李明顯，董杏梅，湯麗鵬，楊海峰，鄭廣娟，何青蓮*

廣東省中醫(yī)院，廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院 1.病理科，2.中藥藥理實(shí)驗(yàn)室，廣州 510120

在常規(guī)病理技術(shù)中[1,2],石蠟切片是諸多操作環(huán)節(jié)中非常重要的關(guān)鍵技術(shù),能夠?yàn)槌Ｒ?guī)HE染色、特殊染色、免疫組化染色[3]及分子篩查等檢測(cè)技術(shù)提供不同規(guī)格要求的組織切片。若宮腔刮出物、小腦占位組織、椎管內(nèi)取出物等組織中的小灶組織疑有惡變或性質(zhì)不能確定,可通過(guò)對(duì)原組織蠟塊深切、連切、薄切等方式再進(jìn)行常規(guī)HE染色，也可對(duì)重新切片的組織進(jìn)行特殊染色、免疫組化染色等檢測(cè)方法，以明確小灶組織的性質(zhì)。但是在上述不同檢測(cè)技術(shù)制得的切片中再次定位原小灶組織具有一定難度，因?yàn)樵谑炃衅琜4]后，放入攤片池內(nèi)的組織切片在水中會(huì)不斷漂游旋轉(zhuǎn)，且很難根據(jù)破碎組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)進(jìn)行辨識(shí)組織的方向，所以同一組織蠟塊再次進(jìn)行相關(guān)技術(shù)檢測(cè)時(shí)就很難制得與原組織切片方向相一致的染色切片。這種制片效果給病理醫(yī)生在顯微鏡下尋找目標(biāo)區(qū)域帶來(lái)一定不便。為了解決上述問(wèn)題，作者設(shè)計(jì)一種改良包埋模具（已獲國(guó)家外觀(guān)設(shè)計(jì)專(zhuān)利:ZL201730568265.6）和改良載玻片（已獲國(guó)家外觀(guān)設(shè)計(jì)專(zhuān)利:ZL201730629223.9），以利于病理醫(yī)生在來(lái)源于同一蠟塊組織的不同玻片上快速識(shí)別相同的目標(biāo)區(qū)域，進(jìn)而提高工作效率及診斷的準(zhǔn)確性。

1 材料與方法

1.1 儀器及耗材

Leica RM2235石蠟切片機(jī)，HISTOCENTRE 3石蠟包埋機(jī)，Leica HI1210攤片池，Roche Benchmark XT全自動(dòng)免疫組化儀，改良包埋模具，改良載玻片。

1.2 結(jié)構(gòu)特點(diǎn)

1.2.1 改良包埋模具 模具由不銹鋼金屬材質(zhì)壓制而成，上部尺寸為長(zhǎng)4 cm×3 cm，中央?yún)^(qū)正方形尺寸為2 cm×2 cm，與普通包埋模具相比，包埋模具兩端分別用紅綠進(jìn)行標(biāo)記,底部增加了一處缺角設(shè)計(jì)（圖1），缺角底邊長(zhǎng)0.5 cm。

圖1 一種改良包埋模具的結(jié)構(gòu)示意圖1.缺角處2.綠色端3.紅色端Fig.1 Structural sketch of an improved embedding die1,corner;2,green end;3,red end

1.2.2 改良載玻片 載玻片由標(biāo)簽區(qū)和組織區(qū)兩部分組成，與普通載玻片相比，組織區(qū)設(shè)計(jì)了兩處相同的不規(guī)則黑色幾何圖形，幾何圖形由兩個(gè)大小不同、形狀相似、排列一致的缺角正方形組成，大者邊長(zhǎng)為2 cm，小者邊長(zhǎng)為1 cm，圖形的大小按照包埋模具的規(guī)格設(shè)計(jì)，并由黑色中性顏料繪制（圖2）。該載玻片上的顏料在脫蠟過(guò)程中會(huì)被有機(jī)溶劑徹底清洗掉，對(duì)后續(xù)的染色過(guò)程及最終染色結(jié)果均無(wú)影響。

圖2 一種改良載玻片的結(jié)構(gòu)示意圖1.標(biāo)簽區(qū)2.組織區(qū)3.大的幾何圖形4.小的幾何圖形Fig.2 Structural sketch of an improved slide1,label area;2,tissuearea;3,largegeometry;4,small geometry

1.3 方法

1.3.1 石蠟包埋 將組織放入具有缺角設(shè)計(jì)的包埋模具底部后，統(tǒng)一改良包埋模具的綠色端與塑料包埋盒的數(shù)字編碼端相一致，向改良包埋模具內(nèi)注入適量蠟液至超過(guò)塑料包埋盒的底部，然后移至冷臺(tái)靜置。

1.3.2 石蠟切片制作 以免疫組化染色切片制作流程為例，將制得的組織蠟塊的數(shù)字編碼端向上固定于切片機(jī)的機(jī)頭上進(jìn)行切片，將具有缺角形狀的多張組織切片放入攤片池內(nèi)，以組織切片的缺角處作為其明顯的標(biāo)識(shí)，根據(jù)組織切片大小并結(jié)合缺角標(biāo)記，裱片時(shí)使組織切片與載玻片上組織區(qū)的幾何圖形相吻合，然后再依次進(jìn)行免疫組化染色程序的相關(guān)操作。

2 結(jié)果

應(yīng)用改良包埋模具制得的蠟塊組織均具有統(tǒng)一規(guī)格的缺角特點(diǎn),而且缺角處與塑料包埋盒的數(shù)字編碼端均具有相對(duì)固定的位置關(guān)系。對(duì)該蠟塊進(jìn)行免疫組化切片時(shí)應(yīng)用改良載玻片進(jìn)行裱片，得到的染色切片均具有組織切片粘貼方向一致及組織切片在載玻片上的位置相對(duì)固定的特點(diǎn)。病理醫(yī)生對(duì)染色切片進(jìn)行觀(guān)察時(shí)，只需要在顯微鏡的低倍視野內(nèi)對(duì)第一張染色切片的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行定位，固定坐標(biāo)后，其余的染色切片依次更換至該處，病理醫(yī)生就能發(fā)現(xiàn)目標(biāo)區(qū)域，節(jié)省了時(shí)間和精力，可以對(duì)相應(yīng)切片做出快速判斷，極大地提高工作效率。

3 討論

為了保證病理診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性，病理醫(yī)生經(jīng)常需要在顯微鏡下對(duì)染色切片進(jìn)行重復(fù)而又繁瑣的觀(guān)察判斷，探尋一種能夠簡(jiǎn)化在顯微鏡下尋找目標(biāo)區(qū)域的繁瑣操作的組織切片制作方法將具有特殊的應(yīng)用價(jià)值與現(xiàn)實(shí)意義。常規(guī)石蠟切片過(guò)程中，傳統(tǒng)的切片制作方法及制作要求并沒(méi)有對(duì)組織切片在載玻片上的角度及相對(duì)位置提出嚴(yán)格要求，因此同一組織蠟塊制得的多張連續(xù)切片之間存在不同的角度及位置差異，制片效果在一定程度上降低了病理醫(yī)生閱片的工作效率。通過(guò)對(duì)包埋模具和載玻片進(jìn)行改進(jìn)，并按照相應(yīng)的操作規(guī)則以達(dá)到同一組織蠟塊的多張連續(xù)切片在載玻片上的粘貼方向相對(duì)統(tǒng)一、粘貼位置相對(duì)固定的制片特點(diǎn)。改良包埋模具兩端不同顏色的設(shè)計(jì)便于石蠟包埋過(guò)程中統(tǒng)一包埋模具的方向，按照實(shí)驗(yàn)中石蠟包埋的操作方法，借助底部的缺角設(shè)計(jì)就能使制得的組織蠟塊的缺角處與塑料包埋盒的數(shù)字編碼端均具有相對(duì)固定的位置關(guān)系，從而得到規(guī)范統(tǒng)一缺角組織蠟塊，減少了額外用刀片制作缺角的操作步驟。石蠟切片時(shí)將具有缺角形狀的組織切片放入攤片池內(nèi)，應(yīng)用改良載玻片進(jìn)行裱片，就能較容易地制得組織切片粘貼方向一致、組織切片在載玻片上的位置相對(duì)固定的染色切片[5]，起輔助作用的不規(guī)則缺角正方形在染色過(guò)程中會(huì)被溶解掉，對(duì)染色結(jié)果沒(méi)有任何影響，而且上述實(shí)驗(yàn)過(guò)程中并沒(méi)有增加技術(shù)員的工作量。對(duì)任一組織蠟塊而言，無(wú)論是一次制得多張連續(xù)切片，還是以后多次制片，即使在沒(méi)有該組織蠟塊的第一次切片可供參考的情況下，按照上述實(shí)驗(yàn)操作方法也能較容易地制作出與第一次的制片效果具有相同的粘貼方向和粘貼位置的切片，而且可以與第一次切片中的組織結(jié)構(gòu)進(jìn)行定性、定量比較，為準(zhǔn)確的病理診斷提供依據(jù)。