王福財 ， 王淑芳 ， 白天俊

(天?？h動物疫病預(yù)防控制中心 ， 甘肅 天祝 733299)

岔口驛馬是我國擅走“胎里帶”對側(cè)步的優(yōu)良地方走馬品種[1]，產(chǎn)于甘肅省武威市天祝藏族自治縣。該地區(qū)是甘肅省九大牧區(qū)之一，轄區(qū)內(nèi)岔口驛馬和牛羊在同一草原混合放牧現(xiàn)象較為普遍。天?？h動物疫病預(yù)防控制中心實施“天祝白牦牛疫病綜合防控技術(shù)研究推廣項目”時,對天祝白牦牛血液原蟲病傳播媒介進行了調(diào)查，經(jīng)中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所鑒定，天?？h轄區(qū)內(nèi)有青海血蜱和銀盾革蜱2種蜱類生存繁殖，牛羊血液原蟲病在天?？h各鄉(xiāng)鎮(zhèn)均有不同程度感染。馬梨形蟲病(Equine piroplasmosis，EP，又稱馬巴貝斯蟲病、馬焦蟲病)主要是由駑巴貝斯蟲(Babesiacaballi,B.caballi)和馬泰勒蟲(Theileriaequi,T.equi,又稱馬巴貝斯蟲Babesiaequi,B.equi)寄生于馬紅細胞而引起的一種經(jīng)媒介蜱傳播的馬屬動物血液原蟲病[2-4]，通常表現(xiàn)為發(fā)熱、黃疸、貧血以及呼吸困難等癥狀[4-5],患馬瘦弱，影響生產(chǎn)性能，急性病例可引起持續(xù)的長期感染[6],嚴重的可導(dǎo)致死亡[7]。該病廣泛分布于世界各地[5]，但尚未見岔口驛馬產(chǎn)區(qū)內(nèi)EP流行病學(xué)調(diào)查相關(guān)文獻報道。為掌握岔口驛馬產(chǎn)區(qū)內(nèi)EP感染情況，制定科學(xué)防控措施，本課題組對華藏寺鎮(zhèn)等16個鄉(xiāng)鎮(zhèn)養(yǎng)殖的岔口驛馬按照占養(yǎng)殖量約10%的比例，隨機采集馬血清510份，用ELISA方法進行B.equi和B.caballi的抗體檢測，并對抗體陽性率高的鄉(xiāng)鎮(zhèn)和養(yǎng)殖量最大的打柴溝鎮(zhèn)的馬匹進行血液蟲體檢查。

1 材料與方法

1.1 主要試劑 馬巴貝斯蟲抗體檢測試劑盒(批號：EQB.e-1005)和馬駑巴比斯蟲抗體檢測試劑盒(批號：EQB.c-1005)，均購自Kernel.Inc公司，于2～8 ℃存儲備用。

1.2 主要儀器 酶標(biāo)儀、精密移液器、量筒量杯。

1.3 主要方法

1.3.1 樣品準備 獸醫(yī)專業(yè)技術(shù)人員對16個鄉(xiāng)鎮(zhèn)共510匹馬空腹頸靜脈進行無菌采血，完成采血后統(tǒng)一置于獸醫(yī)實驗室室溫下自然析出血清，收集血清，-20 ℃冷凍保存待檢。待檢血清務(wù)必保證清亮,避免使用溶血以及被污染樣品。

1.3.2 試驗準備 在使用前所有試劑需恢復(fù)到室溫20～25 ℃，提前預(yù)熱恒溫孵育設(shè)備；用19體積的蒸餾水稀釋1體積的20×洗板液，得到1×洗板液；在血清稀釋板上使用樣品稀釋液將樣品血清稀釋40倍，備用；1份原液與24份酶標(biāo)稀釋液混合，得到酶標(biāo)工作液，使用前根據(jù)實際用量現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.3.3 試驗操作 試驗前1 h將試劑盒從冷凍冰箱中取出回復(fù)室溫。采用馬巴貝斯蟲抗體檢測試劑盒和馬駑巴貝斯蟲抗體檢測試劑盒進行檢測，按照試劑盒說明書步驟操作。

1.3.4 馬血液涂片鏡檢 天祝縣每年的3～4月份、8～9月份是蜱蟲爬上宿主體的季節(jié)。2021年3月份底，在全縣蜱蟲較多且抗體檢測陽性率最高的天堂、賽什斯2個鎮(zhèn)和岔口驛馬養(yǎng)殖規(guī)模最大的打柴溝鎮(zhèn)采集馬耳尖血推片120份，甲醇固定，染色鏡檢，同時統(tǒng)計感染率。血推片采樣以馬匹身上有蜱蟲為主。

1.4 抗體檢測結(jié)果判斷標(biāo)準 樣品S/P值=(樣品OD值÷陽性對照OD值)×100%。有效性：陰性對照的S/P值必須<30%,陽性對照的平均OD值必須≥0.4。陰性：樣品的S/P值<65%，樣品血清中抗體陰性。陽性：樣品的S/P值>65%，樣品血清中抗體陽性。

2 結(jié)果

2.1 抗體檢測 各鄉(xiāng)鎮(zhèn)的抗體檢測結(jié)果見表1。結(jié)果顯示，510份馬血清中檢測出B.equi抗體陽性數(shù)為34份，陽性率為6.67%；B.caballi抗體陽性數(shù)為38份，陽性率為7.45%。

表1 抗體檢測結(jié)果

2.2 血推片蟲體鏡檢 蟲體檢出情況見表2。120份血推片樣本中，B.equi蟲體檢出樣品數(shù)為5份，蟲體檢出率為4.17%，視野中蟲體長度小于紅細胞半徑，這是與其他血液原蟲蟲體區(qū)分的特征之一。80%蟲體呈圓點狀，個別似橢圓狀，紅細胞里有1個或2個蟲體。有蟲體感染的血推片中，紅細胞染蟲率約為35%左右。B.caballi蟲體檢出樣品數(shù)為4份，蟲體檢出率為3.33%，蟲體長度大于紅細胞半徑，多數(shù)呈梨形，多呈2個存在，多數(shù)平行排列。有蟲體感染的血推片中，紅細胞染蟲率達到20%左右。在天堂鎮(zhèn)的1份血液樣品中同時發(fā)現(xiàn)B.equi和B.caballi蟲體。

表2 蟲體檢出情況統(tǒng)計表

3 討論

3.1 據(jù)文獻報道，EP廣泛分布于世界各地[5]，在甘肅省隴東南地區(qū)該病呈局域性流行[8]。新疆西部、吉林省東部等地抽樣檢測的抗體陽性率(感染率)分別達到40%[9]、34%[10]。馬利青研究[11]發(fā)現(xiàn)，青海省海西地區(qū)EP廣泛傳播，抗體陽性率為30.65%。本調(diào)查檢測結(jié)果顯示，岔口驛馬產(chǎn)區(qū)B.equi抗體陽性率為6.67%，B.caballi抗體陽性率為7.45%；血推片蟲體檢查結(jié)果顯示，3個鄉(xiāng)鎮(zhèn)B.equi和B.caballi總檢出率分別為4.17%和3.33%。綜上所述，岔口驛馬產(chǎn)區(qū)內(nèi)馬群EP抗體陽性率低于上述地區(qū)，16個鄉(xiāng)鎮(zhèn)中除毛藏鄉(xiāng)、炭山嶺鎮(zhèn)、石門鎮(zhèn)、祁連鎮(zhèn)、大紅溝鄉(xiāng)外，其他鄉(xiāng)鎮(zhèn)均有B.equi或B.caballi感染史或馬群中存在感染現(xiàn)象，但本次調(diào)查樣本數(shù)量有限，覆蓋面不夠，并不能完全代表本地區(qū)EP感染程度和流行情況，只表明該地區(qū)有EP感染現(xiàn)象，因此，針對不同季節(jié)、年齡、性別、畜別等感染規(guī)律和流行病學(xué)特點進行調(diào)查研究十分必要，如全面掌握EP在岔口驛馬產(chǎn)區(qū)的感染和流行情況，還需要做進一步深入研究。

3.2 岔口驛馬產(chǎn)區(qū)馬群有EP感染史或正在受EP感染，這與轄區(qū)內(nèi)革蜱活躍，岔口驛馬完全暴露在該病威脅的環(huán)境中等情形相吻合。近幾年，隨著馬產(chǎn)業(yè)和賽馬等傳統(tǒng)馬文化的發(fā)展，馬匹流動頻繁，跨區(qū)域調(diào)運、交易呈現(xiàn)頻發(fā)勢頭，跨區(qū)域參加各地藏區(qū)傳統(tǒng)賽馬會現(xiàn)象多見，也為該病的發(fā)生和傳播提供了可能。另外，有文獻報道稱EP也可經(jīng)胎盤感染，引起流產(chǎn)或胎兒感染[12]。

3.3 天?？h位于青藏、內(nèi)蒙、黃土三大高原交匯地帶，境內(nèi)海拔處于2 040～4 874 m，年降水量為260～630 mm，年平均氣溫為-1～1.3 ℃，無絕對無霜期，東西跨度大，南北狹長，各鄉(xiāng)鎮(zhèn)氣候差異大，賽什斯、天堂等莫科片區(qū)鄉(xiāng)鎮(zhèn)氣候較溫暖濕潤，尤其是天堂鎮(zhèn)，俗稱天?？h的“小江南”，適宜蜱蟲生存繁殖，其傳播的牛羊血液原蟲病較為嚴重，天祝牧區(qū)各種牲畜存在混牧現(xiàn)象，長期以來因馬屬動物疫病發(fā)生率低，廣大養(yǎng)殖戶馬匹預(yù)防性驅(qū)蟲等防疫意識淡薄，致使馬群中受各種寄生蟲侵襲，馬匹抵抗力下降，加上該病具有帶蟲免疫現(xiàn)象[13]，有一定的隱蔽性，畜主很容易造成麻痹大意，為EP在該地區(qū)的傳播提供了便利條件。EP的地理分布與蜱的區(qū)系分布有關(guān)，蜱蟲作為傳播媒介,在該病的流行中有著十分重要的作用。蜱蟲種類眾多并且分布范圍較廣，有研究表明，有4個品種可在發(fā)病高峰期傳播，9個品種可在排卵時期傳播B.caballi[14]，EP的傳播流行取決于蜱的傳播能力，有文獻報道，隨著蜱蟲活動能力的下降,EP的流行也漸漸停止[15]。天?？h屬高寒牧區(qū)，每年3～4月份、8～9月份是蜱蟲活躍期，充分了解蜱蟲的生長繁殖、感染規(guī)律、生長分布規(guī)律等情況，對全面掌握EP感染和科學(xué)防控等有著非常重要的意義。在岔口驛馬EP綜合防控中分片區(qū)制定防控措施意義重大，可有效控制該病在岔口驛馬產(chǎn)區(qū)的傳播流行，減少養(yǎng)殖損失。不同片區(qū)有計劃地實行劃區(qū)輪牧、不同畜種間輪牧和計劃性休牧制度，可起到保護草場和減少感染的作用。如何采取控蜱、檢疫、預(yù)防性驅(qū)蟲等綜合防控措施還需進一步研究并試驗推廣。