病理抗酸染色要避免其它分枝桿菌干擾

陳洪勛 劉衛(wèi)艷 劉偉 謝立 任興昌

摘要： 目的 ?如何避免病理抗酸染色中其它分枝桿菌污染。方法 ?收集操作過程中涉及的水龍頭、水池底部及攤片盛水容器底部的粘性物質(zhì)涂片進(jìn)行抗酸染色，觀察有無抗酸染色陽性菌。結(jié)果 攤片盛水容器底部、清洗水池底部、技術(shù)室水龍頭涂抹物，尤其是粘膩物均有較多抗酸染色陽性桿菌。結(jié)論 ?進(jìn)行病理抗酸染色時所使用的儀器注意清潔，避免其它分枝桿菌的干擾。

關(guān)鍵詞：抗酸染色;陽性桿菌

【中圖分類號】R445 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B 【文章編號】1673-9026（2022）01--01

結(jié)核桿菌的細(xì)菌學(xué)檢查是確定結(jié)核病診斷和治療方案的重要依據(jù)。目前雖然有多種方法用于檢測結(jié)核桿菌[1-2]，但對于病理醫(yī)師來說，抗酸染色法仍然是結(jié)核桿菌檢測的常用方法，其作為一種經(jīng)典方法，成本低廉，操作簡單，一直被各大醫(yī)院廣泛使用。筆者在多年的日常工作中發(fā)現(xiàn)病理標(biāo)本石蠟組織切片抗酸染色容易被自來水中的分支桿菌污染，造成結(jié)果假陽性。下面圍繞這個問題簡要闡述下本科室在日常工作中如何避免常規(guī)抗酸染色中假陽性的產(chǎn)生。

1 ?材料與方法

1.1 ?材料 非結(jié)核病理樣本，每例3um厚切片撈于普通載玻片上，常規(guī)脫蠟后備用;另用棉簽蘸取病理攤片儀盛水容器底部、自來水龍頭、清洗水池邊緣，尤其是粘膩物質(zhì)涂于載玻片上烘片烤干備用。

1.2 ?方法

采用購自貝索公司（BASO）的抗酸染色試劑盒，具體操作步驟參考試劑盒說明書進(jìn)行。

抗酸染色完成后鏡下觀察染色結(jié)果。

2 ? 結(jié)果

油鏡下觀察發(fā)現(xiàn)非結(jié)核病理切片組織周邊有可疑抗酸陽性桿菌，攤片盛水容器底部、清洗水池底部、技術(shù)室水龍頭涂抹物，尤其是粘膩物均有較多抗酸染色陽性桿菌，菌體多帶有節(jié)點，也有不帶節(jié)點呈菌體均一的。

3 ? 討論

目前已發(fā)現(xiàn)分枝桿菌屬有100多種分枝桿菌，國際上通常將分枝桿菌分為遲緩生長（菌落形成需7天或7天以上，慢生型分枝桿菌）和迅速生長（7天之內(nèi)菌落形成，快生型分枝桿菌）兩大類[3]。生長緩慢的結(jié)核分枝桿菌、麻風(fēng)分枝桿菌（麻風(fēng)菌）是典型的致病性分枝桿菌。除結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群（結(jié)核分枝桿菌、牛分枝桿菌、非洲分枝桿菌、田鼠分枝桿菌）和麻風(fēng)分枝桿菌以外的分枝桿菌，統(tǒng)稱為非結(jié)核分枝桿菌。非結(jié)核分枝桿菌（non-tuberculous mycobacteria，NTM）是廣泛存在于自然界水、土壤和空氣塵埃等的環(huán)境微生物，故亦稱環(huán)境分枝桿菌（environmental mycobacterimn，EM）[4-5]。一些NTM也已成為條件致病菌，通過接觸污染的醫(yī)用物品、器械，也有成為醫(yī)院感染發(fā)生的重要原因，而分枝桿菌的耐氯性更強(qiáng)[4]，水中的NTM是污染的主要來源。越來越多的研究發(fā)現(xiàn)NTM存在于公共飲水系統(tǒng)和醫(yī)院供水系統(tǒng)中，包括供水系統(tǒng)水龍頭。

關(guān)于分枝桿菌，病理醫(yī)生知道結(jié)核、麻風(fēng)、非結(jié)核分枝桿菌，也常常因為考慮有相關(guān)肉芽腫病變而進(jìn)行抗酸染色并在油鏡下進(jìn)行仔細(xì)查找。但是，知道自來水中有分枝桿菌的并不多，自來水中不但有分枝桿菌，而且還能耐受含氯消毒劑的作用，在溫暖季節(jié)繁殖更加明顯，醫(yī)生在常規(guī)抗酸染色切片中查找陽性桿菌工作時，有時發(fā)現(xiàn)組織內(nèi)有或者沒有陽性桿菌，組織周邊都會出現(xiàn)陽性桿菌，這種假陽性的發(fā)生很容易影響醫(yī)生的正確診斷，針對此情況我們對工作中的每個環(huán)節(jié)反復(fù)推敲，最終發(fā)現(xiàn)病理組織切刀片攤片所用的自來水垢可能是造成假陽性出現(xiàn)的原因。病理切片撈片時所用的盛水器皿由于沒有每天清洗導(dǎo)致器皿底部自來水中的分枝桿菌得以繁殖生長，從而污染了正常的組織切片，產(chǎn)生假陽性結(jié)果。 攤片用的盛水器皿中出現(xiàn)的粘膩物進(jìn)行涂片，其中抗酸染色陽性菌尤其多，還可以作為抗酸染色的陽性對照。因此，當(dāng)實驗室進(jìn)行抗酸染色或分枝桿菌的相關(guān)檢測，要避免供水系統(tǒng)的污染，定期清洗水龍頭，要將用具清洗干凈，不用時要保持干燥。組織蠟塊切片展片時盡量使用單獨玻璃容器盛裝蒸餾水進(jìn)行展片;如需使用自來水，尤其是在染色前、染色中要注意避免自來水龍頭的污染，保證染色結(jié)果的準(zhǔn)確性。

參考文獻(xiàn)：

[1]葉豐，陳昱，何度，等.應(yīng)用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)對疑似結(jié)核組織的DNA分析[J].中華病理學(xué)雜志，2013，42（8）：534-537.

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[3]邢燕.環(huán)境中分枝桿菌的醫(yī)學(xué)意義及其鑒定[J].中國麻風(fēng)皮膚病雜志，2009，25（2）：114-116.

[4] 王桂榮，黃海榮.非結(jié)核分枝桿菌的分布和生長影響因素及其傳播途徑研究[J].中國防癆雜志，2016，38（10）：869-873.

[5] Falkinhan JO 3rd. Enviromental sources of nontuberculous mycobacteria[J].Clin Chest Med，2015，36（1）：35-41.

作者簡介：陳洪勛，19790328、女、重慶市開縣、杭州市中醫(yī)院，主管技師，碩士研究生，研究方向：微生物學(xué)