白背葉楤木化學(xué)成分研究

尹芃程王亭 錢海珊 李紹花 李紅芳 李艷平 何紅平? 李寶晶?

（1.云南中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院， 云南 昆明650500； 2.云南中醫(yī)藥大學(xué)云南省傣醫(yī)藥與彝醫(yī)藥重點實驗室， 云南 昆明650500）

白背葉楤木Aralia chinensisLinn.var.nudaNakai 為五加科楤木屬植物［1］，在云南、甘肅、陜西、四川等省均有分布。白背葉楤木其根皮可用于治療跌打損傷、骨折、骨髓炎及深部膿瘍［2］。在傈僳族白族地區(qū)，其嫩芽可作為野菜食用，其根皮莖皮可入藥治療黃疸、水腫、消渴、痹癥、跌打損傷、帶下等癥［3］。

我國楤木屬植物約有30 多種，化學(xué)成分包括三萜皂苷、三萜、二萜、苯丙素、香豆素、黃酮等多種化合物，具有抗心肌缺血、降糖降脂、抗炎、保肝等藥理活性。龍牙楤木總皂苷可減輕心肌缺血／再灌注損傷引起的鈣穩(wěn)態(tài)失衡和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)細(xì)胞凋亡，減少心肌梗死面積［4］。中國楤木的水煎劑可有效調(diào)節(jié)糖尿病大鼠血糖，改善其脂代謝紊亂［5］。棘莖楤木可抑制小鼠耳腫脹及大鼠足腫脹并減少大鼠血清中致炎細(xì)胞因子的水平［6］。目前，白背葉楤木的化學(xué)成分研究匱乏，僅有一篇報道［7］。近年來白背葉楤木作為藥食兩用資源，在傈僳族白族地區(qū)逐步推廣種植，為填補白背葉楤木化學(xué)研究的空白，本實驗對其化學(xué)成分進行研究，從中分離得到11 個化合物。

1 材料

Bruker Avance 400 和800 MHz 型核磁共振儀（德國Bruker 公司）；Agilent 1260 infinity 液相色譜儀（美國Agilent 公司）；Hei?VAP Core HL／G3 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國Heidolph 公司）；LE204E 電子分析天平（瑞士梅特勒?托利多公司）；薄層硅膠G和柱色譜硅膠（青島海洋化工有限公司）；Sephadex LH?20 葡聚糖凝膠（美國GE 公司）；RP?C18色譜填料（美國Millipore 公司）。甲醇、三氯甲烷、乙酸（分析純，上海泰坦化學(xué)有限公司）；甲醇（色譜純，上海星可高純?nèi)軇┯邢薰荆?/p>

白背葉楤木于2019 年4 月采自云南省怒江傈僳族自治州瀘水縣魯掌鎮(zhèn)，由怒江瀘水縣河新楤木種植農(nóng)民專業(yè)合作社種植提供，憑證標(biāo)本（201904SM）存放于云南中醫(yī)藥大學(xué)云南省高校中藥民族藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究重點實驗室，由云南中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院李艷平副教授鑒定為白背葉楤木Aralia chinensisLinn.var.nudaNakai 的干燥芽苞部位。

2 提取與分離

將20 kg 干燥白背葉楤木芽苞粉碎，用70%乙醇浸提3次，合并濾液并減壓干燥得4.7 kg 乙醇提取物浸膏，浸膏用水混懸后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，濃縮干燥后得到正丁醇部位1.75 kg。正丁醇部位經(jīng)100～200 目硅膠柱層析，以氯仿?甲醇?水（1∶0∶0、95∶15∶0、9∶1∶0、85∶15∶0.1、8∶2∶0.2、7∶3∶0.5、5∶5∶0.8）梯度洗脫，薄層色譜板檢測合并得到7 個流分Fr.A～Fr.G。非皂苷類成分主要集中在流分Fr.A～Fr.D，皂苷類成分主要集中在流分Fr.E～Fr.G。

Fr.A 經(jīng)ODS 反相色譜柱甲醇?水（1∶9～1∶0）梯度洗脫，薄層色譜板檢測合并得到8 個亞流分Fr.A1～Fr.A8，F(xiàn)r.A4 經(jīng)Sephadex LH?20 凝膠柱甲醇洗脫后得到化合物10（4 mg）。Fr.A6 經(jīng)重結(jié)晶得到化合物11（6 mg）。Fr.B 經(jīng)ODS 反相色譜柱甲醇?水（1∶9～1∶0）梯度洗脫，薄層色譜板檢測合并得到12 個亞流分Fr.B1～Fr.B12，F(xiàn)r.B2經(jīng)Sephadex LH?20 凝膠柱甲醇洗脫后得到化合物4（11 mg）。Fr.B4 經(jīng)半制備HPLC 甲醇?水（6∶4）等度洗脫得到化合物1（5 mg，254 nm，tR＝14.1 min）。Fr.B5 經(jīng)半制備HPLC 甲醇?水（55∶45）等度洗脫得到化合物2（3.5 mg，254 nm，tR＝18.5 min）和化合物3（5 mg，254 nm，tR＝20.5 min）。Fr.B7 經(jīng)Sephadex LH?20 凝膠柱甲醇洗脫結(jié)晶得到化合物6（7 mg）。Fr.C 經(jīng)ODS 反相色譜柱甲醇?水（1∶9～1∶0）梯度洗脫，薄層色譜板檢測合并得到9 個亞流分Fr.C1～Fr.C9，F(xiàn)r.C3 經(jīng)Sephadex LH?20 凝膠柱氯仿?甲醇（55∶45）洗脫后得到化合物5（11 mg）。Fr.C4 經(jīng)重結(jié)晶得到化合物7（14 mg）。Fr.C7 經(jīng)半制備HPLC甲醇?水（1∶1）等度洗脫得到化合物8（6 mg，360 nm，tR＝10.2 min）。Fr.D 經(jīng)ODS 反相色譜柱甲醇?水（1∶9～1∶0）梯度洗脫，薄層色譜板檢測合并得到5 個亞流分Fr.D1～Fr.D5，F(xiàn)r.D3 經(jīng)Sephadex LH?20 凝膠柱甲醇?水（4∶1）洗脫結(jié)晶得到化合物9（17 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合 物1：淡黃色粉末，C11H14O3，ESI?MSm／z：195.1 ［M＋H］＋。1H?NMR（800 MHz，CD3OD）δ：7.01（2H，d，J＝8.5 Hz，H?2′，6′），6.69（2H，d，J＝8.5 Hz，H?3′，5′），4.09（2H，q，J＝7.1 Hz，H?4），2.81（2H，t，J＝7.6 Hz，H?3），2.56（2H，t，J＝7.6 Hz，H?2），1.20（3H，t，J＝7.1 Hz，H?5）；13C?NMR（200 MHz，CD3OD）δ：174.9（C?1），156.8（C?4′），132.7（C?1′），130.2（C?2′，6′），116.1（C?3′，5′），61.4（C?4），37.3（C?2），31.2（C?3），14.5（C?5）。以上數(shù)據(jù)與文獻［8］ 報道一致，故鑒定化合物1 為對羥基苯丙酸乙酯。

化合 物2：淡黃色粉末，C11H12O3，ESI?MSm／z：193.3 ［M＋H］＋。1H?NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.57（2H，d，J＝8.7 Hz，H?2，6），6.85（1H，d，J＝12.8 Hz，H?7），6.75（2H，d，J＝8.7 Hz，H?3，5），5.75（1H，d，J＝12.8 Hz，H?8），4.15（1H，q，J＝7.2 Hz，H?1′），1.25（3H，t，J＝7.2 Hz，H?2′）；13C?NMR（100 MHz，CD3OD）δ：168.6（C?9），159.9（C?4），144.6（C?7），133.4（C?2，6），127.7（C?1），116.9（C?8），115.8（C?3，5），61.2（C?1′），14.4（C?2′）。以上數(shù)據(jù)與文獻［9］ 報道一致，故鑒定化合物2 為順式對羥基肉桂酸乙酯。

化合物3：白色粉末，C11H12O3，ESI?MSm／z：193.3 ［M＋H］＋。1H?NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.60（1H，d，J＝16.0 Hz，H?7），7.45（2H，d，J＝8.6 Hz，H?2，6），6.81（2H，d，J＝8.6 Hz，H?3，5），6.31（1H，d，J＝16.0 Hz，H?8），4.22（2H，q，J＝7.1 Hz，H?1′），1.31（3H，t，J＝7.1 Hz，H?2′）；13C?NMR（100 MHz，CD3OD）δ：169.4（C?9），161.2（C?4），146.4（C?7），131.1（C?2，6），127.1（C?1），116.9（C ?8），115.3（C?3，5），61.5（C?1′），14.6（C?2′）。以上數(shù)據(jù)與文獻［9］ 報道一致，故鑒定化合物3 為反式對羥基肉桂酸乙酯。

化合物4：淡黃色針晶（甲醇），C9H8O4，ESI?MSm／z：181.1 ［M＋H］＋。1H?NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.53（1H，d，J＝15.9 Hz，H?7），7.04（1H，d，J＝2.0 Hz，H?2），6.93（1H，dd，J＝8.2，2.0 Hz，H?6），6.80（1H，d，J＝8.2 Hz，H?5），6.22（1H，d，J＝15.9 Hz，H?8）；13C?NMR（100 MHz，CD3OD）δ：170.5（C?9），149.6（C?4），147.1（C?7），147.0（C?3），128.0（C?1），124.0（C?6），116.6（C?5），115.9（C?8），115.8（C?2）。以上數(shù)據(jù)與文獻［10］ 報道一致，故鑒定化合物4為咖啡酸。

化合物5：黃色針晶（甲醇），C9H6O4，ESI?MSm／z：179.1 ［M＋Na］＋。1H?NMR（400 MHz，CDCl3）δ：7.69（1H，d，J＝9.4 Hz，H?4），6.94（1H，s，H?5），6.65（1H，s，H?8），6.20（1H，d，J＝9.4 Hz，H?3）；13C?NMR（100 MHz，CDCl3）δ：164.5（C?2），152.2（C?7），150.7（C?9），146.3（C?4），144.8（C?6），131.5（C?5），117.0（C?10），113.0（C?3），111.1（C?8）。以上數(shù)據(jù)與文獻［11］報道一致，故鑒定化合物5 為6，7?二羥基香豆素。

化合物6：白色粒狀結(jié)晶（甲醇），C7H6O4，ESI?MSm／z：155.1 ［M＋H］＋。1H?NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.43（1H，d，J＝2.0 Hz，H?2），7.41（1H，dd，J＝2.0，8.5 Hz，H?6），6.79（1H，d，J＝8.5 Hz，H?5）；13C?NMR（100 MHz，CD3OD）δ：170.4（C?1′），151.7（C?4），146.2（C?3），124.0（C?1），123.3（C?6），117.9（C?5），115.9（C?2）。以上數(shù)據(jù)與文獻［12］ 報道一致，故鑒定化合物6為3，4?二羥基苯甲酸。

化合物7：黃色粉末，C15H10O7，ESI?MSm／z：303.2 ［M＋Na］＋。1H?NMR（400 MHz，C5D5N）δ：8.64（1H，d，J＝2.2 Hz，H?2′），8.13（1H，dd，J＝8.4，2.2 Hz，H?6′），7.41（1H，d，J＝8.4 Hz，H?5′），6.78（1H，d，J＝2.2 Hz，H?8），6.74（1H，d，J＝2.2 Hz，H?6）；13C?NMR（100 MHz，C5D5N）δ：177.6（C?4），165.8（C?7），162.7（C?5），157.8（C?9），148.0（C?4′），147.4（C?2，3′），138.2（C?3），123.3（C?1′），121.4（C?6′），116.9（C?5′，2′），104.8（C?10），99.5（C?6），94.6（C?8）。以上數(shù)據(jù)與文獻［13］ 報道一致，故鑒定化合物7 為槲皮素。

化合物8：黃色針晶（甲醇），C15H10O6，ESI?MSm／z：287.1 ［M＋Na］＋。1H?NMR（400 MHz，CDCl3）δ：8.04（2H，d，J＝8.9 Hz，H?2′，6′），6.92（2H，d，J＝8.9 Hz，H?3′，5′），6.43（1H，d，J＝2.0 Hz，H?8），6.18（1H，d，J＝2.0 Hz，H?6）；13C?NMR（100 MHz，CDCl3）δ：175.9（C?4），164.5（C?7），161.2（C?9），159.7（C?4′），156.7（C?5），147.3（C?2），135.7（C?3），129.9（C?2′，6′），122.1（C?1′），115.9（C?3′，5′），103.5（C?10），98.7（C?6），93.9（C?8）。以上數(shù)據(jù)與文獻［14］ 報道一致，故鑒定化合物8 為山柰酚。

化合物9：黃色針晶（甲醇），C21H20O12，ESI?MSm／z：465.3 ［M＋H］＋。1H?NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.71（1H，d，J＝2.2 Hz，H?2′），7.58（1H，dd，J＝2.2，8.5 Hz，H?6′），6.87（1H，d，J＝8.5 Hz，H?5′），6.39（1H，d，J＝2.4 Hz，H?8），6.20（1H，d，J＝2.4 Hz，H?6），5.24（1H，d，J＝7.4 Hz，H?1″），3.32～3.73（6H，m，H?2′～6′）；13C?NMR（100 MHz，CD3OD）δ：179.5（C?4），166.0（C?7），163.0（C?5），159.1（C?2），158.5（C?9），149.8（C?4′），145.9（C?3′），135.6（C?3），123.2（C?1′），123.1（C?6′），117.6（C?5′），116.0（C?2′），105.7（C?10），104.4（C?1″），99.9（C?6），94.7（C?8），78.4（C?3″），78.1（C?5″），75.7（C?2″），71.2（C?4″），62.6（C?6″）。以上數(shù)據(jù)與文獻［15］ 報道一致，故鑒定化合物9 為異槲皮苷。

化合物10：白色粉末，C28H58O，ESI?MSm／z：411.7 ［M＋H］＋。1H?NMR（400 MHz，CDCl3）δ：3.62（2H，t，J＝6.6 Hz，H?1），1.55（2H，m，H?27），1.23（52H，brs，26×CH2），0.86（3H，t，J＝6.8 Hz，H?28）；13C?NMR（100 MHz，CDCl3）δ：63.3（C?1），33.0（C?2），32.2（C?26），29.9～29.5（22×CH2），25.9（C?3），22.9（C?27），14.3（C?28）。以上數(shù)據(jù)與文獻［16］ 報道一致，故鑒定化合物10 為二十八烷醇。

化合物11：白色粉末，C16H32O2，ESI?MSm／z：257.4 ［M＋H］＋。1H?NMR（400 MHz，CDCl3）δ：2.18（2H，t，J＝7.5 Hz，H?2），1.46（2H，m，H?3），1.19（24H，m，12×CH2），0.86（3H，t，J＝6.9 Hz，H?16）；13C?NMR（100 MHz，CDCl3）δ：179.5（C?1），34.1（C?2），32.1（C?3），29.9～22.9（12×CH2），14.3（C?16）。以上數(shù)據(jù)與文獻［17］ 報道一致，故鑒定化合物11 為十六烷酸。

4 討論

通過ODS、Sephadex LH?20 凝膠柱、硅膠柱色譜及半制備型HPLC 等方法對白背葉楤木化學(xué)成分進行研究，分離得到11 個非皂苷類化合物，11 個化合物均為首次從該植物中分離得到，化合物1～3、6、9、10 為首次從該屬植物中分離得到。其中對羥基肉桂酸乙酯（化合物2）表現(xiàn)可逆競爭型抑制胰脂肪酶作用，具有一定降脂活性，有望在降脂功能食品中得到應(yīng)用［18］。二十八烷醇（化合物10）與維生素K2 聯(lián)合可以恢復(fù)他汀類藥物破壞前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶／kexin 9 型（PCSK9）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL?C）之間的正相關(guān)［19］。本研究所得化合物可進一步進行藥理活性研究，為白背葉楤木的開發(fā)利用提供理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。