薛紅超

（河南省長葛市疾病預防控制中心，長葛 461500）

結核病是一種由結核桿菌引起的慢性傳染病，常累及肺部，由于缺乏特異性表現(xiàn)，肺結核易誤診為肺結節(jié)等肺部疾病[1-2]。目前臨床實踐中多采用痰涂片、結核菌素純蛋白衍生物（pure protein derivative，PPD）試驗等方法診斷結核病，但其常發(fā)生假陰性的情況[3]。然而結核感染T細胞γ-干擾素釋放試驗 （tuberculosis interferon-gamma release assay，TB-IGRA）是細胞免疫的體外診斷技術，已被認為是檢測結核感染的首選手段[4-5]。結核分枝桿 菌 抗 體 （mycobacterium tuberculosis antibody，TB-Ab）檢測主要通過體液抗原抗體反應來診斷結核感染[6]。本研究采用四種診斷方法對比分析，驗證TB-IGRA、TB-Ab對結核病的診斷價值，以利于TB-IGRA、TB-Ab聯(lián)合檢測在臨床實踐中的推廣應用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018年3月至2020年12月在疾控中心治療的216例疑似肺結核患者病例資料進行回顧性分析，肺結核病根據《WS 288-2017肺結核診斷》[7]標準診斷，肺部其他疾病診斷以《診斷學》（第9版）[8]為依據。216例疑似肺結核患者按照上述診斷標準分為肺結核組（n=151），男性92例，女性59例，平均年齡（56.03±18.45）歲，合并糖尿病5例；非肺結核組（n=65），男性42例，女性23例，平均年齡（55.78±18.07）歲，合并糖尿病4例。兩組一般資料間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。納入標準：（1）疑似診斷肺結核患者；（2）近期未接受肺部疾病相關治療者；（3）本研究中患者或家屬均已簽署知情同意書。排除標準：（1）存在惡性腫瘤患者；（2）存在嚴重心、肝、腎功能障礙患者。

1.2 方法 （1）TB-IGRA檢測，采集患者靜脈血4 mL，肝素抗凝，2 h內混勻后分裝到本底對照管（N）、測試管（T）及陽性對照管（P）中培養(yǎng)。 將培養(yǎng)管輕柔顛倒混勻5次后迅速置37℃培養(yǎng)，培養(yǎng)（22±2）h，培養(yǎng)管3000 r/min離心，取上清行酶聯(lián)免疫吸附測定法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）檢測（試劑盒購自北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司），N＞400 pg/mL時需重新測定。陽性評價標準：N≤400 pg/mL，T-N≥14 pg/mL，且≥N/4[9]。（2）TB-Ab檢測，采用膠體金技術檢測血清中結核桿菌抗體（試劑盒購自上海奧普生物醫(yī)藥有限公司），嚴格按照試劑盒說明書進行操作，評價標準是陽性：膜中央發(fā)現(xiàn)紅色斑點；弱陽性：膜中央發(fā)現(xiàn)淺紅色斑點。（3）痰涂片 采用抗酸染色鏡檢法觀察抗酸分枝桿菌，嚴格按照抗試劑盒說明書進行操作，以每100個視野中抗酸分枝桿菌>3個為陽性。（4）PPD試驗，于患者左前臂背側1/3處皮內注射5IU PPD（北京祥瑞生物制品有限公司，國藥準字S10960016），注射72 h后觀察皮膚反應，以皮膚硬結大小為判斷標準[4]：陽性（+）為硬結≥5 mm，陰性（-）則為硬結<5 mm。

1.3 統(tǒng)計學分析 采用軟件SPSS 22.0處理數(shù)據，以[n，%]表示計數(shù)，資料進行χ2檢驗；以(±s)計量資料進行t檢驗，取α=0.05為檢驗水準，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組TB-IGRA、TB-Ab、痰涂片及PPD檢出陽性率比較TB-IGRA、TB-Ab對肺結核病變的陽性檢出率明顯高于非肺結核組（P<0.05）；且肺結核組中TB-IGRA、TB-Ab及PPD的陽性檢出率均顯著高于痰涂片鏡檢（P<0.01）。見表1。

表1 兩組TB-IGRA、TB-Ab、痰涂片、PPD陽性檢出率[n(%)]比較

2.2 四種檢測方式對肺結核的診斷價值 TBIGRA對肺結核的陽性預測值顯著高于痰涂片鏡檢，而其診斷靈敏度則顯著高于TB-Ab、痰涂片鏡檢及PPD（P<0.05）；TB-Ab對肺結核的陽性預測值及診斷靈敏度均顯著高于痰涂片鏡檢（P<0.05）；四種檢測方式對于肺結核病診斷的特異度差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表2。

表2 四種檢測方式對肺結核的診斷價值（%）

2.3 不同年齡組患者TB-IGRA、TB-Ab陽性檢出率比較 高齡患者的TB-IGRA、TB-Ab陽性檢出率明顯低于中青年患者（P<0.05）；各組TB-IGRA的陽性檢出率顯著高于TB-Ab（P<0.05）。見表3。

表3 不同年齡者的TB-IGRA、TB-Ab陽性檢出[n(%)]比較

3 討論

近年來，我國肺結核的發(fā)病率呈日漸增高趨勢，該病多由結核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）引起[10]。臨床實踐中多將病原學檢查作為診斷結核感染的金標準，但由于我國人口普遍接種了卡介苗，該疫苗接種可影響結核感染的診斷準確性[11]。不少研究[12]也曾表明：痰涂片鏡檢靈敏度較低，且常出現(xiàn)假陰性的情況。因此，尋找診斷準確性更高的結核感染檢測方法已成為了目前臨床的研究熱點。Divya等[13]研究發(fā)現(xiàn)：MTB進入機體后，可誘導產生致敏T細胞，機體再次受到CFP-10等抗原刺激后，T淋巴細胞可釋放γ-干擾素等，基于此可通過檢測血清中γ-干擾素含量，來判斷機體MTB感染情況。TB-IGRA則是通過ELISA法，測定T細胞產生的IFN-γ水平，可有效避免卡介苗接種人群引起的干擾，具有檢測迅速、靈敏度高的特點[14]。 李娜等[15]和李德新等[16]研究指出：TB-IGRA對結核疾病的診斷特異度為88.3%，對菌陽性肺結核病患者的診斷敏感度為81.9%。結核感染后，MTB可進入人體，刺激產生多種特異性抗體，TB-Ab檢測可以利用微孔濾膜的可濾性，獲取IgG免疫抗體，該抗體與SPA膠體綴合物反應后形成紅色斑點，便于觀察及操作，但有研究指出其診斷敏感性較低，易出現(xiàn)漏診的情況[17]。

本研究結果顯示：TB-IGRA對肺結核病變的陽性檢出率明顯高于TB-Ab及痰涂片鏡檢，與非肺結核組相比，TB-IGRA、TB-Ab對肺結核的陽性檢出率有明顯升高。陳瑋[18]報道稱，結核病患者中TB-IGRA陽性檢出率90.12%。另有王瓊等[19]研究指出，TB-Ab在肺結核的陽性檢出率為40.03%。提示TB-IGRA、TB-Ab均能有效判斷肺結核病變，但TB-IGRA的陽性檢出率更高。非結核感染者檢出陽性的原因可能為患者體內存在MTB抗原并與決定簇進行了特異性結合，或患者曾接種過卡介苗，現(xiàn)已發(fā)生鈣化。本研究結果還顯示，TB-IGRA對肺結核的陽性預測值及靈敏度均為90.07%，均顯著高于TB-Ab及痰涂片鏡檢；而與痰涂片鏡檢相比，TB-Ab對肺結核的診斷靈敏度則有顯著升高。范國萍等[20]研究報道稱，痰涂片對MTB的檢測靈敏度僅為33.67%，與本研究結果基本一致，提示痰涂片鏡檢診斷肺結核的靈敏度較差。以上說明，TBIGRA的檢測符合率及靈敏度均較高，雖然無法區(qū)分引發(fā)疾病的原因及結核所在病灶，但其仍作為診斷肺結核的有效方法。

然而，TB-IGRA技術也存在一定的局限性，其在海分枝桿菌、胃分枝桿菌等5種非結核桿菌中存在相同抗原，若機體發(fā)生上述非結核桿菌感染時，TB-IGRA難以將它們與MTB感染區(qū)分開來。本研究結果顯示：該檢測方式在非肺結核組也均有陽性檢出，且在肺結核患者的診斷中，TB-IGRA雖陽性檢出率最高，但特異度與TB-Ab、痰涂片鏡檢、PPD比較無明顯差異，分析四種檢測方法特異度均不高，可能和受卡介苗和非結核分枝桿菌交叉反應影響有關。王浩等[9]研究也曾報道稱，TBIGRA檢測仍可發(fā)生檢測假陰性的情況。提示雖然TB-IGRA可獲得較高陽性檢出率及靈敏度，但實際檢測中仍然存在假陽性或假陰性的情況。同時TB-IGRA假陰性還可與實驗環(huán)境、操作技術及各區(qū)域人種的MTB滴度不同有關，因此進行TBIGRA時需規(guī)范操作步驟，避免誤診。

本研究還發(fā)現(xiàn)：高齡（≥65歲）患者的TBIGRA、TB-Ab陽性檢出率明顯低于中青年患者，與王浩等[9]研究結果一致。分析原因可能與高齡患者機體免疫功能較中青年患者更差，而TB-IGRA、TB-Ab檢測易受免疫功能影響有關。

綜上所述，TB-IGRA及TB-Ab對于肺結核病的診斷效能優(yōu)于傳統(tǒng)的痰涂片及PPD方法。與TB-Ab、痰涂片、PPD相比，TB-IGRA對肺結核疾病的陽性預測值及靈敏度均較高，具有一定的應用前景。但TB-IGRA檢測結果可能受到年齡、操作技術等因素的影響，可能存在特異性不高的情況，臨床實踐中需結合其他診斷技術綜合判斷肺結核感染情況。同時本研究還存在不足，如研究樣本較小等，未深入研究影響TB-IGRA、TB-Ab陽性檢出率的危險因素等，未來需進行大樣本研究。