新規(guī)程施行后的冷沉淀凝血因子質(zhì)檢結(jié)果分析

安蓬蓬，李浩瀧，紀(jì)蓉蓉，劉軍

（天津市血液中心，天津 300110）

冷沉淀凝血因子是采用特定的方法將保存期內(nèi)的新鮮冰凍血漿在1～6℃融化后，分離出大部分的血漿，并將剩余的冷不溶解物質(zhì)在1 h內(nèi)速凍呈固態(tài)的成分血[1]。冷沉淀凝血因子含有豐富的凝血因子Ⅷ、血管性血友病因子（vWF）以及纖維蛋白原（FIB），臨床上廣泛應(yīng)用于甲型血友病、血管性血友病以及纖維蛋白原缺乏等疾病的治療[2]?！堆炯夹g(shù)操作規(guī)程（2019版）》對冷沉淀凝血因子的制備方法（離心法）做了新的規(guī)定，為保障冷沉淀凝血因子的質(zhì)量，筆者隨即對我單位自2019年9月1日起制備的冷沉淀凝血因子進(jìn)行抽檢和結(jié)果分析，報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 2019年9月1日起，我單位成分科按《血站技術(shù)操作規(guī)程》（2019版）制備的冷沉淀凝血因子中，隨機(jī)抽檢480袋，均由采血時間≤13 min的400 mL全血于6 h內(nèi)分離出的新鮮冰凍血漿制備，外觀正常，均進(jìn)行容量檢測，其中48袋另外檢測纖維蛋白原含量、Ⅷ因子含量和無菌試驗；匯總2018年9月至2019年8月之間，我單位質(zhì)管科的48袋冷沉淀凝血因子的質(zhì)檢記錄，統(tǒng)計纖維蛋白原含量、Ⅷ因子含量。

1.2 儀器 電子天平（北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）；CS-2000i全自動凝血分析儀（上海希森美康醫(yī)用電子有限公司）；BacT/ALERT 3D全自動細(xì)菌分枝桿菌培養(yǎng)檢測系統(tǒng)（生物梅里埃美國股份有限公司）。

1.3 試劑 活化部分凝血活酶時間試劑盒（批號:557295A）；纖維蛋白原測定試劑（批號:547578）；正常范圍定值質(zhì)控血漿（批號:507765A）；因子Ⅷ活性測定試劑盒 （批號:547689A）；緩沖液 （批號:554667）；氯化鈣溶液（批號:563802）；清洗液（批號:A9082），以上試劑均為Siemens Healthcare Diagnostics Products GmbH生產(chǎn)。

1.4 冷沉淀凝血因子制備方法（離心法） 取出待制備冷沉淀的新鮮冰凍血漿，在1～6℃水浴裝置中融化；當(dāng)血漿基本融化時，在2～6℃的環(huán)境下重離心；將大部分上層血漿移至空袋，制成去冷沉淀的冰凍血漿；將留下的40～50 mL血漿與沉淀物混合，制成冷沉淀凝血因子；冷沉淀凝血因子在制備后1 h內(nèi)完成速凍[3]。

1.5 冷沉淀凝血因子質(zhì)檢方法 用電子天平稱量冷沉淀凝血因子重量并計算血容量；Ⅷ因子含量和纖維蛋白原含量用全自動凝血分析儀檢測；無菌試驗由全自動細(xì)菌分枝桿菌培養(yǎng)檢測系統(tǒng)檢測。

1.6 統(tǒng)計學(xué) 處理方法應(yīng)用SPSS 24.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計算樣本中容量、纖維蛋白原含量、Ⅷ因子含量的總體水平95%置信區(qū)間（95%CI），分別與GB18469-2012《全血及成分血質(zhì)量要求》中標(biāo)準(zhǔn)值進(jìn)行比較；按新、舊規(guī)程制備的兩組冷沉淀凝血因子的數(shù)據(jù)間比較采用t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 見表1—2。

表1 按新規(guī)程制備的冷沉淀凝血因子質(zhì)檢結(jié)果

表2 兩組冷沉淀凝血因子的纖維蛋白原含量和Ⅷ因子含量比較

2.2 新規(guī)程組480袋冷沉淀凝血因子中，容量檢測合格率為98%，低于40 mL的有7袋，高于50 mL的有5袋；48袋冷沉淀凝血因子中，纖維蛋白原含量、Ⅷ因子含量，檢測合格率94%；不合格3袋，不合格原因一袋為纖維蛋白原含量偏低（127.70 mg），兩袋為Ⅷ因子含量偏低（67.60 IU、72.10 IU）。舊規(guī)程組48袋冷沉淀凝血因子中，纖維蛋白原含量、Ⅷ因子含量，檢測合格率94%；不合格3袋，不合格原因一袋為纖維蛋白原含量偏低（114.60 mg），兩袋為Ⅷ因子含量偏低（57.80 IU、56.30 IU）。

3 討論

《血站技術(shù)操作規(guī)程》（2019版）將離心法制備冷沉淀凝血因子時，冷沉淀凝血因子中的血漿容量由原來的20～30 mL[4]變?yōu)?0～50 mL[3]，與虹吸法制備冷沉淀凝血因子時，冷沉淀凝血因子中的血漿容量進(jìn)行了統(tǒng)一[3]。我單位使用離心法和全自動血液成分分離機(jī)制備冷沉淀凝血因子，自2019年9月1日起，成分科及時對全自動血液成分分離機(jī)的設(shè)置參數(shù)進(jìn)行了修改，以確保冷沉淀凝血因子的血漿容量與新規(guī)程要求一致。

GB18469-2012對冷沉淀凝血因子的質(zhì)控項目和要求見表1。其中容量要求為標(biāo)示量（mL）±10%，沒有給出確切范圍，因此我單位冷沉淀凝血因子的容量一直以《血站技術(shù)操作規(guī)程》中的相關(guān)規(guī)定為標(biāo)準(zhǔn)。新規(guī)程規(guī)定冷沉淀凝血因子的血漿容量為40～50 mL，未算上其中沉淀物的體積，我單位制備的冷沉淀凝血因子容量總體水平95%CI為39.36～50.10 mL，基本符合要求；盡管如此，由于GB18469-2012中對冷沉淀凝血因子的纖維蛋白原含量、Ⅷ因子含量的要求均與容量有關(guān)，而且，冷沉淀凝血因子在臨床上特別適用于難以給予大量的FFP(防止發(fā)生循環(huán)超負(fù)荷)來提供足量的凝血因子的患者，更多的是配合性輸注[5]，因此，建議成分科從分離機(jī)參數(shù)設(shè)置及工作人員的標(biāo)準(zhǔn)操作方面進(jìn)一步要求細(xì)化，確保冷沉淀凝血因子的容量在合格范圍。

《血站技術(shù)操作規(guī)程（2019版）》在6.2.5.1中指出，血液抽檢結(jié)果分析時，對由于獻(xiàn)血者個體差異引起的，且不影響血液安全性的指標(biāo)，如果檢查符合率≥75%，可認(rèn)為血液采集、制備和儲存等過程受控。個體因素對冷沉淀凝血因子質(zhì)量的影響需引起重視，在隨機(jī)抽檢的新規(guī)程組48袋冷沉淀凝血因子中，有一袋纖維蛋白原含量偏低。纖維蛋白原性質(zhì)較穩(wěn)定，只要樣本不與玻璃表面接觸，纖維蛋白原被激活變?yōu)槔w維蛋白的可能性很小，同時，纖維蛋白原含量與獻(xiàn)血者性別、年齡等個體因素有關(guān)，有研究表明[6]，在所調(diào)查的獻(xiàn)血人群中，纖維蛋白原含量在女性中高于男性，＞30歲組明顯高于＜30歲組。Ⅷ因子是不穩(wěn)定凝血因子，在獻(xiàn)血員個體因素方面，除與纖維蛋白原有上述相同分布規(guī)律外，相較于其他三種血型，B型冷沉淀凝血因子中Ⅷ因子含量最高[6]；除外個體因素，由于Ⅷ因子在體外半衰期較短，活性易喪失，制備冷沉淀凝血因子過程中任何一個環(huán)節(jié)的誤差均會影響Ⅷ因子含量：400 mL全血采集時間控制在13 min內(nèi)，采集后儲存于冷藏環(huán)境中；我單位在6 h內(nèi)完成血漿分離并速凍；制備冷沉淀凝血因子時，新鮮冰凍血漿在1～6℃水浴裝置中融化，在2～6℃環(huán)境下重離心，冷沉淀凝血因子在制備后1 h內(nèi)完成速凍，在60 min內(nèi)將中心溫度降至-30℃以下。由此可見，整個制備過程中的時間和溫度是影響冷沉淀凝血因子質(zhì)量的關(guān)鍵因素，建議優(yōu)化工作流程，盡量縮短制備時間，同時進(jìn)一步嚴(yán)格控制儲存、運(yùn)輸及分離的溫度，以及速凍、融化的溫度，以確保冷沉淀凝血因子質(zhì)量符合臨床需要。最后，本研究中使用的CS-2000i全自動凝血分析儀準(zhǔn)確性、精密性良好，對冷沉淀制品中纖維蛋白原含量與Ⅷ因子含量的檢測結(jié)果可靠[7]；在質(zhì)量抽檢時，也應(yīng)嚴(yán)控冷沉淀凝血因子的融化、取樣時間；檢測纖維蛋白原含量與Ⅷ因子含量的試劑在使用前應(yīng)在室溫平衡30 min，緩沖液、氯化鈣溶液和清洗液開瓶后使用時間不得超過8周，使用新批號的試劑時需重新定標(biāo)等。進(jìn)一步規(guī)范試驗操作，避免因此造成的檢測誤差。

在兩組冷沉淀凝血因子的纖維蛋白原含量與Ⅷ因子含量比較中，與舊規(guī)程組相比，新規(guī)程組的纖維蛋白原含量和Ⅷ因子含量的標(biāo)準(zhǔn)差均較高，這與新規(guī)程提高了冷沉淀凝血因子的血漿容量有關(guān)；與舊規(guī)程組相比，新規(guī)程組的Ⅷ因子含量較高，一方面由于Ⅷ因子不穩(wěn)定且與獻(xiàn)血員個體因素密切相關(guān)，另一方面，也與新規(guī)程施行后，我單位的冷沉淀凝血因子制備流程更優(yōu)化，人員操作更規(guī)范有關(guān)。

為了保證冷沉淀凝血因子的質(zhì)量，工作人員在制備過程中應(yīng)嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，不斷提高技術(shù)水平；同時，質(zhì)控人員在檢測時應(yīng)更加細(xì)致操作，以避免誤差。通過對480袋冷沉淀凝血因子進(jìn)行質(zhì)量抽檢，我中心按《血站技術(shù)操作規(guī)程（2019版）》制備的冷沉淀凝血因子符合GB18469-2012《全血及成分血質(zhì)量要求》的相關(guān)規(guī)定，冷沉淀凝血因子質(zhì)量安全有效。