蘆薈火龍果綠茶沖劑抗氧化功能研究

申開澤 萬慶家 熊宇 張應龍 劉莎

摘要 [目的]通過動物試驗和人體試食試驗，研究庫拉索蘆薈全葉脫色凍干粉、紅心火龍果凍干粉、綠茶提取物、VC復配制成的蘆薈火龍果綠茶沖劑的抗氧化作用。[方法]動物試驗設4個處理組（對照組和0.67、1.33、4.00 g/kg 3個劑量組），給予小鼠連續(xù)灌胃30 d后進行各指標測定。人體試食試驗采用自身與組間2種對照設計，106名志愿者被隨機平均分成試食組和安慰劑對照組。[結(jié)果]受試物顯著提高動物血清SOD活性和血中GSH含量（P<0.05）。

人體試食組血清SOD和GSH-Px活性分別較試食前提高9.32%、9.29%;與對照組試食后及自身試食前比較，SOD和GSH-Px活性均有顯著性差異（P<0.05）。[結(jié)論]結(jié)合動物試驗和人體試食試驗綜合判定，蘆薈火龍果綠茶沖劑具有抗氧化功能。

關(guān)鍵詞 庫拉索蘆薈;紅心火龍果;綠茶提取物;維生素C;抗氧化

中圖分類號 TS 278文獻標識碼 A

文章編號 0517-6611（2022）04-0169-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2022.04.044

開放科學（資源服務）標識碼（OSID）：

Antioxidant Function of Aloe-Pitaya-Green Tea Granules

SHEN Kai-ze1，2，3，WAN Qing-jia2，XIONG Yu1，3 et al （1.College of Agronomy and Life Sciences，Zhaotong University，Zhaotong，Yunnan 657000;2.Yunnan Evergreen Biological Co.，Ltd.，Yuxi，Yunnan 653300;3.Research Center for Plateau Characteristic Agriculture in Northeast Yunnan，Zhaotong University，Zhaotong，Yunnan 657000）

Abstract [Objective]To investigate the antioxidant effect of aloe-pitaya-green tea granules （AHGG） composed of Aloe vera whole-leaf freeze-dried powder （decolorized with activated carbon to remove anthraquinones before lyophilization），red pitaya （Hylocereus polyrhizus） fruit freeze-dried powder，green tea extract and VC by animal experiment and human trial.[Method]In the animal experiment，forty SPF mice were divided into four groups （control and 0.67，1.33，4.00 g/kg treatment groups）.The mice were given continuous gavage for 30 days. In the human trial，106 volunteers were averagely randomized into 2 groups：Test and Placebo.[Result]The result showed that the test substance significantly increased the SOD activity and the GSH content in blood （P<0.05）.The activities of serum SOD and GSH-Px in the human test group were increased by 9.32% and 9.29% respectively;compared with the control group after food test and before self test，there were significant differences in the activities of SOD and GSH-Px （P<0.05）.[Conclusion] The above results manifested that AHGG existed antioxidant function.

Key words Aloe vera;Red pitaya （Hylocereus polyrhizus）;Green tea extract;Vitamin C;Antioxidant activity

作者簡介 申開澤（1987—），男，云南鎮(zhèn)雄人，工程師，碩士，從事高原特色農(nóng)產(chǎn)品精深加工與利用研究。*通信作者，高級工程師，碩士，從事生物資源開發(fā)與利用研究。

收稿日期 2021-09-30

近年來，隨著人們對美好生活的向往目標逐年提高，人們對具有抗氧化功能食品的需求也與日俱增[1]。多種天然抗氧化劑復配有助于機體保持良好的抗氧化平衡狀態(tài)，因此是研究抗氧化功能食品的重要方向[2]。植物中許多天然抗氧化活性物質(zhì)在抗衰老、抗炎、保護肝臟等方面發(fā)揮著重要作用[3]。庫拉索蘆薈（Aloe vera）含多糖、蒽醌、蒽酮、色酮、黃酮等功能成分，具有抗氧化、保護化學性肝損傷、調(diào)節(jié)血糖、修復胃黏膜、抗炎等多種功能[4-5]，是我國可用于保健食品的2個蘆薈品種之一，也是唯一可用于普通食品的蘆薈品種。紅心火龍果（Hylocereus polyrhizus）[6]、綠茶[7]、VC[8]等是抗氧化功能明確的功能原料?；诖?，以庫拉索蘆薈全葉脫色凍干粉、紅心火龍果凍干粉、綠茶提取物、VC為主要原料，輔以結(jié)晶果糖、羅漢果甜苷開發(fā)制成保健食品蘆薈火龍果綠茶沖劑。該研究參照原國家食品藥品監(jiān)督管理局頒布的國食藥監(jiān)?；?012〕107號文件中的《抗氧化功能評價方法》，先后通過動物試驗和人體試食試驗綜合驗證該復配物的抗氧化功能。

1 材料與方法

1.1 動物試驗

1.1.1 受試樣品。

蘆薈火龍果綠茶沖劑，人口服推薦量為1次/d，每次8 g，折合每日服用庫拉索蘆薈全葉脫色凍干粉1.5 g，紅心火龍果凍干粉1.5 g，茶多酚0.3 g，VC 0.1 g。

1.1.2 實驗動物。SPF級ICR雄性老齡小鼠40只（8～10月齡），購買自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，生產(chǎn)許可證號：SCXK（湘）2011-0003，使用許可證號：SYXK（湘）2015-0012號。在屏障環(huán)境中進行試驗，試驗期間溫度控制在21～24 ℃，相對濕度控制在52%～58%。

1.1.3 主要儀器與試劑。

AL204電子天平，梅特勒-托利多儀器有限公司;離心機，湖南湘儀實驗儀器有限公司;UV1700紫外可見分光光度計，上海奧析科學儀器有限公司。MDA、蛋白質(zhì)羰基、SOD、GSH測試盒：上海恒遠生物科技有限公司。

1.1.4 劑量分組及受試物給予。

按人體推薦量的5、10、30倍分別設0.67、1.33、4.00 g/kg 3個劑量組，并設1個空白對照組。分別取樣品6.70、13.30、40.00 g用蒸餾水溶解并定容至200 mL即得樣品組，對照組灌胃等體積蒸餾水。

1.1.5 試驗方法。試驗前，將試驗小鼠稱重后，各采20 pL尾尖血，用蒸餾水溶解至0.5 mL制成4%溶血液，測定MDA含量水平。按MDA水平將小鼠分為3個劑量組和1個對照組，分別給予受試動物灌胃，持續(xù)30 d，1次/d，每次按20 mL/kg進行灌胃。第31天，采尾尖血測定4%溶血液MDA含量、GSH含量;摘眼球采血離心，取血清測定蛋白質(zhì)羰基含量和SOD活性。

1.1.6 試驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計與結(jié)果判定。

運用Excel和SPSS進行統(tǒng)計分析。MDA含量、蛋白質(zhì)羰基含量、SOD活力、GSH含量4項指標中3項陽性，即可判定試驗結(jié)果陽性。

1.2 人體試食試驗

1.2.1 受試樣品。一個樣品同“1.1.1”，另1個為安慰劑（以微晶纖維素、麥芽糊精、結(jié)晶果糖、低聚果糖、羅漢果粉、莧菜紅、檸檬、亮藍和食用香精按一定配比制成，在包裝、外觀、色澤及口感上與試驗樣品基本一致），隨機編號為1號、2號，人口服1次/d，每次1袋，用200 mL溫水沖服。

1.2.2 主要儀器及試劑。

KX-21N全自動三分類血液分析儀，日本希森美康Sysmex公司;Modular P全自動生化分析儀，德國Roche公司;MEK-5216K型血球計數(shù)儀，日本光電工業(yè)株式會社;CA尿液分析儀，德國SIEMENS公司。SOD試劑盒、MDA試劑盒、GSH-Px試劑盒，上海恒遠生物科技有限公司。

1.2.3 志愿者選擇。

納入標準：18～65歲，身體健康，狀況良好，無明顯心、肝、肺、腎、腦和血液疾患，志愿受試保證配合的人群，無長期服藥史。排除標準：對該產(chǎn)品過敏者;妊娠和哺乳期婦女;合并有心、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴重疾病患者;未按規(guī)定食用受試樣品，無法判定功效或資料不全影響功效或安全性判斷者;短期內(nèi)服用與受試功能有關(guān)物品而影響對結(jié)果的判斷者。

1.2.4 試驗設計與分組。

按知情自愿原則招募到符合標準志愿者106名，按MDA、SOD、GSH-Px水平，并盡可能考慮年齡、性別、生活飲食習慣等影響結(jié)果的主要因素，將志愿者隨機分為2組，即試食組和對照組，進行均衡性檢驗以保證組間可比性。

1.2.5 試驗方法。

采用雙盲法進行試驗。采用自身和組間2種對照設計。對照組和試食組按照服用方法分別食用安慰劑和試驗樣品，持續(xù)90 d。試驗期間，不改變志愿者的生活方式和飲食習慣。

1.2.6 觀察指標。在試驗開始和結(jié)束時各檢測1次。安全性指標：試食前詢問志愿者的健康狀況，了解其精神、睡眠、飲食、大小便等情況，并測定體重、血壓、心率等;血、尿、便常規(guī)檢查，肝腎功能檢查，胸透、心電圖、腹部B超檢查;不良反應觀察。功效指標：試驗前后MDA含量變化及其下降百分率;SOD活性變化及其升高百分率;GSH-Px活性變化及升高百分率。

1.2.7 數(shù)據(jù)處理和結(jié)果判定。

自身對照資料可以采用配對t檢驗，2組均數(shù)比較采用成組t檢驗，后者需進行方差齊性檢驗，對非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)進行適當?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足正態(tài)方差齊后，用轉(zhuǎn)換的數(shù)據(jù)進行t檢驗;若轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)仍不能滿足正態(tài)方差齊要求，改用t’檢驗或秩和檢驗;變異系數(shù)太大（如CV>50%）的資料應用秩和檢驗。在試驗前組間比較差異無顯著性的前提下，可進行試驗后組間比較。各功效指標試驗前后自身比較和試食后組間比較均有統(tǒng)計學意義，方可判定為陽性。MDA含量、SOD活性、GSH-Px活性3項指標中任2項陽性，可判定試驗結(jié)果陽性。

2 結(jié)果與分析

2.1 動物試驗結(jié)果

2.1.1 對老齡小鼠體重的影響。試驗結(jié)果顯示（表1），各劑量組受試小鼠體重及增重在試驗初始、中期、末期與對照組比較，除高劑量組中期體重外，其余均較對照有所增加，但與對照組相比均無顯著差異（P>0.05），對照組增重3.94 g，低、中、高劑量組增重3.67～4.88 g，差異不大。由此可知，受試樣品對老齡小鼠體重無明顯影響。

2.1.2 對老齡小鼠各檢測指標的影響。

由表2可知，與對照組相比，各受試劑量組小鼠在持續(xù)30 d灌胃受試樣品后，其溶血液中MDA含量均有所下降，其中，高劑量組與對照組差異顯著（P<0.05），表明受試樣品能顯著降低老齡小鼠血清中的過氧化脂質(zhì)含量。各劑量組小鼠血清SOD活性和全血中的GSH含量均高于對照組，且高劑量組與對照組差異顯著（P<0.05），表明樣品能提高老齡小鼠的SOD活性，提高血液中GSH含量。但受試樣品各劑量組對老齡小鼠血清中的蛋白質(zhì)羰基含量無顯著影響（P>0.05）。

2.2 人體試食試驗結(jié)果

2.2.1 一般情況。

雙盲法觀察結(jié)束揭曉1號樣品為安慰劑，2號樣品為蘆薈火龍果綠茶沖劑。2組均為53例。對照組年齡（50.81±6.25）歲，男女比為18∶35;試食組年齡（51.17±5.45）歲，男女比為18∶35。試驗期間，2組各篩除3例因間斷服用樣品而不能判斷效果的受試者，2組的最后有效試驗人數(shù)均為50例，脫失率均為5.66%。

2.2.2 安全性指標。

試驗前后，試食組和對照組各項安全指標均正常，未見與試驗樣品有關(guān)的不良反應。

2.2.3 功效指標。由表3～5可知，試食前，試食組和對照組人群的血清MDA、SOD、GSH-Px水平無顯著差異（P>0.05），說明2組間具有可比性。試食后，試食組的MDA含量平均下降2.89%，但與對照組相比無顯著差異;而血清SOD活性和GSH-Px活性較試食前均顯著升高（P<0.05），升高率分別為9.32%和9.29%，且與對照組試食后也呈顯著差異（P<0.05）。這表明按照既定的服用方法食用該產(chǎn)品90 d，試驗樣品能顯著提高受試者血清中的SOD和GSH-Px活性，對人體有抗氧化作用。

3 結(jié)論與討論

動物試驗結(jié)果表明，經(jīng)口灌胃給予30 d，高劑量組老齡小鼠血中MDA含量顯著降低（P<0.05），血清SOD活性和血中GSH含量均顯著提高（P<0.05），3項指標陽性，可判定蘆薈火龍果綠茶沖劑對老齡小鼠有抗氧化作用。進一步開展的人體試食試驗結(jié)果表明，連續(xù)90 d，按1次/d食用8 g蘆薈火龍果綠茶沖劑，受試人群各安全性指標均在正常范圍，其血清SOD活性、GSH-px活性分別較試食前提高9.32%、9.29%，與自身試食前及對照組試食后比較均呈顯著差異（P<0.05），2項試驗指標結(jié)果陽性，從而進一步驗證了蘆薈火龍果綠茶沖劑的抗氧化功能。

有研究表明，不同抗氧化劑協(xié)同有助于減輕或避免單一抗氧化劑負荷過重而造成傷害，且比單一抗氧化劑有更強的抗氧化作用[9-10]。該研究采用庫拉索蘆薈全葉脫色凍干粉、紅心火龍果凍干粉、綠茶提取物3種植物原料并添加VC開發(fā)出具有抗氧化功能的保健食品。庫拉索蘆薈鮮葉皮與凝膠肉之間含大量蒽醌類物質(zhì)[5]，該研究使用的庫拉索蘆薈全葉脫色凍干粉系庫拉索全葉汁經(jīng)活性炭脫色除去蒽醌而制成，以多糖作為標志性成分，而多糖是庫拉索蘆薈抗氧化功能的重要物質(zhì)基礎(chǔ)[11-12]。紅心火龍果因含有多糖、甜菜紅素、多酚及黃酮等物質(zhì)而表現(xiàn)出較好的抗氧化活性[13-15]。該研究使用的紅心火龍果凍干粉系紅心火龍果經(jīng)去皮、搗漿、離心去籽、冷凍干燥、粉碎等工藝制成，最大程度地保留了其

中的營養(yǎng)成分，有利于其功能成分綜合發(fā)揮抗氧化作用。綠茶中的茶多酚、多糖、多肽等都具有抗氧化活性，其中尤以茶多酚活性突出[16-18]，該研究使用的綠茶提取物即以茶多酚為功能和標志性成分。VC的使用量根據(jù)中國居民膳食指南推薦為100 mg/d[19]，在其中既作為功效成分發(fā)揮抗氧化功能，又作為風味調(diào)味劑豐富和改善口感。

該研究按照保健食品抗氧化功能評價方法，先后采用動物功能試驗和人體試食試驗，綜合驗證了蘆薈火龍果綠茶沖劑具有抗氧化功能。受試樣品基于多種功能物質(zhì)協(xié)同作用的理論進行復配，未來可進一步探究受試樣品中庫拉索蘆薈、紅心火龍果、茶多酚和VC協(xié)同發(fā)揮抗氧化作用的內(nèi)在機理，并開展多中心、大樣本的隨機對照臨床試驗，以對其抗氧化功能進行更深入的研究和更廣泛的驗證。

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3410500338263