王金玉 張茂 劉鵬程

[摘要]目的：系統(tǒng)評(píng)價(jià)結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展與包含WW的氧化還原酶結(jié)構(gòu)域（WWOX）表達(dá)的關(guān)系及其對(duì)腫瘤的影響。方法：檢索Embase、中國(guó)知網(wǎng)、PubMed、萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)以及維普數(shù)據(jù)庫(kù)中關(guān)于結(jié)直腸癌與WWOX表達(dá)關(guān)系的對(duì)照研究的文獻(xiàn)，采用95%置信區(qū)間（CI）和優(yōu)勢(shì)比（OR）為效應(yīng)指標(biāo)，應(yīng)用RevMan.5.3軟件對(duì)符合條件的結(jié)果進(jìn)行Meta分析。結(jié)果：最終納入5篇符合條件的文獻(xiàn)，Meta分析結(jié)果示：WWOX基因在結(jié)直腸癌與癌旁組織中表達(dá)差異（OR=0.11，95%CI0.07～0.17，P<0.01），有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中WWOX基因的表達(dá)差異（OR=0.19，95%CI.0.12～0.30，P<0.01），不同分化程度中WWOX基因表達(dá)差異（OR=4.63，95%CI.2.93～7.32，P<0.01）。結(jié)論：在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展中，可認(rèn)定有WWOX基因的參與，歸納分析WWOX基因與結(jié)直腸癌的相關(guān)性，有助于更好地在臨床中診治及預(yù)防結(jié)直腸癌。

[關(guān)鍵詞]WWOX基因;結(jié)直腸癌;Meta分析：相關(guān)性

[中圖分類號(hào)]R735.3+7.

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A.

[文章編號(hào)]2096-5249（2022）03-0007-04

在全球范圍內(nèi)，結(jié)直腸癌是癌癥相關(guān)死亡的主要原因之一，其在男性中死亡率排名第二，女性中排名第三[1]。在我國(guó)，近幾年中結(jié)直腸癌的發(fā)病率也在逐漸上升，原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌的新療法已經(jīng)出現(xiàn)，為患者提供了更多的選擇;這些治療包括腹腔鏡手術(shù)治療原發(fā)性疾病、更積極地切除轉(zhuǎn)移性疾?。ㄈ绺魏头无D(zhuǎn)移）、直腸癌放療以及新輔助和姑息性化療。然而，雖說(shuō)上述治療方案在結(jié)直腸癌的臨床治療中是較為有效的措施，可延長(zhǎng)生存期，使患者的生存質(zhì)量有一定程度改善，但仍然無(wú)法提高患者的5年生存率。

含有人類WW結(jié)構(gòu)域的氧化還原酶（WWOX）基因位點(diǎn)位于16號(hào)染色體上的一個(gè)常見(jiàn)脆性位點(diǎn)（CFS）FRA16D（16q23.1-q23.2）。該基因跨越1.1Mbp，是人類基因組中最長(zhǎng)的基因之一。其由兩個(gè)N端WW域和一個(gè)C端短鏈脫氫酶/還原酶域組成。第一個(gè)WW結(jié)構(gòu)域（WW1）通過(guò)與富含脯氨酸的PPXY（P是脯氨酸，X是任何氨基酸，Y是酪氨酸）基序的伙伴蛋白結(jié)合而參與蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，并充當(dāng)調(diào)節(jié)其定位、反式激活和穩(wěn)定性的銜接蛋白，從而影響正常生理和發(fā)育。WWOX共包含有9個(gè)外顯子，其在基因庫(kù)中的編號(hào)為51741。WWOX基因的WW功能域有1～4外顯子編碼，外顯子5～8編碼的則是位于WWOX中心部位的氧化還原酶功能域。其在2000年發(fā)現(xiàn)后不久，WWOX就被譽(yù)為腫瘤抑制基因。在隨后幾年的研究中，這一功能得到了無(wú)可爭(zhēng)議的證實(shí)。大多數(shù)腫瘤表現(xiàn)出高雜合性丟失率和WWOX表達(dá)降低。新近的研究發(fā)現(xiàn)在HCT116結(jié)腸癌細(xì)胞系的FRA16D處發(fā)現(xiàn)了一組復(fù)雜的缺失，負(fù)責(zé)去除WWOX基因的片段，證明WWOX也參與結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展。

因此，為進(jìn)一步了解結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展與抑癌基因WWOX表達(dá)程度的相關(guān)性，本文將對(duì)既往關(guān)于WWOX基因與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展關(guān)系相關(guān)文章的研究結(jié)果采用Meta分析進(jìn)行定量分析，為診斷、治療結(jié)直腸癌提供新的方法。

1材料與方法

1.1資料來(lái)源

檢索Embase、PubMed、中國(guó)知網(wǎng)、萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)以及維普數(shù)據(jù)庫(kù)中有關(guān)WWOX基因與結(jié)直腸癌關(guān)系的中外文獻(xiàn)。中文檢索詞為：“WW的氧化還原酶結(jié)構(gòu)域”或“WWOX”，“結(jié)直腸癌”或“結(jié)腸癌”或“直腸癌”或“直腸腺癌”或“乙狀結(jié)腸癌”。英文檢索詞為：“OxidoreductasedomaincontainingWW”O(jiān)R“WWdomain containing oxidoreductase”O(jiān)R“WWOX”O(jiān)R“Coloncancer”O(jiān)R“colorectal cancer、rectal can-cer”O(jiān)R“Adenocarcinoma of rectum”O(jiān)R“Sigmoid colon cancer”O(jiān)R“CRC”。由兩位研究員對(duì)檢索結(jié)果進(jìn)行評(píng)閱，第三方僅在不確定或存在爭(zhēng)議時(shí)進(jìn)行評(píng)定。

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）具有完整臨床病理資料，病理回報(bào)為結(jié)直腸癌，無(wú)放化療于術(shù)前;（2）以病例對(duì)照研究為研究方法;（3）以中、英文文獻(xiàn)為研究對(duì)象;（4）能夠提供陽(yáng)性表達(dá)的例數(shù)的原始數(shù)據(jù);（5）各篇文獻(xiàn)均是關(guān)于結(jié)直腸癌與WWOX基因表達(dá)之間的研究。

排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）綜述、動(dòng)物研究、評(píng)述類文獻(xiàn)等;（2）文獻(xiàn)未能獲取全文;（3）無(wú)法提供完整數(shù)據(jù)以及重復(fù)發(fā)表的數(shù)據(jù);（4）未設(shè)立對(duì)照組的研究。

1.2數(shù)據(jù)提取

基于上述標(biāo)準(zhǔn)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行提取，內(nèi)容包括：第一作者姓名、發(fā)表時(shí)間、國(guó)籍、研究例數(shù)、WWOX基因在結(jié)直腸癌組織及癌旁組織中陽(yáng)性表達(dá)例數(shù)，有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時(shí)WWOX表達(dá)例數(shù)以及不同分化程度下WWOX基因表達(dá)陽(yáng)性例數(shù)。其中，兩名研究員對(duì)所納入的數(shù)據(jù)進(jìn)行提取，若兩名研究員對(duì)所提取的數(shù)據(jù)意見(jiàn)不同時(shí)，由第三名研究員共同討論決定。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

采用RevMan5.3軟件，對(duì)結(jié)直腸癌及WWOX基因表達(dá)的關(guān)系進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析以優(yōu)勢(shì)比及其95%可信區(qū)間的二分變量作為效應(yīng)量。采用固定效應(yīng)模型，存在同質(zhì)性于各篇文獻(xiàn)之間（P>0.05，I2<50%）。用隨機(jī)效應(yīng)模型：文獻(xiàn)之間具有異質(zhì)性（P<0.05，I2≥50%），即對(duì)根據(jù)臨床判斷有合并意義，可進(jìn)行合并的數(shù)據(jù)進(jìn)行合并。尋找統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性來(lái)源則借用敏感性分析來(lái)評(píng)價(jià)結(jié)果的穩(wěn)定性實(shí)現(xiàn)。如無(wú)法判斷，則采用描述性分析。森林圖展現(xiàn)Meta分析的結(jié)果，文獻(xiàn)潛在的發(fā)表偏倚通過(guò)漏斗圖進(jìn)行觀察（由RevMan5.3軟件生成）。

2結(jié)果

檢索數(shù)據(jù)庫(kù)，通過(guò)閱讀題目、摘要、去除重復(fù)文獻(xiàn)等方法將檢索到的70篇文獻(xiàn)去除59篇，后排除6篇未提供詳細(xì)數(shù)據(jù)的文獻(xiàn)，最終納入Meta分析的有5篇[2-6]，納入文獻(xiàn)特征見(jiàn)表1，所收集的文獻(xiàn)研究均出自中國(guó)。

2.1WWOX基因與結(jié)直腸癌組織及癌旁組織相關(guān)性

分析WWOX表達(dá)在結(jié)直腸癌及癌旁組織中的差異，納入的5篇文獻(xiàn)中均有報(bào)告，其中結(jié)直腸癌組織的陽(yáng)性表達(dá)共141例，癌旁組織中有193例陽(yáng)性表達(dá)，分析結(jié)果提示無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性（P=0.66，I2=0）。Meta分析采取固定效應(yīng)模型進(jìn)行。結(jié)果顯示，在結(jié)直腸癌組織與癌旁組織WWOX表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（OR=0.11，95%CI0.07～0.17，P<0.01），見(jiàn)圖1。

2.2WWOX表達(dá)情況與結(jié)直腸癌分化程度關(guān)系的分析結(jié)果

納入的5篇文獻(xiàn)均有WWOX表達(dá)與結(jié)直腸癌分化關(guān)系，其中111例患者為高/中分化，30例患者為低分化。不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性（P=0.94，I2=0）。采用固定效應(yīng)模型，分析結(jié)果示（OR=4.63，95%CI2.93～7.32，P<0.01），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)圖2。

2.3WWOX表達(dá)情況與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系的分析結(jié)果

納入的5篇文獻(xiàn)均有WWOX表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移共32例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的共109例。無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性存在（P=0.99，I2=0）。采用固定效應(yīng)模型，結(jié)果顯示各組件差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（OR=0.19，95%CI0.12～0.30，P<0.01），見(jiàn)圖3。

2.4發(fā)表偏倚

對(duì)納入的所有文獻(xiàn)中，通過(guò)繪制漏斗圖進(jìn)而了解本冊(cè)Meta分析有無(wú)發(fā)表偏倚，由圖可知，所繪制的圖形基本對(duì)稱（采用Revman5.3軟件繪制），說(shuō)明無(wú)明顯發(fā)表偏倚，見(jiàn)圖4。

3討論

我國(guó)的消化道惡性腫瘤中，結(jié)直腸癌的發(fā)病率一直位居前列，且正呈現(xiàn)出一種逐年遞增的趨勢(shì)。結(jié)直腸癌的發(fā)病原因未能徹底明確，僅了解其發(fā)生發(fā)展與遺傳、環(huán)境等方面的因素有關(guān)，并且在癌癥的形成過(guò)程中還涉及到許多諸如癌基因激活，抑癌基因失活等誘發(fā)細(xì)胞生物學(xué)改變的過(guò)程，各種癌基因與抑癌基因互相協(xié)同，相互作用，共同參與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。現(xiàn)在有大量數(shù)據(jù)支持WWOX在癌癥生物學(xué)中的作用，包括觀察到WWOX的丟失或減弱發(fā)生在許多人類惡性腫瘤中，包括骨腫瘤、乳腺癌、肺癌、肝癌、卵巢癌、胰腺癌和許多血液疾病[7-8]。WWOX的基因組定位使得該基因座容易受到基因雜合性丟失（LOH）或純合缺失的影響，從而導(dǎo)致基因表達(dá)降低?；蛘?，其他表觀遺傳和遺傳因素在沉默WWOX表達(dá)中起作用。在眾多結(jié)直腸癌的研究當(dāng)下，WWOX表達(dá)在癌組織中表達(dá)通常會(huì)減低，這可能與WWOX基因同源性缺失的機(jī)制相關(guān)[9-11]。在結(jié)直腸癌HCT1116細(xì)胞系中存在的堿基同源性改變多達(dá)25～50個(gè)，例如導(dǎo)致WWOX轉(zhuǎn)錄本表達(dá)降低是與通過(guò)使WWOX的一個(gè)等位基因外顯子6～8去除的雜合子缺失有關(guān)[12-15]。

通過(guò)本次Meta分析所納入的5篇文獻(xiàn)研究結(jié)果表明，在結(jié)直腸癌組織中WWOX表達(dá)較癌旁組織明顯降低，研究結(jié)果顯示，在結(jié)直腸癌中合并（OR=0.11，P<0.01），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示W(wǎng)WOX表達(dá)降低可能與結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。在與結(jié)直腸癌分化程度研究中合并（OR=4.63，P<0.01），在有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系研究中合并（OR=0.19，P<0.05），上述研究差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明隨著WWOX基因陽(yáng)性表達(dá)率降低，結(jié)直腸癌分化程度越低，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移可能增大。

然而，本研究仍有一定局限性。首先，本次Meta分析納入文獻(xiàn)數(shù)量較少;其次，本次研究?jī)H以中英文為本研究語(yǔ)種，尾隨其他語(yǔ)種的相關(guān)資料進(jìn)行研究，使資料全面性不全。以上局限性可能會(huì)使結(jié)論的證據(jù)強(qiáng)度受到一定影響。

根據(jù)本次課題研究結(jié)果，證明抑癌基因WWOX對(duì)結(jié)直腸惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展具有一定的抑制作用，但上述結(jié)論僅僅局限于META分析，如何將抑癌基因WWOX運(yùn)用于臨床，從而更好的診斷與治療結(jié)直腸癌是目前需要側(cè)重考慮的問(wèn)題。除此之外，對(duì)于WWOX在各種癌癥中的表達(dá)差異是否具有特異性，以及表達(dá)過(guò)程中是否有其他因素參與以及表達(dá)受何種因素影響，目前仍然需要進(jìn)一步研究。不同于P53、PTEN等研究較為深入的基因[16]，WWOX對(duì)于腫瘤方面的研究目前國(guó)內(nèi)外較少，就目前所有的研究結(jié)果來(lái)看，對(duì)于WWOX在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的詳細(xì)作用以及對(duì)腫瘤患者預(yù)后的影響情況僅僅知識(shí)冰山一角，需要人們繼續(xù)不斷的研究。

通過(guò)本次分析研究，WWOX作為抑癌基因可以抑制結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展，當(dāng)其表達(dá)降低時(shí)，可導(dǎo)致結(jié)直腸癌的發(fā)生，并且加速結(jié)直腸癌的浸潤(rùn)以及轉(zhuǎn)移，這為結(jié)直腸癌的診斷與治療提供了一定的幫助。因此，進(jìn)一步檢測(cè)、分析與研究WWOX基因，將對(duì)結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制有更進(jìn)一步的了解，對(duì)于結(jié)直腸癌的預(yù)防及治療將提供更加堅(jiān)實(shí)可靠的理論基礎(chǔ)。

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（收稿日期：2021-10-26）