梁美艷 鐘水橋

摘 要：本文建立一種利用Captiva EMR-Lipid固相萃取結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜同時(shí)分析魚(yú)肉中20種藥物殘留的方法。樣品經(jīng)0.1%冰醋酸-乙腈提取，Captiva EMR-Lipid固相萃取柱凈化，UPLC-MS/MS測(cè)定，采用電噴霧離子源，正離子掃描，動(dòng)態(tài)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式檢測(cè)，外標(biāo)法定量。20種農(nóng)藥殘留在各自范圍內(nèi)具有較好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r均大于0.995，平均回收率在84.0%～116.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.2%～5.8%。該方法快速、準(zhǔn)確、靈敏，適用于魚(yú)肉中多種農(nóng)藥殘留的檢測(cè)。

關(guān)鍵詞：超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法;農(nóng)藥;魚(yú)肉

Captiva EMR-Lipid Technology Combined with UPLC-MS/MS for Rapid Screening and Confirmation of Multiple Pesticide Residues in Fish

LIANG Meiyan， ZHONG Shuiqiao*

（Wuzhou Institute for Food and Drug Control， Wuzhou 543000， China）

Abstract： In this paper， a method was established for the simultaneous analysis of 20 drug residues in fish meat using Captiva EMR-Lipid solid-phase extraction combined with ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry. The samples were extracted with 0.1% formic acid-acetonitrile solution， then purified by solid-phase extraction column of Captiva EMR-Lipid， finally detected by UPLC-MS/MS with electrospray ionization source in positive ion scanning under dynamic multi-reaction monitoring mode， quantified by external method. The 20 kinds of pesticide residues have good linear relationship in their respective ranges with correlation coefficients more than 0.995. The average recoveries of 20 pesticides were 84.0%～116.4% with the relative standard deviations of 0.2%～5.8%. The method is fast， accurate and sensitive， and is suitable for the detection of various pesticide residues in fish.

Keywords： ultra performance liquid chromatography/tandem mass spectrometry; pesticides; fish meat

農(nóng)藥殘留分析是對(duì)復(fù)雜混合物中痕量組分進(jìn)行分析的技術(shù)，具有微量操作精細(xì)、靈敏度高以及特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。目前能快速篩查與確證農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法主要有氣質(zhì)聯(lián)用色譜法[1]、液質(zhì)聯(lián)用色譜法[2-3]

和高分辨質(zhì)譜法[4-5]。這3種檢測(cè)方法抗干擾能力強(qiáng)，靈敏度、精密度、準(zhǔn)確度都較高。液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于蔬菜、水果、茶葉、肉類和中藥材等產(chǎn)品的農(nóng)藥殘留檢測(cè)中，被檢測(cè)的農(nóng)藥種類也越來(lái)越多[6-8]。近年來(lái)，新發(fā)展起來(lái)的Captiva EMR-Lipid固相萃取柱，通過(guò)空間位阻和親水性的協(xié)同作用，對(duì)于C5及以上碳鏈化合物具有極強(qiáng)的選擇性吸附，可以在去除干擾脂質(zhì)的同時(shí)不吸附目標(biāo)物，因而具有良好的凈化效果。該凈化技術(shù)主要用于獸藥殘留檢測(cè)，應(yīng)用于肉類中農(nóng)藥殘留檢測(cè)研究較少[9-12]。本研究以Captiva EMR-Lipid為凈化手段，并用液相質(zhì)譜聯(lián)用儀對(duì)魚(yú)肉中20種農(nóng)藥殘留進(jìn)行了快速篩查和定量分析。該方法的凈化效果好、靈敏度高，能夠滿足魚(yú)肉中多種農(nóng)藥篩查確證工作的需要。

1 材料與方法

1.1 材料

魚(yú)肉，采購(gòu)于當(dāng)?shù)爻小?/p>

1.2 試劑

乙腈（HPLC級(jí)），德國(guó)Merck公司;無(wú)水乙酸鈉，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;EMR-Lipid（3 mL/300 mg），安捷倫科技有限公司;氧化樂(lè)果、涕滅威亞砜、多菌靈、久效磷、涕滅威砜、滅多威、噻蟲(chóng)嗪、殺蟲(chóng)脒、敵百蟲(chóng)、3-羥基克百威、噻蟲(chóng)胺、吡蟲(chóng)啉、樂(lè)果、氯噻啉、啶蟲(chóng)脒、硫環(huán)磷、涕滅威、磷胺、苯線磷亞砜和西瑪津（純度>95.0%），德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司。

1.3 主要儀器設(shè)備

LC-1290/QQQ-6490液相質(zhì)譜聯(lián)用儀，Agilent technology;XA205DU電子分析天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司;BSA3202S電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司;T18 digital均質(zhì)器，德國(guó)IKA;AllegraX-15R高性能通用臺(tái)式離心機(jī)，美國(guó)貝克曼公司。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備

①標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液的配制。分別精密稱取20種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品適量，加入少量丙酮振蕩溶解后，用乙腈定容，配制成約1.0 mg·mL-1的20種農(nóng)藥單標(biāo)儲(chǔ)備液。②混合工作液的配制。準(zhǔn)確量取上述儲(chǔ)備液適量，乙腈逐級(jí)稀釋，制備成濃度為37～2 032 ng·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，4 ℃保存。

1.4.2 樣品前處理

稱取5 g試樣，精確至0.01 g，于50 mL離心管中，加入10 mL 0.2%甲酸乙腈，均質(zhì)5 min，加入2 g無(wú)水乙酸鈉、4 g無(wú)水硫酸鎂，振蕩2 min，8 000 r·min-1離心5 min，取上清液2 mL過(guò)EMR-Lipid凈化柱，收集洗脫液，再用2 mL乙腈淋洗，收集洗脫液，合并洗脫液，40 ℃氮吹至近干，用20%乙腈定容至2 mL，0.22 ?m濾膜過(guò)濾，供LC-MS/MS測(cè)定。

1.4.3 儀器條件

（1）色譜條件。色譜柱：Agilent SB-C18（2.1×100 mm，1.8 μm）;進(jìn)樣量：1 ?L;柱溫：35 ℃;流動(dòng)相：0.2%甲酸水（含5 mmol甲酸銨）（A相）和乙腈（B相）;梯度洗脫程序：0～1.50 min，20% B;1.50～8.00 min，20%→90% B;8.00～10.00 min，90% B;后運(yùn)行時(shí)間：3 min;流速：0.30 mL·min-1。

（2）質(zhì)譜參數(shù)。電噴霧離子源（ESI）;動(dòng)態(tài)多反應(yīng)檢測(cè)DMRM模式;碎裂電壓380 V。離子對(duì)參數(shù)見(jiàn)表1。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性范圍及定量限、檢出限

試驗(yàn)選取陰性魚(yú)肉作為空白基質(zhì)，分別稱取7份（每份5 g），按照樣品前處理方法進(jìn)行操作，氮吹近干后分別加入混合工作液10 ?L、20 ?L、40 ?L、80 ?L、160 ?L、200 ?L和400 ?L，20%乙腈定容至2 mL后進(jìn)行分析。結(jié)果表明，20種農(nóng)藥在各自范圍內(nèi)都具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r均大于0.995。記錄各待測(cè)組分色譜峰面積，以各組分的進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)（X），以各組分的峰面積為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行回歸分析，以10倍信噪比對(duì)應(yīng)的濃度作為方法定量限（S/N=10），以3倍信噪比對(duì)應(yīng)的濃度作為方法檢出限（S/N=3），各農(nóng)藥的LOD及LOQ結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2 回收率及精密度

在魚(yú)肉空白樣品中添加約1倍、2倍、5倍LOQ的20種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按“1.4.2”方法進(jìn)行前處理，每個(gè)濃度做3個(gè)平行樣，得到方法平均回收率及精密度結(jié)果見(jiàn)表2。20種農(nóng)藥殘留的平均回收率為84.0%～116.4%，RSD為0.2%～5.8%。

2.3 討論

2.3.1 色譜條件的優(yōu)化

試驗(yàn)對(duì)常用流動(dòng)相甲醇-水、甲醇-0.2%甲酸水、甲醇-0.2%甲酸水（含5 mmol·L-1甲酸銨）、乙腈-水、乙腈-0.2%甲酸水和乙腈-0.2%甲酸水（含5 mmol·L-1甲酸銨）等進(jìn)行了考察，發(fā)現(xiàn)使用乙腈-0.2%甲酸水（含5 mmol·L-1甲酸銨）溶液體系時(shí)，各成分洗脫效果好、峰形對(duì)稱以及靈敏度明顯提高，故選擇乙腈-0.2%甲酸水（含5 mmol·L-1甲酸銨）溶液作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫。

2.3.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

由于DMRM模式可以智能化地分配離子掃描時(shí)間，并且能夠同時(shí)兼顧靈敏度與數(shù)據(jù)采集質(zhì)量，適用于高通量、多組分化合物的分析，本試驗(yàn)采用動(dòng)態(tài)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（DMRM）進(jìn)行檢測(cè)。

2.3.3 樣品提取方法優(yōu)化

樣品提取液用0.2%甲酸乙腈進(jìn)行均質(zhì)提取，因在酸性提取環(huán)境中有利于各農(nóng)藥成分的穩(wěn)定。試驗(yàn)分別考察了不同量上清液過(guò)EMR-Lipid凈化柱對(duì)結(jié)果的影響。稱取5 g試樣，精確至0.01 g，于50 mL離心管中，加入10 mL 0.2%甲酸乙腈，均質(zhì)5 min，加入2 g無(wú)水乙酸鈉、4 g無(wú)水硫酸鎂，振蕩2 min，8 000 r·min-1離心5 min，分別取上清液2 mL、5 mL過(guò)EMR-Lipid凈化柱，收集洗脫液，再用2 mL乙腈淋洗，收集洗脫液，合并洗脫液，40 ℃氮吹至近干，用20%乙腈分別定容至2 mL、5 mL。結(jié)果表明，2 mL提取液過(guò)柱后采用動(dòng)態(tài)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（DMRM）進(jìn)行檢測(cè)，各成分回收率穩(wěn)定且在允許范圍內(nèi)，而5 mL提取液過(guò)柱后部分成分的回收率達(dá)到150%以上，故選2 mL上清液過(guò)柱。

3 結(jié)論

本文采用Captiva EMR-Lipid為凈化手段，結(jié)合液相質(zhì)譜聯(lián)用儀對(duì)魚(yú)肉中20種農(nóng)藥殘留進(jìn)行了快速篩查和定量分析。結(jié)果表明，該方法不僅具有前處理簡(jiǎn)單、操作方便和凈化除脂效果好等優(yōu)點(diǎn)，還具有分離效果好、分析快速、檢出限低、靈敏度和精密度高等特點(diǎn)，適用于對(duì)魚(yú)肉中20種農(nóng)藥殘留的檢測(cè)。

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