丹皮酚抑制磷脂酰肌醇激酶通路及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子增強(qiáng)對(duì)卵巢癌細(xì)胞放療敏感性研究

周海梅 趙娟紅 張海艷

【關(guān)鍵詞】卵巢癌;丹皮酚;放療敏感性;磷脂酰肌醇激酶通路

【中圖分類(lèi)號(hào)】R711.75 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】2026-5328（2022）03--01

卵巢癌是常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤之一，死亡率及轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)率較高。卵巢癌起病較為隱匿，大多數(shù)患者在確診時(shí)已是晚期，此時(shí)手術(shù)治療已難以徹底清除病灶，需要采取規(guī)范性放化療。但臨床研究[1]顯示放化療易出現(xiàn)耐藥性，且接受規(guī)范性放化療后患者仍有60%的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，因此，需要尋求新的高效、耐敏性抗腫瘤藥物進(jìn)行治療。丹皮酚屬于中藥牡丹皮的主要活性成分。藥理學(xué)研究[2]表明，牡丹皮中藥用成分具有解熱、抗炎、鎮(zhèn)痛及中樞抑制等作用。此外丹皮酚還具有較好的抗腫瘤活性。本研究將分析丹皮酚可通過(guò)抑制磷脂酰肌醇激酶（PI3K）通路及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）增強(qiáng)對(duì)卵巢癌細(xì)胞放療敏感性的作用與機(jī)制，現(xiàn)報(bào)告如下。

1材料與方法

1.1細(xì)胞及其培養(yǎng)

人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3由中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)提供。培養(yǎng)條件：將SKOV3細(xì)胞培養(yǎng)于含10%的胎牛血清、鏈霉素及青霉素均為1×105U/L的RPMI-1640培養(yǎng)基中，于5% CO2、37 ℃的條件下培養(yǎng)。

1.2主要試劑及儀器

MTT試劑盒、RNA試劑盒及抗β-actin抗體和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記山羊抗小鼠IgG（H+L）抗體（Sigma公司）、小鼠抗人p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT抗體（Santa Cruz公司）、兔抗人VEGF一抗（Santa Cruz公司）、羊抗兔紅外熒光二抗（武漢Boster生物工程有限公司）。

1.3方法

1.3.1分組及干預(yù)方法

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期SKOV3細(xì)胞接種于96孔板上，密度為3×108/孔，隨機(jī)分為空白組、放療組、放療+丹皮酚組，每組5個(gè)復(fù)孔。于80%細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)時(shí)，空白組不予任何處理;放療組予以直線加速器4 Gy X射線照射，源皮距設(shè)為80 cm，劑量率設(shè)為300 cGy/min;放療+丹皮酚組予以終濃度30 μmol/L的丹皮酚干預(yù)24 h后，再進(jìn)行4 Gy X射線照射。

1.3.2MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率

分別于培養(yǎng)24、48、72 h時(shí)各組細(xì)胞每孔加入0.5%的MTT培養(yǎng)液20 μL，繼續(xù)孵育4 h后，棄去原培養(yǎng)液，將150 μL的二甲基亞砜加入，震蕩混勻至液體澄清，測(cè)定570 nm處的吸光度（A）值，計(jì)算細(xì)胞存活率。細(xì)胞存活率（%）=干預(yù)組A值/空白組A值×100%。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS21.0軟件分析處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以x±s表示，多樣本計(jì)量資料比較以單因素方差分析進(jìn)行，兩兩樣本比較以LSD-t檢驗(yàn)進(jìn)行。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1各組細(xì)胞存活率比較

各組細(xì)胞存活率隨時(shí)間延長(zhǎng)而下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;與放療組比較，放療+丹皮酚組不同時(shí)刻存活率更低（P<0.05）。

2.2各組細(xì)胞凋亡情況比較

空白組、放療組及放療+丹皮酚組的凋亡率分別為（4.25±1.03）%、（19.45±3.24）%、（35.65±5.33）%，3組凋亡率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=55.524，P<0.001）;與空白組比較，放療組及放療+丹皮酚組凋亡率更高（t空白組VS放療組=7.744，P<0.01;t空白組VS放療組+丹皮酚組=10.018，P<0.01），與放療組比較，放療組+丹皮酚組細(xì)胞凋亡率更高（t=4.498，P<0.05）。

3討論

卵巢癌發(fā)病率居于婦科惡性腫瘤第二位，美國(guó)國(guó)家綜合癌癥網(wǎng)將外科手術(shù)后進(jìn)行化療或手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)較高患者直接化療推薦為晚期卵巢癌的標(biāo)準(zhǔn)治療方案[3]。但化療后腫瘤多藥耐藥及其化療后的不良反應(yīng)仍是目前臨床治療上亟需解決的首要問(wèn)題。癌細(xì)胞放療抵抗的發(fā)生可能與多種分子調(diào)節(jié)機(jī)制相關(guān)，故了解卵巢癌放療抵抗的分子機(jī)制變化，對(duì)于腫瘤放療的分子靶向治療研究具有積極意義。

綜上所述，本研究丹皮酚對(duì)卵巢癌細(xì)胞具有較高的放射敏感性，主要機(jī)制可能與丹皮酚可抑制PI3K/AKT信號(hào)通路激活有關(guān)。

參考文獻(xiàn)：

[1] ?張蓓蕾， 李怡， 吳濤，等. 基于聚多巴胺納米載體的卵巢癌放化療協(xié)同治療研究[J]. 現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展， 2019， 28（12）：881-886.

[2] ?劉陽(yáng)欣， 趙鋒， 康秉濤，等. 丹皮酚藥理學(xué)研究進(jìn)展[J]. 陜西中醫(yī)， 2020， 41（4）：550-552.

[3] 喬恩奇， 陳道寶， 楊紅健，等. miR-150基于PI3K/Akt信號(hào)通路調(diào)控乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)特性的研究[J]. 中國(guó)婦幼保健， 2019， 34（16）：3805-3809.

（編輯 胡懷富）

基金項(xiàng)目：山東省醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（2019WS143）

作者簡(jiǎn)介：周海梅，女，本科，副主任醫(yī)師，趙娟紅，女，碩士，副主任醫(yī)師，研究方向：婦產(chǎn)科疾病診治。