不同飼養(yǎng)方式下蘇尼特羊肌纖維組成和羊肉品質(zhì)的比較研究

孫 冰，侯艷茹，徐麗媛，王晨蕾，靳 燁，趙麗華，圖 雅，蘇 琳,

（1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，內(nèi)蒙古呼和浩特 010018；2.寧夏大學(xué)食品與葡萄酒學(xué)院，寧夏銀川 750021；3.烏拉特中旗農(nóng)牧和科技局，內(nèi)蒙古烏拉特中旗 015300）

羊肉以富含優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)、礦物元素（如鐵和鋅）、肉質(zhì)細(xì)嫩等特點(diǎn)而深受廣大消費(fèi)者青睞。羊肉的消費(fèi)量不斷攀升，并且養(yǎng)羊業(yè)由于投入資金量少、育肥周期短、經(jīng)濟(jì)效益顯著的特點(diǎn)，已成為國(guó)內(nèi)外畜牧業(yè)發(fā)展的重要組成部分[1]。目前，肉羊傳統(tǒng)放牧方式一方面由于禁牧、限牧政策的實(shí)施以及集約化的生產(chǎn)要求，另一方面草原上的牧草質(zhì)量、產(chǎn)量隨季節(jié)的交替而波動(dòng)，且四季營(yíng)養(yǎng)不均衡，飼用價(jià)值、產(chǎn)草量降低，這些都是導(dǎo)致放牧羊的采食量下降、營(yíng)養(yǎng)攝入不足的原因，因此需要通過(guò)舍飼和補(bǔ)飼的方式來(lái)實(shí)現(xiàn)肉羊的營(yíng)養(yǎng)均衡，不同的飼養(yǎng)方式直接影響肉羊的生長(zhǎng)性能及肉品質(zhì)等特性[2]。肌纖維是骨骼肌的基本組成單位，伴隨著動(dòng)物的出生，其數(shù)量就已確定，但其類型之間可以互相轉(zhuǎn)化，遵循Ⅰ型?Ⅱa ?Ⅱx/d ?Ⅱb 的順序，其生物學(xué)特性（密度、橫截面積及類型分布等）都是影響肉品質(zhì)的重要因素[3]。

有研究指出，放牧羊補(bǔ)飼含有大麥、玉米、豆粕、維生素添加劑和礦物元素的精料時(shí)，羊肉的氧化穩(wěn)定性、營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和風(fēng)味物質(zhì)均有顯著性的提高[4]。尹麗卿[5]對(duì)比了放牧和圈養(yǎng)兩種飼養(yǎng)方式下蘇尼特羊三個(gè)部位（臂三頭肌、股二頭肌、背最長(zhǎng)肌）的肌纖維類型分布，發(fā)現(xiàn)圈養(yǎng)羊的酵解型肌纖維含量在三個(gè)部位中均高于放牧條件下的。以上結(jié)論說(shuō)明飼養(yǎng)方式對(duì)反芻動(dòng)物的肉品質(zhì)和肌纖維類型的分布均有影響。增加肌肉中的Ⅰ型和Ⅱa 型肌纖維的占比，肉質(zhì)也就越細(xì)嫩[6]。降低肌肉中Ⅱx 型和Ⅱb 型纖維的占比，能使宰后豬肉pH 下降速度減慢，改善肉品質(zhì)[7]。

目前針對(duì)三種飼養(yǎng)方式間蘇尼特羊胴體品質(zhì)、屠宰性能及肌纖維生物學(xué)特性的全面研究較少，因此本研究以蘇尼特羊?yàn)檠芯繉?duì)象，分析放牧、放牧+補(bǔ)飼和舍飼三種飼養(yǎng)方式下肉品質(zhì)指標(biāo)，之后通過(guò)ATPase 染色法和MyHC mRNA 表達(dá)量的測(cè)定對(duì)肌纖維類型進(jìn)行定性和定量的劃分，對(duì)肌肉重要代謝酶活力進(jìn)行比較，旨在探究不同飼養(yǎng)方式間蘇尼特羊屠宰性能、肉品質(zhì)及肌纖維特性的差異性，為日后通過(guò)改變飼養(yǎng)方式進(jìn)而改善肉品品質(zhì)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

30 只蘇尼特羊 在內(nèi)蒙古烏拉特中旗哈拉圖嘎查順?biāo)炷羺^(qū)飼養(yǎng)，在草原恒通食品有限公司進(jìn)行屠宰，宰后 1 h 內(nèi)取蘇尼特羊背最長(zhǎng)肌為實(shí)驗(yàn)材料。本實(shí)驗(yàn)中飼喂舍飼和放牧+補(bǔ)飼的蘇尼特羊基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1；青貯飼料、葵花餅 牧民自制；精飼料 恒牧飼料科技有限公司；異戊烷 阿法埃莎（天津）化學(xué)有限公司；巴比妥鈉 山東西亞化學(xué)股份有限公司；三磷酸腺苷二鈉鹽（ATP） 北京酷來(lái)搏科技有限公司；無(wú)水乙酸鈉、無(wú)水氯化鈣 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；氯化鈷 天津市福晨化學(xué)試劑廠；異丙醇 上海振興化工二廠有限公司；硫化銨上海麥克林生化科技有限公司；以上試劑均為分析純。RNAiso Plus、TB GreenTM Premix Ex TaqTM II、PrimeScriptTM RT Reagent Kit with gDNA Eraser 試劑盒 大連寶生物工程大連有限公司；蘋果酸脫氫酶、琥珀酸脫氫酶、乳酸脫氫酶試劑盒 南京建成生物工程研究所。

表1 試驗(yàn)羊日基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（%）Table 1 Basic diet composition and nutritional levels (%)

Leica 4000B 顯微鏡 德國(guó)徠卡公司；MEV 冰凍切片機(jī) 德國(guó) Slee 公司；Eppendorf 5417 冷凍離心機(jī) 德國(guó)Eppendorf 生物公司；DSH-300A 回旋式水浴恒溫振蕩器 上海雅榮生化設(shè)備儀器有限公司；凝膠成像分析系統(tǒng) 美國(guó) Bio-Rad 公司；LightCycler?96 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 儀 羅氏診斷產(chǎn)品（上海）有限公司；YNERGY H1 型酶標(biāo)儀 美國(guó) Bio-Tek Instruments 公司；Biometra PCR 擴(kuò)增儀 北京北方華奧貿(mào)易有限責(zé)任公司；C-LM3B 型數(shù)顯式肌肉嫩度儀 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)工程學(xué)院；STC-P2A 全自動(dòng)測(cè)色色差計(jì) 上海生物生化實(shí)驗(yàn)儀器公司；pH-STAR型胴體 pH 值直測(cè)儀 德國(guó) Matthaus。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)管理 本實(shí)驗(yàn)所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物于2018 年6 月~9 月在內(nèi)蒙古烏拉特中旗哈拉圖嘎查順?biāo)炷羺^(qū)飼養(yǎng)，選取體質(zhì)量為（17.16±3.33）kg 的3 月齡蘇尼特羊30 只，設(shè)置為舍飼（C）、放牧+補(bǔ)飼（S）、放牧（P）三個(gè)組別，每組10 只，飼喂期間自由飲水。預(yù)實(shí)驗(yàn)期7 d，實(shí)驗(yàn)期90 d。屠宰前試驗(yàn)羊禁食24 h、停水2 h，依照穆斯林阿訇屠宰要求屠宰30 只蘇尼特羊。 舍飼組日糧：精飼料（10 kg）、青貯飼料（8 kg）和葵花餅（5 kg），并且每月依次增加精飼料（2 kg）、青貯飼料（8 kg）和葵花餅（5 kg）；放牧+補(bǔ)飼組日糧：飼料種類和重量與舍飼組一樣；放牧組日糧：自由放養(yǎng)，主要食用芨芨草，石針茅等牧草，不飼喂其它飼料。

1.2.2 屠宰性能和胴體品質(zhì)的測(cè)定 屠宰性能的測(cè)定：分組前重指飼養(yǎng)管理開始前所有試驗(yàn)羊的體重；宰前活重指試驗(yàn)羊屠宰前禁食禁水后的體質(zhì)量；總增重量指飼養(yǎng)管理到宰前這期間試驗(yàn)羊體重的增長(zhǎng)量；棒骨、脊骨、肋骨重量指胴體剔除每一部分的肉后，肋骨、棒骨、脊骨分別稱重；凈肉重量指剔除骨頭后試驗(yàn)羊胴體所剩余的凈肉質(zhì)量；凈肉率（%）=凈肉重量/活體重量×100；屠宰率（%）=胴體重量/活體重量×100；胴體產(chǎn)肉率（%）=凈肉重量/胴體重量×100；骨肉比（%）=骨重量/凈肉重量×100。

胴體品質(zhì)的測(cè)定：胴體重量指試驗(yàn)羊屠宰放血后，去除頭、尾、四肢、淋巴、內(nèi)臟、皮毛，胴體靜置30 min 后重量；胴體長(zhǎng)將試驗(yàn)羊胴體倒掛，測(cè)得的恥骨聯(lián)合前緣到第一頸椎前緣之間的長(zhǎng)度；胴體寬是試驗(yàn)羊肋骨末端到脊骨之間測(cè)得的距離；背膘厚指試驗(yàn)羊背部脂肪的厚度。

1.2.3 羊肉品質(zhì)指標(biāo)測(cè)定 在羊屠宰后取左半胴體背最長(zhǎng)肌（longissimus doris muscle，LD）對(duì)各項(xiàng)肉品質(zhì)指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定。使用全自動(dòng)色差儀測(cè)定肌肉色澤，a*值表示紅綠度、b*值表示黃藍(lán)度、L*值表示亮度；參照侯普馨等[8]論文中的方法計(jì)算肌肉蒸煮損失；使用pH-STAR 型胴體直測(cè)式pH 計(jì)最初pH（pH45min），靜置排酸24 h 后測(cè)得的pH 記為pH24h；CLM-3 型嫩度儀測(cè)定肌肉剪切力，每次測(cè)定重復(fù)6~8 次。

1.2.4 組織學(xué)特性測(cè)定 試驗(yàn)羊屠宰后45 min 內(nèi)，順沿肌纖維方向?qū)⒓∪馇懈?，用刀片修整為體積約為0.5 cm×0.5 cm×1 cm 的塊狀，放進(jìn)異戊烷（需提前經(jīng)液氮預(yù)冷）中脫水干燥30 s，觀察到肉塊顏色完全脫水發(fā)白后投入液氮中，存放在無(wú)酶無(wú)菌凍存管中，?80 ℃的條件下長(zhǎng)期保存。用于后續(xù)肌纖維組織的冰凍切片。

按照上述方法采集好的樣品置于?25 ℃冰凍切片機(jī)中包埋并冷凍，將其切成10 μm 厚的橫斷面[9]，組織切片通過(guò)ATP 酶組織化學(xué)染色法[10]進(jìn)行染色，染好的組織切片在Leica 4000B 熒光倒置顯微鏡10×10 倍下觀察，選擇2~4 個(gè)分型清晰的視野，通過(guò)Leica Qwin V4.4 彩圖軟件分析肌纖維的密度、直徑、橫截面積、數(shù)量比例和面積比例[11]。

1.2.5 基因表達(dá)量的測(cè)定

1.2.5.1 樣品采集 取80~100 mg 背最長(zhǎng)肌肌肉塊保存?80 ℃的冰箱中，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)總RNA 的提取。

1.2.5.2 RNA 提取與反轉(zhuǎn)錄 利用實(shí)驗(yàn)室傳統(tǒng)的Trizol 抽提法，按照RNAiso Plus 的指導(dǎo)書提取肌肉中總RNA[12]?？俁NA 濃度和純度（A260nm/A280nm）用微量分光光度計(jì)和核酸蛋白分析儀測(cè)定。用1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)并用凝膠成像系統(tǒng)曝光拍照以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中提取好的總RNA 是否完整。反轉(zhuǎn)錄參照說(shuō)明書進(jìn)行，將合成的質(zhì)量濃度為50 ng/μL 的cDNA 稀釋到10 ng/μL 用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)基因表達(dá)量的測(cè)定[13]。

秀容川的瞳孔再次變成赤金色，這是他的一門秘術(shù)：小滿瞳。施展小滿瞳后，目光就成了兵器，就是一只螞蟻，呈現(xiàn)在小滿瞳中，也如大象一般巨大。

1.2.5.3 引物序列及合成 實(shí)驗(yàn)所需MyHCs 基因序列引自尹麗卿、馬曉冰論文[5，14]，其他基因序列利用NCBI 網(wǎng)站設(shè)計(jì)，本實(shí)驗(yàn)中所有基因序列由生工生物公司（上海）合成，詳細(xì)序列見表2 所示。

表2 引物序列Table 2 Primer sequences

1.2.5.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 擴(kuò)增 以cDNA 為模板，使用定量試劑盒（TB GreenTM Premix Ex TaqTM II），以GAPDH 為管家基因，對(duì)實(shí)驗(yàn)中多個(gè)目的基因進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量分析。PCR 反應(yīng)條件為：預(yù)變性：95 ℃，30 s；變性：95 ℃，5 s；退火：58 ℃，30 s；延伸72 ℃，30 s；變性、退火、延伸三個(gè)過(guò)程進(jìn)行45 個(gè)循環(huán)；延伸72 ℃，10 min。采用2?ΔΔCt法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。

1.2.6 酶活力測(cè)定 蘋果酸脫氫酶、琥珀酸脫氫酶、乳酸脫氫酶活性均按照南京建成測(cè)試盒附帶說(shuō)明書進(jìn)行。

1.3 數(shù)據(jù)處理

所需實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS25.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，分析結(jié)果全部用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。實(shí)驗(yàn)結(jié)果用單因素方差法進(jìn)行差異性分析。P>0.05 表示組間差異不顯著，P＜0.01 表示組間差異極顯著，P＜0.05 表示組間差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 三種飼養(yǎng)方式下蘇尼特羊屠宰性能和胴體品質(zhì)的差異比較

由表3 可知。放牧組和放牧+補(bǔ)飼組宰前活重量顯著低于舍飼組（P＜0.05）；放牧組總增重量、凈肉重、凈肉率、產(chǎn)肉率、屠宰率、胴體重、背膘厚顯著低于放牧+補(bǔ)飼組和舍飼組（P＜0.05），脊骨重量和胴體長(zhǎng)顯著低于舍飼組（P＜0.05），骨肉比顯著高于放牧+補(bǔ)飼組和舍飼組（P＜0.05）。

表3 三種飼養(yǎng)方式下蘇尼特羊屠宰性能和胴體品質(zhì)的差異比較Table 3 Differences in slaughter performance and carcass quality of Sunit sheep under three typical feeding patterns

屠宰性能和胴體品質(zhì)主要受遺傳、環(huán)境、性別、飼料和飼養(yǎng)管理等多方面因素的共同影響，在相同條件下飼糧是影響的主要因素。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，舍飼和放牧補(bǔ)充精料的方式都能夠不同程度的提高蘇尼特羊宰前總增重量、屠宰率、凈肉率等指標(biāo)。解進(jìn)等[15]指出，在育肥期結(jié)束時(shí)，與傳統(tǒng)的放牧方式相比，放牧后補(bǔ)飼精料的方式能夠使呼倫貝爾羔羊的凈肉質(zhì)量、胴體質(zhì)量、屠宰率、凈肉率均有不同水平的積極影響，其中凈肉質(zhì)量最高可提高40.55%。Turner等[16]研究指出，與自然放牧方式下相比，放牧并補(bǔ)充全棉籽的方式會(huì)顯著提高薩?？烁嵫虻碾伢w質(zhì)量和肋骨面積。全舍飼的飼養(yǎng)方式可使得崗巴羊的宰前活體重量和平均日增重均顯著高于純自然放放牧和放牧后補(bǔ)充精料的方式[17]。王宏博等[18]報(bào)道，補(bǔ)飼的季節(jié)對(duì)于羔羊的生長(zhǎng)性能也有一定的影響，在夏季給放牧羊補(bǔ)充精料的飼養(yǎng)方式能使得羔羊的宰前活體質(zhì)量、胴體凈肉質(zhì)量、屠宰率等都優(yōu)于純放牧方式。以上結(jié)果說(shuō)明舍飼和放牧+補(bǔ)飼對(duì)肉羊的屠宰性能有積極的改善作用，但對(duì)于各指標(biāo)具有不同的效果。

2.2 三種飼養(yǎng)方式下蘇尼特羊羊肉品質(zhì)的差異比較

表4 三種飼養(yǎng)方式下蘇尼特羊肉品質(zhì)的差異比較Table 4 Differences in mutton quality of Sunit sheep under three typical feeding patterns

肉色作為評(píng)價(jià)肉品質(zhì)的最直觀指標(biāo)，其中其關(guān)鍵作用的物質(zhì)是肌紅蛋白，肌肉色澤的差異主要是由于不同類型肌纖維中的肌紅蛋白的含量有所不同所導(dǎo)致。因?yàn)檠趸停á裥?Ⅱa）肌纖維中肌紅蛋白含量較高，所以氧化型肌纖維比例高的肌肉呈現(xiàn)的肉色愈加鮮紅。本實(shí)驗(yàn)中放牧和放牧+補(bǔ)飼的蘇尼特羊在L*優(yōu)于舍飼組，三組間a*、b*值沒(méi)有顯著差異（P>0.05）。與此一致，王敏研究指出，放牧和舍飼兩種飼養(yǎng)模式下肉牛的色澤并沒(méi)有顯著的差異性[19]。但是也有研究表明放牧羊L*和a*值顯著高于舍飼方式下的[20]。飼養(yǎng)管理、肌肉部位、品種以及屠宰方式的差異都是影響畜禽胴體肉色的因素。pH 可以反映試驗(yàn)動(dòng)物屠宰后肌肉糖原酵解水平和速率。剛屠宰后動(dòng)物的肌肉pH 范圍是 6.0~7.0，肌肉pH 的下降速度過(guò)快一方面會(huì)破壞水與蛋白質(zhì)二者的結(jié)合，另一方面會(huì)影響肌肉組織的蛋白特性，進(jìn)而對(duì)多項(xiàng)肉品質(zhì)指標(biāo)產(chǎn)生不利影響[21]。本實(shí)驗(yàn)中所有蘇尼特羊屠宰后肌肉的pH0均處于正常區(qū)間，而冷庫(kù)靜置排酸24 h 后，結(jié)果卻顯示為放牧組和放牧+補(bǔ)飼組顯著小于舍飼組（P＜0.05），這極有可能是因?yàn)閜H 下降速率和回升速率快，加快了肉的成熟速度。肉質(zhì)嫩度與剪切力呈負(fù)相關(guān)，剪切力值的大小可以直接反映肉質(zhì)是否足夠鮮嫩[22]。本研究中得出的結(jié)果說(shuō)明放牧和放牧+補(bǔ)飼方式下飼養(yǎng)的羊肉嫩度要優(yōu)于舍飼方式下的，與此結(jié)果一致，有研究表明與放牧+補(bǔ)飼和全舍飼方式下飼養(yǎng)的崗巴羊相比較，純自然放牧條件下的羊肉更加細(xì)嫩[17]。De 等[23]研究指出，在不同放牧方式下飼養(yǎng)的羔羊肉剪切力值沒(méi)有顯著差異。放牧+補(bǔ)飼條件下，絨山羊母羔肉質(zhì)較羯羔嫩且新鮮，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值更高[24]。這可能是由于基礎(chǔ)日糧營(yíng)養(yǎng)水平、動(dòng)物飼養(yǎng)管理、性別和品種等多種因素的不同而引起的差異。

肌纖維直徑的大小、類型的分布以及各型纖維的數(shù)量占比均與羊肉品質(zhì)緊密相關(guān)，因此，本實(shí)驗(yàn)對(duì)肌纖維的組織學(xué)特性進(jìn)行了測(cè)定，以期從肌纖維角度探尋三種飼養(yǎng)方式下肉品質(zhì)差異性的原因。

2.3 三種飼養(yǎng)方式下蘇尼特羊肌纖維特性的差異比較

2.3.1 蘇尼特羊背最長(zhǎng)肌的 ATP 酶染色結(jié)果 如圖1所示，在10×10 倍顯微鏡下觀察到肌纖維排列緊密、輪廓清晰且分型明顯。因?yàn)椴煌愋图±w維內(nèi)的ATP 酶對(duì)酸和堿的穩(wěn)定性有所差異，可將其劃分成三種類型，Ⅰ型（慢速氧化型）肌纖維在pH4.60條件下的ATPase 活性最強(qiáng)，呈黑色；Ⅱa 型（快速氧化-酵解型）肌纖維的ATPase 在pH4.60 條件下受到抑制，無(wú)法參與染色反應(yīng)，呈白色；Ⅱb 型（快速酵解型）肌纖維在pH4.60 條件下具有一定的ATPase 活性，顏色呈棕褐色[25]。

圖1 三種飼養(yǎng)方式下的蘇尼特羊背最長(zhǎng)肌 ATPase 染色結(jié)果Fig.1 ATPase staining results of LD of Sunit sheep under three feeding patterns注： S：放牧+補(bǔ)飼組；P：放牧組；C：舍飼組。

2.3.2 放牧、放牧+補(bǔ)飼和舍飼三種飼養(yǎng)方式下蘇尼特羊肌纖維特性的差異比較 根據(jù)表5 可知，相比于舍飼組，放牧+補(bǔ)飼組Ⅱa 型肌纖維面積和數(shù)量比例顯著升高（P＜0.05），肌纖維密度顯著增加（P＜0.05），Ⅱb 型肌纖維直徑和面積比例顯著降低（P＜0.05）；放牧組Ⅱa 型肌纖維面積和數(shù)量比例顯著增加（P＜0.05），肌纖維密度顯著增加（P＜0.01），Ⅱb 型肌纖維直徑、面積和數(shù)量比例顯著降低（P＜0.05），Ⅱb 型橫截面積極顯著降低（P＜0.01），Ⅰ型和Ⅱa 型肌纖維的直徑和橫截面積顯著降低（P＜0.05）。放牧+補(bǔ)飼組Ⅱa 型肌纖維直徑和橫截面積顯著高于放牧組（P＜0.05）。

表5 三種飼養(yǎng)方式下肌纖維組織學(xué)特性的差異Table 5 Differences of muscle fiber characteristics under three typical feeding patterns

在三組蘇尼特羊的背最長(zhǎng)肌肌纖維組成中，均是Ⅱ型肌纖維所占比例較大（80%以上），Ⅰ型肌纖維是占比最小的，放牧、放牧+補(bǔ)飼和舍飼三種飼養(yǎng)方式之間肌纖維組織學(xué)特性指標(biāo)差異相對(duì)較大。放牧組氧化型（Ⅰ型+Ⅱa 型）肌纖維的數(shù)量比例、面積比例分別是48.65%、49.29%，放牧+補(bǔ)飼組分別為45.01%、46.81%，舍飼組分別為42.75%、41.30%。在三種典型飼養(yǎng)方式下，放牧羊肌纖維密度最大，并且各型的肌纖維直徑和橫截面積都小于舍飼和放牧后補(bǔ)充精料方式下的。以上結(jié)果說(shuō)明，與舍飼方式下的蘇尼特羊相比，放牧和放牧+補(bǔ)飼方式能夠上調(diào)肌肉中氧化型肌纖維的比例，直徑和橫截面積有效減小。侯艷茹也用ATPase 染色法對(duì)肌纖維進(jìn)行了分型，得出圈養(yǎng)條件下蘇尼特羊背最長(zhǎng)肌的氧化型（Ⅰ型+Ⅱa 型）肌纖維比例不及放牧方式下的高[25]。

2.4 三種飼養(yǎng)方式下蘇尼特羊MyHC mRNA 相對(duì)表達(dá)量的差異比較

由圖2 可知，舍飼羊背最長(zhǎng)肌的MyHCⅠmRNA相對(duì)表達(dá)量顯著低于放牧羊和放牧+補(bǔ)飼羊（P＜0.05），MyHCⅡbmRNA 相對(duì)表達(dá)量顯著高于放牧羊和放牧+補(bǔ)飼羊（P＜0.05）；放牧羊MyHCⅡa、MyHCⅡxmRNA 相對(duì)表達(dá)量顯著高于放牧+補(bǔ)飼羊和舍飼羊（P＜0.05）。

圖2 三種飼養(yǎng)方式下MyHC mRNA 相對(duì)表達(dá)量的差異Fig.2 Differences of MyHC mRNA relative expression under three typical feeding patterns注：不同小寫字母表示同一指標(biāo)不用飼養(yǎng)方式下差異顯著P＜0.05，圖3 同。

依據(jù)MyHCs 差異表達(dá)的分子分型法比組織化學(xué)染色法能更為準(zhǔn)確的對(duì)肌纖維類型進(jìn)行劃分，可分為MyHCⅠ、Ⅱa、Ⅱb和Ⅱx型4 類亞基，據(jù)此將肌纖維分為Ⅰ型（慢速氧化型）、Ⅱa 型（快速氧化型）、Ⅱx 型（中間型）和Ⅱb 型（快速酵解型）[3]。本實(shí)驗(yàn)對(duì)ATPase 組化染色的結(jié)果進(jìn)行分析，得出舍飼組酵解型肌纖維比例最高，氧化型肌纖維的比例最低，而放牧組與此相反。MyHCmRNA 表達(dá)量測(cè)定的結(jié)果與ATPase 染色法結(jié)果基本是一致的。肌肉的剪切力值與肌纖維直徑和橫截面積呈顯著正相關(guān)[26?27]，王莉關(guān)于牦牛嫩度與肌纖維類型分布之間的關(guān)系上的研究得出，肌肉中氧化型肌纖維分布越廣，肌肉中的嫩度也就越好[28]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，三種飼養(yǎng)方式中各型肌纖維直徑和橫截面積的趨勢(shì)為舍飼組>放牧+補(bǔ)飼組>放牧組，且舍飼羊酵解型肌纖維比例相較放牧和放牧補(bǔ)飼方式下的蘇尼特羊較高，氧化型纖維比例低，所以全舍飼羊肉的嫩度不及放牧和放牧+補(bǔ)飼羊。pH0的差異性表現(xiàn)為放牧組高于舍飼組，放牧+補(bǔ)飼組與舍飼組無(wú)差異，在排酸24 h 后，放牧組和放牧+補(bǔ)飼組pH24h小于舍飼組，這可能是由于舍飼羊肌肉中的酵解型肌纖維比例較高，酵解型肌纖維中因?yàn)樘窃控S富，糖酵解潛力高，所以在宰后加速了糖酵解速率，使得pH 下降和回升速率快，最終加快了肉的成熟速度。侯普馨[26]在對(duì)蘇尼特羊的肉品質(zhì)研究中指出，pH24h與Ⅰ型肌纖維的比例存在顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)論相一致。肌纖維的分析結(jié)果與不同飼養(yǎng)方式下肉品質(zhì)分析結(jié)果大體吻合，因此，舍飼、放牧+補(bǔ)飼和放牧三種飼養(yǎng)方式下羊肉品質(zhì)存在差異的內(nèi)在原因極可能是肌肉中肌纖維特性不同而造成的。

2.5 三種飼養(yǎng)方式下蘇尼特羊MDH、LDH、SDH 活力的差異比較

據(jù)圖3 可知，放牧組和放牧+補(bǔ)飼組背最長(zhǎng)肌MDH 活力顯著高于舍飼組（P＜0.05），放牧組LDH活力極顯著低于舍飼組和放牧+補(bǔ)飼組（P＜0.01），放牧組SDH 活力極顯著高于舍飼組和放牧+補(bǔ)飼組（P＜0.01）。

圖3 三種飼養(yǎng)方式下蘇尼特羊代謝酶活力的差異Fig.3 Differences of metabolic enzyme activity under three typical feeding patterns

肌纖維類型組成與肌肉相關(guān)代謝酶密切相關(guān)，因此本試驗(yàn)檢測(cè)了LDH、MDH 和SDH 活力。氧化型肌纖維為骨骼肌提供能量的主要途徑是有氧氧化，因此SDH、MDH 等有氧代謝酶系活力很高，肌肉氧化代謝能力與酶活力成正相關(guān)關(guān)系[29]。酵解型肌纖維主要的能量供應(yīng)途徑是無(wú)氧酵解，LDH 等酵解酶系活力高低可以反映機(jī)體細(xì)胞無(wú)氧酵解過(guò)程的活躍情況[30]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步說(shuō)明舍飼的方式提高了肌肉的酵解代謝酶活力，降低了氧化代謝酶活力，而放牧和放牧+補(bǔ)飼的方式下都能不同程度的提高肌肉的氧化代謝酶活力，降低酵解代謝酶活力，這個(gè)結(jié)果與舍飼方式下酵解型肌纖維比例高、氧化型肌纖維比例低這一結(jié)果是一致的。

3 結(jié)論

與純自然放牧方式相比，舍飼和放牧后補(bǔ)充精料方式下的蘇尼特羊凈肉質(zhì)量、胴體質(zhì)量、凈肉率、屠宰率等多項(xiàng)屠宰性能和胴體品質(zhì)指標(biāo)有不同水平的提高，這說(shuō)明舍飼方式和放牧后補(bǔ)充精料對(duì)改善蘇尼特羊的生長(zhǎng)性能有積極作用。同時(shí)舍飼組酵解型肌纖維比例最高，放牧組、放牧+補(bǔ)飼組氧化型肌纖維比例較高。此外，放牧方式增強(qiáng)了氧化代謝酶SDH 活力，降低了酵解代謝酶LDH 活力。即放牧和放牧補(bǔ)充精料的飼養(yǎng)方式均能夠增強(qiáng)機(jī)體氧化代謝能力，上調(diào)氧化型肌纖維比例，提高肉的嫩度，延長(zhǎng)肉的成熟時(shí)間。

綜上，本研究的結(jié)果表明純自然放牧方式下的蘇尼特羊屠宰性能和胴體品質(zhì)方面不及舍飼和放牧+補(bǔ)飼方式，本研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)論為今后在調(diào)整飼養(yǎng)方式方面，如通過(guò)控制舍飼羊的運(yùn)動(dòng)量和飼糧角度提升羊肉品質(zhì)建立了理論依據(jù)。

此外，本研究對(duì)于三種飼養(yǎng)方式間肉品質(zhì)和肌纖維的差異只進(jìn)行了初步實(shí)驗(yàn)，影響肌纖維特性變化的通路十分復(fù)雜，受到多種因素的共同作用，需要進(jìn)一步結(jié)合細(xì)胞、分子實(shí)驗(yàn)找出調(diào)控肌纖維特性的關(guān)鍵因子。