬在ycf1基因及trnF-ndhJ、ndhF-rpl32、rpl32-trnL基因間隔區(qū)與杭麥冬存在明顯差異,這些區(qū)域可為川麥冬物種鑒定特異性DNA條形碼的篩選提供參考。

      5 化學(xué)成分研究

      化學(xué)成分是中藥作用的物質(zhì)基礎(chǔ),麥冬的化學(xué)成分已有相當(dāng)多的文獻(xiàn)報(bào)道。CHEN MH等[20]對麥冬的化學(xué)成分進(jìn)行了較為詳盡的研究,從麥冬中共分離鑒定出75個甾體皂苷、36個高異黃酮、11個多糖、13個有機(jī)酸及4個糖苷類物質(zhì)等。由于一些文獻(xiàn)未對藥材產(chǎn)地進(jìn)行區(qū)分,因此這些化合物在川、浙麥冬中的分布情況較難以一一追溯。LU XIAO YAN 等[21]采用HPLC-MS法分析了川麥冬和浙麥冬的成分,結(jié)果兩產(chǎn)地麥冬的化學(xué)成分存在明顯差異,其中有19個化合物可以用于兩者的區(qū)分。

      5.1 甾體皂苷

      麥冬皂苷是麥冬最主要的藥理活性成分,川、浙麥冬甾體皂苷類成分的差異較明顯??偤糠矫?,唐曉清等[22]利用分光光度法定量測定了川、浙麥冬樣品總皂苷的含量,發(fā)現(xiàn)浙麥冬總皂苷的含量低于川麥冬;唐曉清等[23]還采用HPLC-ELSD法測定了樣品中魯斯可皂苷元的含量,發(fā)現(xiàn)浙麥冬魯斯可皂苷元的含量同樣低于川麥冬。對于單體成分,研究集中于麥冬皂苷D的含量測定。吳發(fā)明等[24]采用HPLC-ELSD法測定不同產(chǎn)地麥冬中麥冬皂苷D、麥冬皂苷D′的含量,結(jié)果兩種成分在浙麥冬中含量均遠(yuǎn)低于川麥冬。綜合研究結(jié)果,麥冬皂苷D是川麥冬中含量最高的皂苷,而在浙麥冬中含量較低,部分批次的浙麥冬樣品甚至檢測不到;因此麥冬皂苷D的含量可作為川麥冬質(zhì)量指標(biāo),而不適合作為浙麥冬質(zhì)量的指標(biāo)[25-26]。董政起等[26]報(bào)道麥冬皂苷D′是川麥冬中主要的皂苷類成分,浙麥冬中僅含微量的麥冬皂苷D′。LI XIAN-EN等[27]研究認(rèn)為浙麥冬中麥冬皂苷D′的含量略高于川麥冬。李寧等[28]曾對川麥冬的化學(xué)成分進(jìn)行分離鑒定,在上述文獻(xiàn)麥冬皂苷D′保留時間區(qū)域未分離得到麥冬皂苷D′,而分離得到了較大量的sprengerinin C。該化合物是麥冬皂苷D′的同分異構(gòu)體,僅木糖的連接位置有差異。余伯陽等[29]報(bào)道浙麥冬含較多的麥冬皂苷B,而川麥冬僅含少量的皂苷B。

      5.2 高異黃酮類化合物

      對于高異黃酮類成分的研究,林以寧等[30]選用8個高異黃酮對照品對川、浙麥冬HPLC-UV指紋圖譜的色譜峰進(jìn)行了標(biāo)定,進(jìn)而用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對未知色譜峰的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了研究,共計(jì)推斷鑒別24個色譜峰,其中浙麥冬19個、川麥冬17個,共有成分12個[31];在研究中發(fā)現(xiàn)浙麥冬中甲基麥冬黃烷酮A和甲基麥冬黃烷酮B的含量分別是川麥冬的3倍和7倍。童菊華等[32]、陳有根等[33]對川、浙麥冬中這兩種成分的含量進(jìn)行了測定,得出了相近的結(jié)論。李寧[34]曾用10個高異黃酮對照品對川、浙麥冬HPLC-UV指紋圖譜的色譜峰進(jìn)行了標(biāo)定,其中川麥冬9個、浙麥冬8個,共有成分7個。在此基礎(chǔ)上,利用化學(xué)計(jì)量學(xué)方法建立了川、浙麥冬的區(qū)分方法,尋找了造成差異的關(guān)鍵色譜峰。以上研究系不同課題組于不同時間各自收集樣品開展的獨(dú)立研究,但得到的高異黃酮指紋圖譜具有極高的相似性,結(jié)論也比較一致,進(jìn)一步證實(shí)了麥冬不同化學(xué)型的客觀存在。川、浙麥冬高異黃酮具有許多共有成分,其差異主要體現(xiàn)在各成分含量和比例的不同,就有效活性成分的含量來說,一般浙麥冬高于川麥冬。

      5.3 麥冬多糖

      麥冬多糖作為麥冬的主要活性成分之一,具有耐缺氧、降血糖、抗炎、抗腫瘤、抗氧化等多種藥理作用[35]。張琳等[36]研究了不同提取方式對麥冬多糖含量的影響,結(jié)果3種不同提取方式中浙麥冬多糖含量均高于川麥冬。劉雪等[37]采用HPLC-ELSD法測定了川、浙麥冬果糖的含量,結(jié)果川麥冬游離果糖的含量高于浙麥冬,而水解果糖的含量低于浙麥冬。王志斌等[38]研究發(fā)現(xiàn)川麥冬藥材中果糖的含量遠(yuǎn)高于浙麥冬藥材。目前的研究也表明,不同產(chǎn)地麥冬多糖在含量、相對分子質(zhì)量分布和單糖組成方面均有顯著差異[39],因此仍需進(jìn)一步研究麥冬產(chǎn)地和麥冬多糖的關(guān)系,為其藥效基礎(chǔ)研究、多糖藥物開發(fā)提供依據(jù)。

      5.4 其他成分

      李正等[8]研究認(rèn)為龍腦苷(borneol-2-O-β-D-apiofuranosyl(1→6)-β-D-glucopyranoside)是浙麥冬的特有成分,川麥冬不含有龍腦苷,據(jù)此李正等建立了HPLC-ELSD 測定浙麥冬中龍腦苷含量的方法。樓啟正等[40]采用氫化物發(fā)生-電感耦合等離子體-原子發(fā)射光譜法對川、浙麥冬中鎳、鋅、錳、銅、鎂、鐵、鈣和鉛等無機(jī)元素的含量進(jìn)行了分析測定,發(fā)現(xiàn)麥冬中的鐵元素含量較高,而鋅含量浙麥冬比川麥冬高近1倍。

      5.5 指紋圖譜相似性研究

      譚小燕等[41]采用氫核磁共振(1H NMR)測定不同產(chǎn)地麥冬甲醇提取物的指紋圖譜,采用主成分分析、偏最小二乘法判別分析以及聚類分析進(jìn)行識別分析,建立了不同產(chǎn)地麥冬的鑒別方法。該研究包括了兩個不同的川麥冬品種:涪麥冬和綿麥冬。結(jié)果顯示綿麥冬同浙麥冬的指紋圖譜基本一致,而涪麥冬的成分同它們差別較大。江洪波等[42]也對不同產(chǎn)地麥冬(包括涪麥冬、綿麥冬、浙麥冬等)甲醇提取物的1H NMR指紋圖譜進(jìn)行了研究,但該研究認(rèn)為不同產(chǎn)地樣品的指紋圖譜有較大的差異,綿麥冬與浙麥冬也有不同,可根據(jù)不同化學(xué)位移區(qū)段的特征進(jìn)行細(xì)分。余國梅等[43]采用近紅外光譜技術(shù)研究了川、浙麥冬及山麥冬屬近緣植物的指紋圖譜,采用主成分分析與馬氏距離相結(jié)合的判別分析法建立藥材鑒別模型。該模型具有良好的預(yù)測性能,川、浙麥冬有較大差異。1H NMR及近紅外光譜指紋圖譜是基于藥材全成分或總體成分的分析方法,在復(fù)雜成分表征及藥材快速鑒別方面具有優(yōu)勢,但對于各具體化合物差異的解釋存在一定困難。

      6 生物活性研究

      麥冬的主要功效為養(yǎng)陰生津、潤肺清心,具有降血糖、保護(hù)心血管系統(tǒng)、增強(qiáng)免疫力、抗皮膚衰老、抗炎、抗腫瘤等藥理作用[44]。由于川、浙麥冬化學(xué)成分的差異,兩者在藥理藥效上也存在一定差異。

      童菊華等[45]比較了川、浙麥冬抗氧化活性,結(jié)果川麥冬水提物清除自由基的IC50平均值為 16.59 mg/mL,杭麥冬的IC50平均值為 14.48 mg/mL,陽性對照VC的IC50值為 7.06 μg/mL,說明杭麥冬具有較強(qiáng)的抗氧化活性。張琳等[46]研究了不同提取方式對麥冬多糖含量的影響,結(jié)果3種不同提取方式中浙鹿鼎盒麥冬多糖含量均高于川麥冬,間接證明了浙麥冬抗氧化活性優(yōu)于川麥冬。

      王玉霞等[47]比較了川、浙麥冬水提物對大鼠血液及心肌細(xì)胞、肺生化指標(biāo)的影響。川、浙麥冬均能降低心肌細(xì)胞乳酸和乳酸脫氫酶的含量,升高血清中谷胱甘肽過氧化物酶的含量,除杭麥冬高劑量組外,均能提高大鼠肺抗氧化能力。但川、浙麥冬的藥效存在差異:低劑量組中,川麥冬組心肌細(xì)胞乳酸含量顯著低于杭麥冬;對于中高劑量組,川麥冬升高血清谷胱甘肽過氧化物酶的程度顯著低于杭麥冬;川、浙麥冬對血常規(guī)的影響亦有不同。童菊華等[48]利用代謝組學(xué)研究方法,采用超高效液相-四級桿飛行時間質(zhì)譜結(jié)合多變量統(tǒng)計(jì)分析研究了川、浙麥冬對正常大鼠血漿內(nèi)源性代謝物干預(yù)作用的差異;結(jié)果顯示:杭麥冬較川麥冬的干預(yù)作用更為顯著,具有顯著性差異的內(nèi)源性代謝產(chǎn)物為與心血管系統(tǒng)類疾病緊密相關(guān)的溶血磷脂酰膽堿類物質(zhì)。GE LL等[49]研究了川、浙麥冬水提物和乙醇提取物的細(xì)胞毒性,以及它們對孕烷X受體的激活和對CYP3A4表達(dá)的影響。相對于川麥冬醇提物,浙麥冬醇提物有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性、較弱的孕烷X受體激活作用和較強(qiáng)CYP3A4誘導(dǎo)作用。川、浙麥冬水提物的細(xì)胞毒性和CYP3A4誘導(dǎo)作用相近。浙麥冬水提物的孕烷X受體激活作用較川麥冬水提物弱。綜合以上研究,川、浙麥冬表現(xiàn)了多方面的藥效差異。

      7 結(jié)語

      綜上所述,川、浙麥冬在本草考證、種植栽培及產(chǎn)地加工、性狀及顯微特征、遺傳背景、化學(xué)成分、生物活性等諸多方面均存在一定的差異,不宜一概而論?;瘜W(xué)成分研究是質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制訂和藥效研究的基礎(chǔ)。川、浙麥冬的化學(xué)成分,特別是甾體皂苷類成分的差異亟待進(jìn)一步研究闡明。在《香港中藥材標(biāo)準(zhǔn)》“麥冬”項(xiàng)下[50],以麥冬皂苷D作為薄層色譜鑒別、指紋圖譜鑒別和含量測定的指標(biāo)性成分。香港中藥材標(biāo)準(zhǔn)的制訂基于大量中國大陸及香港本地藥材市場的調(diào)查和樣品收集,由于川麥冬是目前主流的市場品種,因此標(biāo)準(zhǔn)制訂過程中缺乏對于浙麥冬的考量。

      麥冬作為藥食兩用藥材,在食品、保健食品、中藥方劑、中成藥等領(lǐng)域均有廣泛應(yīng)用,如麥冬養(yǎng)生茶、麥門冬湯、沙參麥冬顆粒、參麥注射液、生脈散等[51]。中藥材質(zhì)量是影響其藥效的關(guān)鍵,不同來源麥冬的有效成分含量受地理區(qū)域、生長條件、收獲季節(jié)和加工方法等因素的影響很大,因此為了保證產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定,生產(chǎn)企業(yè)需固定藥材的基原和產(chǎn)地,因此嚴(yán)格控制麥冬質(zhì)量,以確保藥物的安全性和有效性仍然是一個巨大的挑戰(zhàn)。在深入研究川、浙藥材質(zhì)量差異的基礎(chǔ)上,制訂差異化的質(zhì)量控制方法,對保障麥冬相關(guān)中成藥的質(zhì)量具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

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