毛艷豐

[摘要]目的分析畢節(jié)市人乳頭瘤病毒（HPV）E6/E7 mRNA檢測(cè)在宮頸病變中的臨床應(yīng)用效果，為宮頸病變患者臨床分流及診斷提供參考依據(jù)。方法選取畢節(jié)市中醫(yī)院2016年1月至2021年6月收治的200例宮頸病變患者作為研究對(duì)象，所有患者均接受HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)和薄層液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)（TCT），以組織病理檢測(cè)結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，比較不同宮頸病變患者HPV E6/E7 mRNA表達(dá)陽性率及相對(duì)表達(dá)量，并比較HPV E6/E7 mRNA、TCT在宮頸病變中的診斷效能。結(jié)果宮頸癌、CIN III級(jí)患者HPV E6/E7 mRNA表達(dá)陽性率及相對(duì)表達(dá)量均明顯高于CIN II級(jí)和CIN I級(jí)，CIN II級(jí)明顯高于CIN I級(jí)，宮頸癌HPV E6/E7 mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯高于CIN III級(jí)（P<0.05）。HPV E6/E7 mRNA檢查共檢出陽性113例，其中誤診34例，漏診15例。TCT檢查共檢出陽性66例，其中誤診20例，漏診48例。HPV E6/E7 mRNA檢查的敏感度明顯高于TCT檢查，而特異度明顯低于TCT檢查（P<0.05）。結(jié)論HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)對(duì)畢節(jié)市宮頸病變患者篩查分流、輔助診斷具有重要臨床指導(dǎo)價(jià)值。

[關(guān)鍵詞]人乳頭瘤病毒E6/E7 mRNA;液基薄層細(xì)胞檢測(cè);宮頸病變;宮頸上皮內(nèi)瘤變;宮頸癌

[中圖分類號(hào)]R737.33??? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A??? [文章編號(hào)]2095-0616（2022）02-0159-04

The application of HPV E6/E7 mRNA test in clinical triage of cervical lesions in Bijie

MAO Yanfeng

Department of Pathology，Bijie Hospital of Traditional Chinese Medicine in Guizhou Province，Guizhou，Bijie 551700，China

[Abstract]Objective To analyze the clinical application effect of human papillomavirus （HPV）E6/E7 mRNA test in cervical lesions in Bijie，so as to provide a reference basis for clinical triage and diagnosis of patients with cervical lesions. Methods A total of 200 patients with cervical lesions admitted to Bijie Hospital of Traditional Chinese Medicine from January 2016 to June 2021 were selected as study subjects，and all patients underwent HPV E6/E7 mRNA test and thin-prep cytology test （TCT）.Taking the histopathological test results as the gold standard，the HPV E6/E7 mRNA positivity rate and relative expression in patients with different cervical lesions were compared，and the diagnostic efficacy of HPV E6/E7 mRNA and TCT in cervical lesions was compared. Results The positivity rate and relative expression of HPV E6/E7 mRNA expression in patients with cervical cancer and cervical intraepithelial neoplasia （CIN）grade III were significantly higher than those in patients with CIN grade II and CIN grade I，CIN II was significantly higher than that in CIN I. The relative expression of HPV E6/E7 mRNA in patients with cervical cancer was significantly higher than that in patients with CIN grade III（P<0.05）. 113 positive cases were detected by HPV E6/E7 mRNA test，in which 34 cases were misdiagnosed and 15 cases were miss-diagnosed.66 positive cases were detected by TCT test，in which 20 cases were misdiagnosed and 48 cases were miss-diagnosed. The sensitivity of HPV E6/E7 mRNA test was significantly higher than that of TCT test，while the specificity was significantly lower than that of TCT test （P<0.05）. Conclusion HPV E6/E7 mRNA test is of great significance in clinically guiding the screening and triage and auxiliary diagnosis of patients with cervical lesions in Bijie.

[Key words]Human papillomavirus E6/E7 mRNA;Thin-prep cytology test;Cervical lesions;Cervical intraepithelial neoplasia;Cervical cancer

宮頸癌是婦科常見惡性腫瘤，研究指出，宮頸癌發(fā)生前存在一個(gè)長(zhǎng)期癌前病變期，一般由宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN I級(jí)）發(fā)展至宮頸癌需要至少10年甚至更長(zhǎng)時(shí)間[1-2]。因此，對(duì)于宮頸癌患者而言，及早發(fā)現(xiàn)癌前病變并及時(shí)給予規(guī)范干預(yù)，可降低宮頸癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。研究證實(shí)，人乳頭瘤病毒（HPV）感染與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)，HPV感染細(xì)胞之后，E6、E7等病毒致癌基因?qū)a(chǎn)生E6、E7癌蛋白，E6、E7癌蛋白可與機(jī)體的抑癌蛋白等細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白相結(jié)合，造成細(xì)胞周期控制出現(xiàn)異常，進(jìn)而引起癌變[3-4]?；诖?，本研究重點(diǎn)探討HPV E6/E7與宮頸病變的關(guān)系，以此完善畢節(jié)市（本市）臨床宮頸病變資料，為明確本市宮頸病變?cè)\斷臨床治療及預(yù)防提供重要科學(xué)依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1??? 資料與方法

1.1??? 一般資料

選取畢節(jié)市中醫(yī)院2016年1月至2021年6月收治的200例宮頸病變患者作為研究對(duì)象，納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡18歲以上;②人組前1周內(nèi)未進(jìn)行陰道用藥;③臨床資料齊全;④既往均無宮頸上皮內(nèi)瘤變史或?qū)m頸癌史;⑤語言溝通能力、理解能力以及認(rèn)知功能均正常。排除標(biāo)準(zhǔn)：①處于妊娠期;②人組前已經(jīng)明確診斷;③正在參與臨床其他研究;④存在其他部位惡性腫瘤。200例患者，年齡24～67歲，平均（47.21±4.93）歲;病程1～4個(gè)月，平均（2.38±0.29）個(gè)月;病情分布：CIN I級(jí)106例，CIN II級(jí)35例，CIN III級(jí)31例，宮頸癌28例。

1.2??? 方法

1.2.1??? 薄層液基細(xì)胞學(xué)檢測(cè)（TCT）??? 采集患者宮頸分泌物，通過膜式液基超薄細(xì)胞學(xué)以及離心沉淀技術(shù)，對(duì)收集的脫落細(xì)胞進(jìn)行固定及染色，參照國(guó)際癌癥協(xié)會(huì)推薦的分類標(biāo)準(zhǔn)[5]，由3位細(xì)胞學(xué)醫(yī)師獨(dú)立進(jìn)行判讀，結(jié)果分為鱗癌、高度鱗狀上皮病變、低度鱗狀上皮內(nèi)病變、不能排除高級(jí)別非典型鱗狀細(xì)胞上皮內(nèi)病變、無明確診斷意義非典型鱗狀細(xì)胞以及未見上皮內(nèi)病變，其中鱗癌、高度鱗狀上皮病變、低度鱗狀上皮內(nèi)病變、不能排除高級(jí)別非典型鱗狀細(xì)胞上皮內(nèi)病變、不典型鱗狀上皮細(xì)胞為陽性，余為陰性。

1.2.2??? 宮頸組織病理學(xué)檢測(cè)??? 根據(jù)陰道鏡的檢查結(jié)果，選取患者宮頸病變的較重部位取活檢，參照《病理學(xué)》中的標(biāo)準(zhǔn)[6]，由3名主治醫(yī)師及以上職稱的病理醫(yī)師進(jìn)行雙盲法會(huì)診分級(jí)，包括正常及炎癥、CIN I級(jí)、CIN II級(jí)、CIN III級(jí)、宮頸癌，其中CIN I級(jí)、CIN II級(jí)、CIN III級(jí)、宮頸癌為陽性，正常及炎癥為陰性。

1.2.3??? HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)??? 標(biāo)本來自TCT后剩余宮頸脫落細(xì)胞，通過b-DNA技術(shù)檢測(cè)HPV E6/E7 mRNA的表達(dá)水平，試劑盒購自鄭州科蒂亞生物技術(shù)有限公司（批號(hào)：2107A2），嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作;通過Quanti-Virus Tm冷光儀[河南科蒂亞（新鄉(xiāng)）生物技術(shù)有限公司]讀取數(shù)值，通過軟件轉(zhuǎn)換為基因拷貝數(shù)，HPV E6/E7 mRNA相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度比≥1為陽性。

1.3??? 觀察指標(biāo)

①觀察不同病情患者HPV E6/E7 mRNA表達(dá)陽性率及相對(duì)表達(dá)量;②觀察HPV E6/E7 mRNA檢查的敏感度、特異度以及準(zhǔn)確度;③觀察TCT檢查的敏感度、特異度以及準(zhǔn)確度;④比較HPV E6/E7 mRNA檢查和TCT檢查的敏感度、特異度以及準(zhǔn)確度，按四格表法進(jìn)行計(jì)算，敏感度=真陽性例數(shù)/（真陽性例數(shù)+假陰性例數(shù)）×100%，特異度=真陰性例數(shù)/（真陰性例數(shù)+ 假陽性例數(shù)）×100%，準(zhǔn)確度=（真陽性例數(shù)+ 真陰性例數(shù)）/總例數(shù)×100%。

1.4??? 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2??? 結(jié)果

2.1??? 不同病情患者HPV E6/E7 mRNA表達(dá)陽性率及相對(duì)表達(dá)量觀察

宮頸癌、CIN III級(jí)患者HPV E6/E7 mRNA表達(dá)陽性率及相對(duì)表達(dá)量均明顯高于CIN II級(jí)和CIN I級(jí)，CIN II級(jí)明顯高于CIN I級(jí)，宮頸癌HPV E6/E7 mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯高于CIN III級(jí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;宮頸癌與CIN III級(jí)HPV E6/E7 mRNA表達(dá)陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

2.2??? HPV E6/E7 mRNA檢查結(jié)果與病理結(jié)果對(duì)照

HPV E6/E7 mRNA檢查共檢出陽性113例，其中誤診34例，漏診15例。見表2。

2.3??? TCT檢查結(jié)果與病理結(jié)果對(duì)照

TCT檢查共檢出陽性66例，其中誤診20例，漏診48例。見表3。

2.4??? HPV E6/E7 mRNA檢查與TCT檢查的敏感度、特異度以及準(zhǔn)確度比較

HPV E6/E7 mRNA檢查的敏感度明顯高于TCT檢查，而特異度明顯低于TCT檢查，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。HPV E6/E7 mRNA檢查與TCT檢查的準(zhǔn)確度比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表4。

3??? 討論

宮頸癌是女性發(fā)病率及病死率均較高的一種惡性腫瘤，近年來其發(fā)病呈年輕化趨勢(shì)。宮頸癌發(fā)生和發(fā)展是漸進(jìn)演變的過程，包括數(shù)個(gè)階段，分別為增生、不典型增生、原位癌、早期浸潤(rùn)以及浸潤(rùn)癌宮頸癌病變?cè)缙诓o典型癥狀，部分患者可出現(xiàn)白帶增多等一般炎癥性表現(xiàn)，因而單獨(dú)通過臨床表現(xiàn)難以確診[7]。不過由癌前病變發(fā)展至宮頸癌，往往需要較長(zhǎng)時(shí)間，及早發(fā)現(xiàn)及早干預(yù)可阻斷宮頸癌發(fā)展進(jìn)程。

盡管TCT廣泛應(yīng)用于臨床婦科宮頸篩查，但由于操作和個(gè)人讀片等主觀因素，很容易導(dǎo)致假陰性或假陽性結(jié)果，尤其是在意義不明或更嚴(yán)重的非典型鱗狀上皮細(xì)胞病例中，極易出現(xiàn)漏誤診[8]。研究指出，雖然TCT對(duì)宮頸疾病的診斷具有較高的特異度，但其敏感度較差[9]。因此，還需要敏感度更高的篩查方式，進(jìn)一步提高惡性病變的篩查效果。CIN是一種由持續(xù)的高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）感染引起的癌前宮頸疾病，大量醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)及理論文獻(xiàn)證實(shí)，HPV基因E6/E7是導(dǎo)致女性宮頸癌的重要因素，高危亞型HPV感染宮頸上皮細(xì)胞，產(chǎn)生E6和E7兩種癌蛋白，E6和E7蛋白最初通過其在宿主細(xì)胞中靶向p53和視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白（pRb）腫瘤抑制通路的能力而被鑒定，從而干擾細(xì)胞周期調(diào)節(jié)[10-12]o E7通過其結(jié)合和滅活細(xì)胞pRb的能力刺激細(xì)胞周期，而E6通過蛋白酶體途徑與p53結(jié)合，導(dǎo)致p53降解，造成細(xì)胞周期控制失常。因此，HPV感染是宮頸癌發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素。

受地區(qū)、經(jīng)濟(jì)、社會(huì)發(fā)展等多種因素的綜合影響，宮頸癌的發(fā)生率和病死率在不同地區(qū)存在著明顯的差異。本研究基于本市女性宮頸病變地方特點(diǎn)，重點(diǎn)研究探討HPV E6/E7與宮頸病變的關(guān)系，更好地幫助本市臨床診斷治療宮頸病變。本研究中，不同病情宮頸病變患者HPV E6/E7 mRNA表達(dá)陽性率及相對(duì)表達(dá)量存在顯著差異，隨著病理分級(jí)逐漸增加，患者HPV E6/E7 mRNA表達(dá)陽性率及相對(duì)表達(dá)量均明顯升高，這與臨床相關(guān)研究結(jié)果相近[13]，說明宮頸癌前病變與HPV E6/E7 mRNA轉(zhuǎn)錄水平有關(guān)，即HPV E6/E7 mRNA的轉(zhuǎn)錄與病變進(jìn)展程度密切相關(guān)。E6和E7是所有HPV中最重要的癌基因，E6和E7蛋白可以通過降解眾所周知的腫瘤抑制因子p53和pRb，延長(zhǎng)感染細(xì)胞的壽命并誘發(fā)癌癥。

本研究中，通過對(duì)HPV E6/E7 mRNA檢查與TCT檢查的敏感度、特異度以及準(zhǔn)確度分析發(fā)現(xiàn)，HPV E6/E7 mRNA檢查的敏感度明顯高于TCT檢查，但是特異度明顯低于TCT檢查。這與臨床相關(guān)研究類似，如許生花等[14]的HPV E6/E7 mRNA檢查結(jié)果與病理結(jié)果相近，且診斷宮頸癌的敏感度為92.3%，明顯高于TCT檢查的43.6%，但特異度為70.0%，明顯低于TCT檢查的90.0%。提示TCT檢查易出現(xiàn)漏診，主要原因?yàn)門CT為細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測(cè)模式，當(dāng)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)異常改變時(shí)，宮頸病變往往進(jìn)展為中晚期[15-16]。HPV E6/E7 mRNA檢查的敏感度較高，可減少漏診的發(fā)生。不過也存在一定誤診的情況，因而可聯(lián)合其他檢查方式，降低漏、誤診率，以有助于患者進(jìn)一步治療。

綜上所述，HPV E6/E7 mRNA檢測(cè)對(duì)畢節(jié)市宮頸病變患者篩查分流、輔助診斷具有重要臨床指導(dǎo)價(jià)值。

[參考文獻(xiàn)]

[1]祁美霞，靳榮，盧慧，等.宮頸癌合并HPV感染患者HPV不同亞型分布及脆性組氨酸三聯(lián)體蛋白表達(dá)[J]. 中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2020，30（5）：734-737.

[2]方莉，韓瑜，許媛，等.高危型HPV感染與宮頸癌前病變及宮頸癌的相關(guān)性研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2019，23（4）：602-605.

[3] Hu Z，Ma D.The precision prevention and therapy of HPV- related cervical cancer：new concepts and clinical implications[J]. Cancer Med，2018，7（10）：5217-5236.

[4]郭慧敏，朱鐳，高景波，等.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)人乳頭瘤病毒E6/E7 mRNA對(duì)宮頸病變的診斷價(jià)值[J].中國(guó)綜合臨床，2019，35（6）：490-494.

[5] Solomon D，Davey D，Kurman R，et al.The 2001 Bethesda System：terminology for reporting results of cervical cytology[J].JAMA，2002 ，287（16）：2114-2119.

[6] Rosai&Ackerman.外科病理學(xué)[M].10版.北京：北京大學(xué)醫(yī)學(xué)出版社，2014：1442-1449.

[7]袁贊，康琳棣，侯英.宮頸上皮內(nèi)瘤變3級(jí)患者行宮頸錐切術(shù)后病理升級(jí)為宮頸浸潤(rùn)癌的危險(xiǎn)因素分析[J]. 癌癥進(jìn)展，2019，17（20）：2455-2458.

[8]李常虹，張林靜，聶明朝，等.早期宮頸上皮內(nèi)瘤變患者HPV、TCT檢查的臨床價(jià)值分析[J].中國(guó)性科學(xué)，2019，28（5）：56-59.

[9]趙健，郭雯雯，杜億杉，等.宮頸脫落細(xì)胞學(xué)檢查高級(jí)別異常在陰道鏡擬診中的價(jià)值研究[J].中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志，2020，36（9）：63-67.

[10]李秀娟，鄭雪絨，趙欣媛，等.PATZ1通過激活p53 依賴，性途徑抑制宮頸癌細(xì)胞增殖和遷移的機(jī)制研究[J]. 山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2020，51（6）：499-505.

[11] Wong JPH，Vahabi M，Miholjcic J，et al.Knowledge of HPV/cervical cancer and acceptability of HPV selfsampling among women living with HIV：A scoping review[J].Curr Oncol，2018，25（1）：e73-e82.

[12]王芳，李衛(wèi)民，劉艷麗，等.高危型HPV亞型及病毒載量檢測(cè)對(duì)宮頸癌篩查的價(jià)值探究[J].實(shí)用癌癥雜志，2020，35（4）：647-650.

[13]秦艷，朱怡.HPVE6/E7mRNA聯(lián)合TCT檢測(cè)在宮頸癌篩查的臨床應(yīng)用價(jià)值[J].中國(guó)婦幼健康研究，2020，31（5）：665-670.

[14]許生花，李明，史美云.HPV E6/E7mRNA聯(lián)合TCT 在老年婦女宮頸疾病診斷中的臨床應(yīng)用價(jià)值[J].實(shí)用老年醫(yī)學(xué)，2020，34（2）：130-132，148.

[15]孫斯媛，羅飛，胡義忠，等.HPV、TCT及活檢在宮頸病變篩查中的應(yīng)用研究[J].河北醫(yī)藥，2019，41（11）：1645-1649.

[16] Khan MJ，Castle PE，Lorincz AT.The elevated 10- year risk of cervical precancer and cancer in women with human papillomavirus （HPV）type 16 or 18 and the possible utility of type-specific HPV testing in clinical practice[J].J Natl Cancer Inst，2005，97：1072-1079.