張瑞華 焦玉霞
(1濰坊職業(yè)學(xué)院,山東濰坊261041;2萊蕪陳毅中學(xué),山東濟(jì)南271100)
枝條菌種以接種速度快、方便、接種后上中下多點(diǎn)萌發(fā),料袋內(nèi)菌絲長(zhǎng)滿袋時(shí)間較傳統(tǒng)的栽培種提早5~10 d 而備受青睞[1]。猴頭菇是典型木腐菌[2],采用較短袋裝料時(shí),多用枝條菌種接種料袋,而常規(guī)固體菌種培養(yǎng)枝條菌種需55~60 d。筆者介紹用猴頭菇液體菌種接種枝條培養(yǎng)基培養(yǎng)猴頭菇枝條菌種技術(shù),為猴頭菇枝條菌種的生產(chǎn)提供技術(shù)指導(dǎo)。
液體菌種培養(yǎng)基配方:土豆200 g,紅糖20 g,玉米粉5 g,麩皮10 g,加水1 000 mL。
按照配方稱(chēng)取各原料。土豆去皮挖芽眼,切丁放入鍋內(nèi),麩皮用紗布包裹好放入鍋內(nèi),倒入1 200 mL 水,煮開(kāi)后計(jì)時(shí)20 min 后,8 層紗布過(guò)濾,取濾液1 000 mL,若不足,用水補(bǔ)足;將濾液倒入鍋內(nèi)繼續(xù)加熱,將提前用少量涼水拌好的玉米粉倒入鍋內(nèi),繼續(xù)加熱7~8 min,倒入紅糖,徹底融化后,將濾液裝入錐形瓶,每瓶裝液量不超過(guò)其容積的三分之二,并在錐形瓶中放入磁力攪拌子。培養(yǎng)基于121.1 ℃高壓滅菌30 min,冷卻至30 ℃以下接試管種,每瓶接入6~7 塊綠豆粒大小的基內(nèi)菌絲。接種完后置于1 000 r/min 的磁力攪拌器上碎菌種約24 h(目的是形成多個(gè)萌發(fā)點(diǎn),有利于培養(yǎng)的菌球均勻一致);后再放入恒溫振蕩培養(yǎng)箱,溫度22 ℃,轉(zhuǎn)速150 r/min,培養(yǎng)約7 d,菌球密度適中時(shí)備用。
振蕩培養(yǎng)液體菌種期間,若出現(xiàn)絮狀菌球,可以再次放到1 000 r/min 磁力攪拌器上,碎菌種約24 h。
培養(yǎng)猴頭菇枝條菌種一般選擇闊葉樹(shù)枝條,以楊木枝條較佳,規(guī)格為長(zhǎng)12~15 cm,寬0.4~0.7 cm,厚0.4~0.7 cm。
枝條需要提前浸泡(圖1),浸泡時(shí)間24~36 h,氣溫20 ℃以上時(shí),浸泡時(shí)間要縮短,可24~28 h(為防止pH 下降太快,浸泡時(shí)可加入0.5%~1%的生石灰),氣溫15 ℃以下時(shí)要延長(zhǎng)浸泡時(shí)間,30~36 h 不等。浸泡合格的標(biāo)準(zhǔn)是掰開(kāi)枝條沒(méi)有白心,浸泡完畢后瀝干水分備用(圖2)。
圖1 枝條整袋浸泡
圖2 枝條瀝水
瀝干水分的枝條表面裹上麩皮(圖3),以提高接種后菌種萌發(fā)速度。
圖3 裹麩皮
猴頭菇枝條菌種培養(yǎng)基由枝條和輔料配制而成,輔料營(yíng)養(yǎng)較枝條豐富,可以加快發(fā)菌速度。配制輔料的配方較多,如棉籽殼80%,麩皮14%,玉米粉3%,豆粕2%,石膏1%,料含水量62%~65%,pH6~7。
選擇15 cm×(33~35)cm×0.005 cm 聚丙烯塑料袋,先裝入1~3 cm 厚的輔料,目的是防止枝條刺破袋底;再沿袋壁整齊裝入枝條(滅菌時(shí)不會(huì)刺破袋,方便取枝條菌種),一般每袋裝枝條40~60 根;而后再裝入輔料,輔料蓋住枝條,厚1~2 cm(圖4)。
圖4 裝好的枝條包
培養(yǎng)猴頭菇枝條菌種要采用窩口的方式封口,如若用套環(huán)蓋封口,容易形成老菌皮,菌絲不再吃料(圖5)。而采用接種棒窩口的方式封口(圖6),接種后塞入海綿,可有效避免出現(xiàn)發(fā)菌不滿的情況。
圖5 套環(huán)蓋發(fā)菌狀態(tài)(效果不好)
圖6 窩口后插入接種棒
料袋倒放在滅菌筐中(倒放可有效防止滅菌過(guò)程中蒸汽大量在料袋中存留,避免導(dǎo)致培養(yǎng)基水分含量過(guò)高,接種后料袋缺氧,菌絲生長(zhǎng)不利),123~128 ℃高壓滅菌60~90 min。
在超凈工作臺(tái)、接種箱或接種室接種。將料袋、液體菌種及接種工具放入超凈工作臺(tái)、接種箱或接種室中。若用超凈工作臺(tái)接種,噴灑75%酒精,提前30 min 打開(kāi)風(fēng)機(jī)和紫外燈凈化空氣和殺菌;若用接種室接種,提前30 min 打開(kāi)高效過(guò)濾器和紫外燈,使操作空間的空氣潔凈程度達(dá)到百級(jí)水平;若用接種箱接種,提前用3%~5%來(lái)蘇爾噴灑箱內(nèi)空間,再用二氯異氰尿酸鈉煙熏劑熏蒸[3],煙熏劑劑量為5 g/m3。
接種所用的工具都應(yīng)消毒,接種時(shí)一人拔接種棒,一人將液體菌種倒入,每袋接種量約15 mL,隨后塞上滅菌海綿(不要用棉花,棉花營(yíng)養(yǎng)較豐富,后期會(huì)在棉花處形成原基)。
接種后料包放于溫度22~24 ℃,空氣相對(duì)濕度60%~70%培養(yǎng)室,無(wú)光照培養(yǎng),約17~20 d菌絲可長(zhǎng)滿料包(圖7)。
圖7 培養(yǎng)好猴頭菇枝條菌種
枝條菌種接種栽培袋(裝料高20 cm,料濕重1 300 g 左右,料含水量63%~65%)后,15~16 d 從外部可以看到菌絲,25~27 d 菌絲長(zhǎng)滿栽培袋(圖8)。
圖8 接種22 d后發(fā)菌狀態(tài)