閩西地區(qū)HLA-B27基因分型檢測在脊柱關(guān)節(jié)炎中的應用研究

李曼 謝永欣 張洪彬 張滿娥 巫永蘭 曾憲林 盧志華

【摘 要】目的：調(diào)查閩西地區(qū)脊柱關(guān)節(jié)炎（SpA）患者與健康人群中人類白細胞抗原B27（HLA-B27）及基因亞型的分布情況，探討不同亞型與疾病表型的關(guān)系。方法：采用聚合酶鏈式反應-序列特異性引物法（PCR-SSP）定性檢測全血樣本中人類白細胞抗原HLA-B*2704、HLA-B*2705等HLA-B27等位基因；采用SPSS 23.0軟件分析數(shù)據(jù)。結(jié)果：①SpA患者及對照組中HLA-B27陽性率分別為76.89%和8%，2組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）；②共檢出5個HLA-B27基因亞型，分別為HLA-B*2702、HLA-B*2704、HLA-B*2705、HLA-B*2708、HLA-B*2710，以HLA-B*2704基因亞型最常見。③在SpA中，HLA-B27陽性患者的起病年齡、發(fā)病至確診時間均明顯小于HLA-B27陰性患者，且SpA家族史比例更高（P < 0.05）。④在SpA中，HLA-B*2705陽性組指（趾）炎、外周關(guān)節(jié)炎發(fā)生率顯著高于HLA-B*2704陽性組（P < 0.05）。結(jié)論：①閩西地區(qū)漢族人群HLA-B27與SpA密切相關(guān)，以HLA-B*2704基因亞型為主，可作為本地區(qū)SpA診斷的重要依據(jù)。②在SpA患者中，HLA-B27陽性患者起病年齡更小，SpA家族史陽性率更高，在亞型分布上HLA-B*2705陽性組指（趾）炎、外周關(guān)節(jié)炎比例更高，為本地區(qū)SpA患者預測病情提供幫助。

【關(guān)鍵詞】 強直性脊柱炎；脊柱關(guān)節(jié)炎；人類白細胞抗原B27；基因分型檢測；閩西地區(qū)

Application of HLA-B27 Genotyping in the Diagnosis of Spinal Arthritis in Western FujianLI Man，XIE Yong-xin，ZHANG Hong-bin，ZHANG Man-e，WU Yong-lan，ZENG Xian-lin，LU Zhi-hua

【ABSTRACT】Objective：To investigate the distribution of HLA-B27 and its subtypes in patients with spinal arthritis（SpA）and healthy people in Western Fujian，and to explore the relationship between different subtypes and disease phenotype.Methods：HLA-B27 alleles such as human leukocyte antigen HLA-B*2704 and HLA-B*2705 in whole blood samples were qualitatively detected by PCR-SSP.Software SPSS 23.0 was used to analyze the data.Results：①The positive rates of HLA-B27 in the SpA patients and the control group were 76.89% and 8% respectively.The difference between the two groups was statistically significant（P < 0.05）;②Five HLA-B27 gene subtypes were detected，including HLA-B*2702，HLA-B*2704，HLA-B*2705，HLA-B*2708，and HLA-B*2710，with HLA-B*2704 gene subtype being the most common.③In SpA patients，the age of onset and the time from onset to diagnosis of the HLA-B27 positive ones were significantly lower than those of the HLA-B27 negative ones，and the proportion of family history of SpA was higher（P < 0.05）.④In SpA patients，the incidence of finger（toe）inflammation and peripheral arthritis in the HLA-B*2705 positive group was significantly higher than that in the HLA-B*2704 positive group（P < 0.05）.Conclusion：①HLA-B27 is closely related to SpA in the Han population in this region，mainly HLA-B*2704 genotype，which can be used as an important basis for?the diagnosis of SpA in this region.②Among?SpA patients，HLA-B27 positive patients were younger at onset，had a higher positive rate of family history of SpA，and had a higher proportion of finger（toe）inflammation and peripheral arthritis in the subtype distribution of HLA-B*2705 positive group，which provided help for the prediction of SpA patients' condition in?this region.

【Keywords】 ankylosing spondylitis;spinal arthritis;Human leukocyte antigen B27;genotyping;Western Fujian

脊柱關(guān)節(jié)炎（spondyloarthhritis，SpA）是一組與人類白細胞抗原B27（HLA-B27）相關(guān)的多系統(tǒng)慢性炎癥性疾病，包括中軸型脊柱關(guān)節(jié)炎（axial SpA，ax-SpA）［包括強直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）和放射學陰性中軸型脊柱關(guān)節(jié)炎（non-radiographic axial SpA，nr-axSpA）］、反應性關(guān)節(jié)炎（reactive arthritis，ReA）/萊特綜合征、銀屑病關(guān)節(jié)炎（psoriatic arthritis，PsA）、炎性腸病性關(guān)節(jié)炎（arthropathy of inflammatory bowel disease，IBD）、未分化脊柱關(guān)節(jié)炎（undifferentiated spondyloarthritis，USpA）、幼年型脊柱關(guān)節(jié)炎（juvenile spondyloarthritis，JSpA）［1］。HLA-B27及基因亞型在不同種族人群及地域中分布不同，甚至在我國不同地域的研究結(jié)果也存在差異［2-3］。因此，建立區(qū)域HLA-B27等位基因與SpA的關(guān)聯(lián)性，有助于確定疾病易感性的B27基因亞型。筆者采用聚合酶鏈式反應-序列特異性引物（PCR-SSP）基因檢測法對閩西地區(qū)人群中SpA和健康人群標本進行HLA-B27等位基因分型檢測，調(diào)查閩西地區(qū)SpA患者HLA-B27等位基因亞型分布情況，探討HLA-B27亞型與SpA臨床特征的關(guān)系，以闡明特異的遺傳變異在SpA發(fā)病過程中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2020年1月至2021年12月在龍巖市第二醫(yī)院風濕科、康復科、骨科診斷明確的SpA患者212例（均為本地區(qū)漢族人種）為SpA組，其中男150例，女62例；年齡10～65歲，平均（32.26±13.19）歲；病程3～85個月，平均（67.34±8.19）個月。符合2010年國際SpA評估工作組（ASAS）制定的SpA分類診斷標準［4］，排除慢性炎性背痛、慢性腰肌勞損、感染性疾病及腫瘤性疾病。包括AS 98例、JSpA 20例、ReA 34例、USpA 36例、PsA 24例。選擇同期與SpA患者的年齡、性別相匹配的健康體檢者200例（均為漢族人種，排除慢性炎性背痛及SpA家族史，且相互之間無血緣關(guān)系）為對照組，其中男143例，女57例；年齡18～67歲，平均（38.17±15.92）歲。2組在性別、年齡等方面比較，差異無統(tǒng)計學意義（P < 0.05），具有可比性。抽血前2組均進行研究目的告知，并簽署知情同意書。本研究獲得龍巖市第二醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 研究方法 HLA-B27基因分型檢測：采用聚合酶鏈式反應-序列特異性引物法（PCR-SSP）定性檢測法。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 23.0軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以表示，組間比較采用t檢驗，若符合正態(tài)分布，方差不齊時，采用秩和檢驗；計數(shù)資料采用χ2檢驗；當理論數(shù)P < 5時，使用Fisher確切概率法檢驗。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 HLA-B27基因亞型在2組中的分布情況

212例SpA患者中，HLA-B27陽性163例（76.89%）；200例對照組中，HLA-B27陽性16例（8.00%）。2組比較，差異有統(tǒng)計學意義（χ2 = 38.725，P = 0.000 < 0.05）。本研究共檢出5個HLA-B27亞型，HLA-B*2702、HLA-B*2704、HLA-B*2705、HLA-B*2708、HLA-B*2710，以HLA-B*2704為主；SpA組和對照組的HLA-B27基因亞型構(gòu)成比較，差異有統(tǒng)計學意義（χ2 = 10.085，P = 0.039 < 0.05）。見表1。

2.2 HLA-B27基因亞型在SpA患者疾病分布情況 212例SpA患者中，HLA-B27陽性163例，其中AS組87例，JSpA組14例，PsA組16例，ReA組21例，USpA組25例。SpA所有疾病中，除ReA外，均以HLA-B*2704亞型分布最廣，其次是HLA-B*2705；AS組及PsA組未檢測出HLA-B*2710，PsA組及ReA組未檢測出HLA-B*2708。見表2。

2.3 HLA-B27陽性與陰性SpA患者的特點比較 212例SpA患者中，HLA-B27陽性163例，HLA-B27陰性49例。統(tǒng)計檢驗顯示，各組年齡符合正態(tài)分布、方差不齊，采用秩和檢驗，HLA-B27陽性者起病年齡、發(fā)病至確診時間均明顯小于HLA-B27陰性，而SpA家族史明顯高于HLA-B27陰性（P < 0.05），但年齡、病程、幼年發(fā)病型和晚發(fā)型比例差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05）。見表3。

2.4 HLA-B*2704陽性與HLA-B*2705陽性患者的一般資料比較 212例SpA患者中，HLA-B27陽性163例，其中HLA-B*2704陽性率63.19%（103/163），HLA-B*2705陽性率28.83%（47/163），兩者比較，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）；可見本地區(qū)SpA中HLA-B*2704為優(yōu)勢基因亞型；HLA-B*2705陽性組的指（趾）炎、外周關(guān)節(jié)炎發(fā)生率顯著高于HLA-B*2704陽性組，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。其他臨床特征如性別比、年齡、起病年齡、病程、骶髂關(guān)節(jié)炎、SpA家族史，2組差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05）。見表4。

3 討 論

HLA-B27是位于人類第6號染色體短臂HLA基因B座上的Ⅰ類組織相容復合體基因，在進化過程中呈現(xiàn)豐富多態(tài)性，HLA-B27陽性是診斷SpA的重要依據(jù)［5］。本研究采用PCR-SSP基因定性檢測方法，可以減少傳統(tǒng)抗原檢測方法帶來的假陰性，提高臨床檢出率，減少漏診。既往研究顯示，HLA-B*2704是亞洲人群AS的主要致病基因，而HLA-B*2706和HLA-B*2709是SpA的保護基因，HLA-B*2705是全球分布最廣、最早的祖先亞型［6］。不同基因亞型的致病性差異與環(huán)境、遺傳、種族、地域和人口遷徙有關(guān)［7-8］。

本研究顯示，SpA組HLA-B27總陽性率為76.89%，對照組陽性率僅8.00%，兩組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05），證實HLA-B27與SpA發(fā)病相關(guān)，可作為該地區(qū)SpA診斷的重要參考依據(jù)。本研究在本地區(qū)檢出5個HLA-B27基因亞型，其中HLA-B*2704、HLA-B*2705最常見（92.00% vs 68.75%），是本地區(qū)漢族人群的優(yōu)勢基因亞型，與中國大部分地區(qū)類似［9-10］。在SpA疾病譜分布中，除ReA外，均為HLA-B*2704亞型分布最廣，其次是HLA-B*2705。而HLA-B*2702、HLA-B*2708、HLA-B*2710等亞型均較罕見，健康人群中HLA-B*2708陽性率顯著高于SpA組，但本研究樣本量較少，僅檢測出5例HLA-B*2708陽性，尚不足以推斷與疾病的關(guān)系。筆者的研究發(fā)現(xiàn)3例HLA-B*2710，無法確定HLA-B*2710與SpA的相關(guān)性，可能因為HLA-B*2710的流行率太低，可見各亞型在HLA-SpA發(fā)病機制中存在差異。

SpA患者HLA-B27陽性率在各疾病中的分布并不完全相同［11］。本研究可見，在SpA中AS的HLA-B27陽性率最高，其次是JSpA、USpA、PsA、ReA等，進一步揭示這類疾病存在家族聚集性，也表明HLA-B27不是唯一的參與易感性的主要組織相容性抗原復合物基因，目前研究表明，非HLA區(qū)域基因也參與發(fā)?。?2］。本研究進一步分析發(fā)現(xiàn)，HLA-B27基因及亞型在疾病表型上存在差異。研究發(fā)現(xiàn)，在SpA中HLA-B27陽性組起病年齡較小，發(fā)病至確診時間較短，且該組SpA家族史明顯高于HLA-B27陰性，提示有SpA家族史的HLA-B27陽性患者發(fā)病年齡更小，筆者的研究與既往早期axSpA隊列研究中結(jié)果一致［13］。臨床應該高度重視HLA-B27陽性有SpA家族史的年輕患者，一旦出現(xiàn)癥狀，應盡早診斷采取有效治療措施。在亞型分布上，因本研究中HLA-B*2702、HLA-B*2708、HLA-B*2710的數(shù)量很少，為避免偏差，臨床特征僅在HLA-B*2704和HLA-B*2705陽性SpA患者中進行比較。筆者發(fā)現(xiàn)HLA-B*2705陽性組的指（趾）炎、外周關(guān)節(jié)炎發(fā)生率顯著高于HLA-B*2704陽性組，提示HLA-B*2705可能很容易侵犯外周關(guān)節(jié)。而WU等［14］在廣州地區(qū)所做的研究報道，HLA-B*2704陽性的AS患者起病年齡早于HLA-B*2705陽性的患者，HLA-B*2705的AS患者較HLA-B*2704陽性患者患葡萄膜炎和趾炎的風險更高。筆者既往研究也顯示，在AS患者中，HLA-B*2705亞型患者外周關(guān)節(jié)炎和髖關(guān)節(jié)受累比例更高，而HLA-B*2704亞型SpA家族史、炎性腰背痛比例更低［15］。因此，建立區(qū)域HLA-B27亞型和SpA臨床表現(xiàn)關(guān)系的研究很有意義。

SpA是一組寡（多）基因遺傳性疾病，發(fā)病機制復雜。本研究開展HLA-B27基因亞型與SpA的關(guān)系研究，僅揭示本地區(qū)部分遺傳變異在疾病中的作用，希望為從基因水平探討疾病發(fā)病機制提供幫助。

參考文獻

［1］ 楊戈，陳雪，司英奎，等.強直性脊柱炎的研究進展［J］.中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠程教育，2011，9（24）：161-169.

［2］ 劉持翔，劉冬冬，黃常健.中國人群HLA-B*27基因亞型與強直性脊柱炎的相關(guān)性研究［J］.醫(yī)療裝備，2019，31（11）：41-45.

［3］ LIN H，GONG YZ.Association of HLA-B27 with ankylosing spondylitis and clinical features of the HLA-B27-associated ankylosing spondylitis：a Meta-analysis［J］.Rheumatol Int，2017，37（8）：1267-1280.

［4］ KHAN MA.Update：the twenty subtypes of HLA-B27［J］.Curr Opin Rheumatol，2000，12（4）：235-238.

［5］ RUDWALEIT M.New approaches to diagnosis and classification of axial and peripheral spondyloart-hritis［J］.Curr Opin Rheumatol，2010，22（4）：375-380.

［6］ PETERSDORF E.The HLA complex in biology and medicine：a resource book［J］.Bone Marrow Transplantation，2010，46（4）：625-625.

［7］ 王少華，鞠淑艷，于春洋，等.HLA-B27實驗室檢測在血清陰性脊柱關(guān)節(jié)病診斷中的意義［J］.風濕病與關(guān)節(jié)炎，2014，3（11）：39-41.

［8］ 張志堅，袁方，梁飛，等.中國北方漢族人群中HLA-B27基因多態(tài)性與強直性脊柱炎的關(guān)聯(lián)研究［J］.中國輸血雜志，2019，25（3）：213-216.

［9］ 熊春翔，衛(wèi)小春，尹東，等.強直性脊柱炎早發(fā)髖關(guān)節(jié)強直與HLA-B27基因亞型的易感性研究［J］.中國組織工程研究，2019，23（23）：3710-3715.

［10］ 黃建新，伍嚴安，黃毅，等.福州地區(qū)漢族人群強直性脊柱炎患者HLA-B27基因亞型分布及臨床意義［J］.中外醫(yī)學研究，2018，16（34）：9-11.

［11］ 余建林，譚立明，蔣永清，等.HLA-B27基因亞型與漢族人群強直性脊柱炎遺傳易感性的研究［J］.中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志，2019，29（13）：60-63.

［12］ DAVIDSON SI，LIU Y，DANOY PA，et al.Association of STAT3 and TNFRSF1A with ankylosing spondylitis in Han Chinese［J］.Ann Rheum Dis，2011，70（2）：289-292.

［13］ CHUNG H，YIN MACHADO P，VAN DER DE SIRE，et al.HLA-B27 positive patients differ from HLA-B27 negative patients in clinical presentation and imaging：results from the DESIR cohort of patients with recent onset axial spondyloarthritis［J］.Ann Rheum Dis，2011，70（1）：1930-1931.

［14］ WU Z，LIN Z，WEI Q，et al.Clinical features of ankylosing spondylitis may correlate with HLA-B27 polymorphism［J］.Rheumatol Int，2009，29（4）：389-392.

［15］ 李曼，謝永欣.龍巖地區(qū)HLA-B27基因亞型與強直性脊柱炎臨床特征分析［J］.中國醫(yī)學創(chuàng)新，2021，18（36）：166-170.

收稿日期：2022-04-14；修回日期：2022-06-03

基金項目：龍巖市聯(lián)合資金項目（2020LYF17052）

作者單位：龍巖市第二醫(yī)院，福建 龍巖 364000

通信作者：謝永欣 福建省龍巖市新羅區(qū)北城雙洋西路8號，fjlyxieyx@126.com