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      火麻油水解提取多酚工藝優(yōu)化及多酚對(duì)線蟲行為能力的影響

      2022-07-14 12:45:18姚鑒芯張哲皓劉元法徐勇將
      關(guān)鍵詞:麻油行為能力酶法

      姚鑒芯,張哲皓,張 帥,劉元法,徐勇將*

      (1.江南大學(xué) 食品學(xué)院,江蘇 無錫 214122;2.中國(guó)焙烤食品糖制品工業(yè)協(xié)會(huì),北京 100833)

      火麻(Cannabis sativa L.),俗稱大麻、線麻、山絲苗等,??疲舐閷?,一年生草本植物?;鹇榈闹饕煞譃橹舅帷⒋舐樗匾约耙恍┨妓衔锖臀⒘吭豙1-2]。火麻油可由火麻子直接壓榨而得,油呈黃綠色且具有特殊的清香。根據(jù)干燥時(shí)烘箱的溫度差異,壓榨可分為冷榨和熱榨,熱榨油比冷榨油顏色更深。除此之外,還可通過加水酶解和溶劑浸出的方式得到火麻油。水酶法和浸出法制得的火麻油顏色較清亮,比壓榨制油的色澤更好,但是出油率更低一些。不同加工方式制備的火麻油在總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)、理化指標(biāo)、感官評(píng)定等方面都有差異,尋求一種綜合評(píng)定較好且更具發(fā)展前景的加工方式,可以得到品質(zhì)更優(yōu),更符合當(dāng)下健康飲食需求的火麻油產(chǎn)品。

      火麻油含有酚類化合物及生育酚,其抗氧化活性因?yàn)檫@類活性物質(zhì)的存在而提高。研究發(fā)現(xiàn),酚類物質(zhì)可以有效預(yù)防一些慢性疾病,如肥胖、高血壓、高血脂、心腦血管疾病等,對(duì)癌癥、炎癥等疾病的抵抗與治療也發(fā)揮著積極作用[3-4]。植物油中酚類物質(zhì)的存在,使得油脂的氧化穩(wěn)定性較好,儲(chǔ)藏期相對(duì)較長(zhǎng),可以長(zhǎng)久地保持油的穩(wěn)定色澤與感官品質(zhì)[5]。不同加工方式制油測(cè)得的酚類化合物含量不同,其中水酶法和熱榨制油總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高,同時(shí),水酶法制油的呈色明顯優(yōu)于熱榨制油,如果對(duì)其進(jìn)行工藝優(yōu)化,有望成為較理想的制油方法。

      熱榨、冷榨、水酶、浸出4種制油方式中,水酶法制油兼具環(huán)境友好、有益副產(chǎn)物多、安全性高、反應(yīng)條件溫和、節(jié)能、無有機(jī)溶劑殘留、總酚含量高等優(yōu)點(diǎn),有利于環(huán)境保護(hù)和提升油脂品質(zhì)[6]。為得到營(yíng)養(yǎng)價(jià)值更高的油脂產(chǎn)品,作者選擇Alacalase 2.4 L蛋白酶水解火麻子,提取火麻油,以總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)為優(yōu)化指標(biāo),用單因素實(shí)驗(yàn)對(duì)加酶量、液料比、酶解pH 3個(gè)影響因素進(jìn)行研究,并用響應(yīng)面法進(jìn)行優(yōu)化[7]。

      以總酚為指標(biāo)優(yōu)化水酶法提油工藝后,需進(jìn)一步檢驗(yàn)其可行性:包括方法選擇的生物適用性與酚類物質(zhì)的生物活性作用。秀麗隱桿線蟲(Caenorhabditis elegans)是一種以細(xì)菌為食的多細(xì)胞動(dòng)物,對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境要求不高,有較強(qiáng)的環(huán)境抵抗力,適用于實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)條件,被國(guó)際公認(rèn)為脂質(zhì)代謝的模式生物之一。秀麗隱桿線蟲具有很多研究?jī)?yōu)點(diǎn):如生長(zhǎng)周期短,蟲體結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單;在顯微鏡下呈透明狀,便于染色和觀察;和人體具有40%以上的同源性基因,發(fā)育繁殖快,后代多且易于保存;遺傳背景清晰,進(jìn)化高度保守;培育方式簡(jiǎn)單,成本低廉等[1,3,8-9]。因此,選擇秀麗隱桿線蟲作為研究的模式生物。

      對(duì)于線蟲這類模式生物而言,選擇合適的模型用于研究,才更易于檢驗(yàn)活性成分的功能。氧化損傷是一些惡性疾病發(fā)展與生命體衰老的重要原因,活性氧ROS和抗氧化防御系統(tǒng)的不穩(wěn)定狀態(tài)會(huì)引起機(jī)體的過氧化,破壞細(xì)胞并產(chǎn)生病理性蛋白質(zhì)[3,10-12]。近年來,已有多種具有抗氧化功能的物質(zhì)用于研究治療線蟲的氧化應(yīng)激損傷,如紅茶、蝦青素、海帶提取物中的對(duì)百草枯、姜黃素類化合物等[13-16]。根據(jù)酚類物質(zhì)在油脂中的抗氧化作用,推測(cè)不同加工方式制取的火麻油因總酚含量的差異會(huì)對(duì)線蟲氧化應(yīng)激損傷起到不同的治療效果。因此,選擇H2O2溶液處理同步化生長(zhǎng)的野生型線蟲,模擬線蟲內(nèi)源性的氧化應(yīng)激損傷[10-12],建立線蟲運(yùn)動(dòng)缺陷模型,將其轉(zhuǎn)移至涂布不同加工方式所得火麻油的培養(yǎng)基上,待幼蟲成年后,測(cè)定其行為能力,探究加工方式以及油中的酚類物質(zhì)對(duì)線蟲的影響。

      1 材料與方法

      1.1 實(shí)驗(yàn)材料

      1.1.1 原料與試劑火麻子:購自廣西壯族自治區(qū)巴馬瑤族自治縣;Alacalase 2.4 L蛋白酶:諾維信生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品;野生型秀麗隱桿線蟲、大腸桿菌E.coli OP50:來自江南大學(xué)孫秀蘭教授實(shí)驗(yàn)室;質(zhì)量分?jǐn)?shù)30%H2O2溶液、二甲基亞砜、乙醇、甲醇、正己烷、氯化鈉、胰蛋白胨、瓊脂、碳酸鈉、NaOH、鹽酸、氯化鈣、硫酸鎂、磷酸鉀、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、福林酚、膽固醇、酵母粉(均為分析純):國(guó)藥化學(xué)試劑集團(tuán)產(chǎn)品;二醇基固相萃取(Diol-SPE)小柱:上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份公司產(chǎn)品。

      1.1.2 設(shè)備與儀器FD56干燥箱:德國(guó)Binder公司產(chǎn)品;DF-8L氮吹設(shè)備:杭州德爾克設(shè)備有限公司產(chǎn)品;YX-18HDD蒸汽滅菌鍋:蘇州奧普實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司產(chǎn)品;scientz-IID超聲波細(xì)胞破碎儀:寧波新芝生物科技公司產(chǎn)品;mini-240紫外分光光度計(jì):美國(guó)Zeiss公司產(chǎn)品;SW-CJ-1FD-Ⅱ生物安全柜:蘇凈安泰有限公司產(chǎn)品;ME204E電子天平:梅特勒-托利多儀器有限公司產(chǎn)品;S8專業(yè)商用榨油機(jī):東莞香聚智能有限公司產(chǎn)品;旭曼800Y高速多功能粉碎機(jī):永康市鉑歐五金制品有限公司產(chǎn)品;5804R高速離心機(jī):德國(guó)Eppendorf公司產(chǎn)品;RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器:上海亞榮生化儀器廠產(chǎn)品;HH.S11-2電熱恒溫水浴鍋:上海博迅醫(yī)療生物儀器股份有限公司產(chǎn)品;RW20DS025攪拌器:上海翼悾機(jī)電有限公司產(chǎn)品;VGA/USB/AV三合一接口CCD顯微鏡:上海韌躍電子科技有限公司產(chǎn)品。

      1.2 實(shí)驗(yàn)方法

      1.2.1 不同加工方法提取火麻油

      1)冷榨制油 取火麻子1 000 g在60℃烘箱中干燥10 h,冷卻后送入螺桿壓榨機(jī)壓榨,設(shè)置榨膛溫度為120℃。收集的毛油以5 000 r/min離心10 min,取上清液倒入50 mL離心管,用封口膜封好,保存在4℃冰箱中備用。

      2)熱榨制油 取火麻子1 000 g在100℃烘箱中干燥3 h,冷卻后送入螺桿壓榨機(jī)壓榨,設(shè)置榨膛溫度為120℃。收集的毛油以5 000 r/min離心10 min,取上清液倒入50 mL離心管,用封口膜封好,保存在4℃冰箱中備用。

      3)水酶法制油 取火麻子1 000 g在40℃烘箱中干燥12 h,放入粉碎機(jī)粉碎。取300 g火麻子粉,按料液比1 g∶5 mL加入蒸餾水并攪拌均勻,調(diào)節(jié)體系pH為8.5,添加8%(質(zhì)量分?jǐn)?shù),以火麻子質(zhì)量計(jì))Alacalase 2.4 L蛋白酶,放入60℃水浴鍋以135 r/min恒溫?cái)嚢瑁附? h后升溫至90℃滅酶10 min,冷卻至室溫,8 000 r/min離心30 min,取出上層游離油,置于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

      4)浸出提油 火麻子在40℃烘箱干燥12 h后,放入粉碎機(jī)粉碎,取300 g粉末,加入正己烷(料液比1 g∶5 mL)后,用攪拌儀恒速攪拌過夜,靜置過濾,在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中蒸出溶劑,收集油液。

      1.2.2 水酶法提油單因素實(shí)驗(yàn)

      1)加酶量對(duì)火麻油總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響 在料液比1 g∶5 mL,體系pH 8.5,恒溫60℃攪拌,酶解3 h,90℃滅酶10 min,8 000 r/min離心30 min的條件下,分別考察加酶量為2%、4%、6%、8%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))時(shí),火麻油中的總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

      2)料液比對(duì)火麻油總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響 在加酶量8%(質(zhì)量分?jǐn)?shù)),體系pH 8.5,恒溫60℃攪拌,酶解3 h,90℃滅酶10 min,8 000 r/min離心30 min的條件下,分別考察料液比為1 g∶3 mL、1 g∶4 mL、1 g∶5 mL、1 g∶6 mL時(shí),火麻油中的總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

      3)pH對(duì)火麻油總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響 在加酶量8%(質(zhì)量分?jǐn)?shù)),料液比為1 g∶5 mL,恒溫60℃攪拌,酶解3 h,90℃滅酶10 min,8 000 r/min離心30 min的條件下,分別考察體系pH為6.5、7.5、8.5、9.5時(shí),火麻油中的總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

      1.2.3 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)基于單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果,設(shè)計(jì)主要影響因素的水平取值范圍。采用響應(yīng)面中心復(fù)合實(shí)驗(yàn),觀察各酶解參數(shù)對(duì)優(yōu)化指標(biāo)的影響規(guī)律。以加酶量、料液比、pH為自變量,以火麻油中總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)為響應(yīng)值,實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)見表1。

      1.2.4 火麻油中總酚含量測(cè)定用10 mL甲醇和10 mL正己烷活化Diol-SPE柱。在離心管中稱取3.0 g火麻油,加入5 mL正己烷,振蕩1 min使其溶解,沿萃取柱管壁加入后,用10 mL正己烷洗柱,棄去全部淋洗液。用10 mL甲醇溶液洗脫,洗脫液在氮?dú)庀麓蹈珊蠹尤?.0 mL甲醇復(fù)溶,經(jīng)0.22μm濾膜過濾后置于樣品瓶中[12]。在15 mL離心管中加入1 mL火麻油多酚提取物、0.5 mL福林酚試劑、2 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)7.5%的碳酸鈉溶液和6.5 mL去離子水,渦旋振蕩2 min混勻。將反應(yīng)物置于70℃水浴鍋中加熱30 min,溶液將由無色變藍(lán)色。在750 nm波長(zhǎng)下測(cè)定溶液吸光度,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算火麻油中總酚的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

      表1 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)表Table 1 Factors and levels of response surface methodology

      1.2.5 線蟲實(shí)驗(yàn)線蟲培養(yǎng)基(nematode growth medium,NGM):3 g NaCl、2.5 g蛋白胨、17 g瓊脂、25 mL的1 mol/L磷酸鉀緩沖液、975 mL去離子水,121℃滅菌20 min后,加入1 mL的1 mol/L MgSO4溶液、1 mL的1 mol/L CaCl2溶液、1 mL膽固醇溶液(5 mg/mL無水乙醇配制)。

      M9緩 沖 液:3 g KH2PO4、15.1 g Na2HPO4、5 g NaCl、1 mL的1 mol/L MgSO4溶液,加去離子水至1 L,搖勻后121℃滅菌20 min。

      5 mg/mL火麻油溶液(4種加工方式制得):在10 mL離心管中加入40 mg油液和8μL二甲基亞砜,加去離子水至8 mL,渦旋混勻后,使用超聲波細(xì)胞破碎儀充分破碎濁液,至不分層為止。

      1)線蟲生長(zhǎng)同步化 用M9緩沖液將培養(yǎng)基表面的成蟲沖洗至1.5 mL離心管中,離心后棄上清液,再用M9緩沖液清洗兩遍,留500μL緩沖液于離心管內(nèi)。然后加入500μL的裂解液(M9緩沖液、5 mol/L NaOH溶液、質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%NaClO溶液體積比為7∶2∶1)混勻,用M9洗滌沉淀3次,去除殘存的裂解液,最終得到的沉淀即為蟲卵。

      2)運(yùn)動(dòng)缺陷模型建立 配制10 mmol/mL H2O2溶液,待蟲卵在M9緩沖液中孵育16 h成長(zhǎng)為L(zhǎng)1期幼蟲后,轉(zhuǎn)移到1.5 mL離心管中,6 500 r/min離心2 min后棄上清液,留下500μL的液體,加入H2O2溶液至1 mL,實(shí)際的H2O2溶液處理濃度為5 mmol/mL,混勻后在24孔板中浸泡1 h。

      3)培養(yǎng)分組 線蟲培養(yǎng)一共分10組,2組培養(yǎng)基不涂油,另外8組培養(yǎng)基分別涂布熱榨油、冷榨油、浸出油和水酶法得油,每種油涂布2個(gè)平板,共得到5種處理方式的培養(yǎng)基,每種培養(yǎng)基分別轉(zhuǎn)入運(yùn)動(dòng)缺陷的L1期幼蟲和正常幼蟲。

      4)線蟲行為能力測(cè)定 頭部擺動(dòng)頻率測(cè)定:在空白的NGM培養(yǎng)基上滴加50μL M9緩沖液,挑取線蟲到緩沖液中,待線蟲在緩沖液中穩(wěn)定1 min后,用顯微鏡拍攝,錄制視頻,數(shù)出線蟲1 min內(nèi)頭部往返擺動(dòng)的次數(shù),每組測(cè)定20條。身體彎曲頻率測(cè)定:挑取線蟲到空白的NGM培養(yǎng)基上,待線蟲恢復(fù)穩(wěn)定1 min后,用顯微鏡拍攝,錄制視頻,20 s內(nèi)記錄線蟲身體彎曲的次數(shù),每組測(cè)定20條。

      1.3 數(shù)據(jù)處理

      采用Excel、SPSS 28.0和Design-Expert 8.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

      2 結(jié)果與分析

      2.1 水酶法提取火麻油單因素實(shí)驗(yàn)

      2.1.1 加酶量對(duì)火麻油總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響在料液比1 g∶5 mL,體系pH 8.5,恒溫60℃攪拌,酶解3 h,8 000 r/min離心30 min的條件下,考察加酶量對(duì)火麻油中總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響,結(jié)果見圖1。隨著加酶量的增加,火麻油中總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)先升高后下降,當(dāng)加酶量4%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))時(shí),總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)明顯高于其他組。隨著酶量增多,酶與底物相互作用,使酶功能進(jìn)一步發(fā)揮,分解油脂顆粒內(nèi)部的脂蛋白與脂多糖,釋放油脂[6],進(jìn)而使得多酚物質(zhì)充分溶出;當(dāng)加酶量進(jìn)一步增加,酶與底物的作用位點(diǎn)逐漸達(dá)到飽和,降低了溶出率。故響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)中,加酶量選擇質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%~4%。

      圖1 加酶量對(duì)火麻油總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響Fig.1 Effect of enzyme dosage on total phenol content of hemp seed oil

      2.1.2 料液比對(duì)火麻油總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響在加酶量8%(質(zhì)量分?jǐn)?shù)),體系pH 8.5,恒溫60℃攪拌,酶解3 h,8 000 r/min離心30 min的條件下,考察料液比對(duì)火麻油中總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響,結(jié)果見圖2。料液比在1 g∶3 mL~1 g∶5 mL時(shí),火麻油中總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)上升;在1 g∶5 mL~1 g∶6 mL時(shí),總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)明顯下降。適量的水可促進(jìn)酶解作用,隨著水分增多,酶反應(yīng)體系中的酶濃度和底物濃度降低,分子碰撞概率減小,酶作用效果降低,使酚類物質(zhì)難以溶出[13];水量過少時(shí),料液黏度較大,酶與底物流動(dòng)受到阻滯,油中的物質(zhì)難以分解出來。因此,響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中,料液比選擇1 g∶4 mL~1 g∶6 mL。

      圖2 料液比對(duì)火麻油總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響Fig.2 Effect of solid-liquid ratio on total phenol mass fraction of hemp seed oil

      2.1.3 pH對(duì)火麻油總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響在加酶量8%(質(zhì)量分?jǐn)?shù)),料液比為1 g∶5 mL,恒溫60℃攪拌,酶解3 h,8 000 r/min離心30 min的條件下,考察體系pH對(duì)火麻油中總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響,結(jié)果見圖3。隨著體系pH增加,火麻油中總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)先上升后下降,在pH 8.5附近出現(xiàn)最大值。Alacalase 2.4 L蛋白酶的最適pH為8.5,此時(shí)酶的水解作用最佳,得到的活性物質(zhì)含量最高。因此,響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)中,選擇pH為7.5~9.5。

      圖3 pH對(duì)火麻油總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響Fig.3 Effect of pH on total phenol content of hemp seed oil

      2.2 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

      在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上,選取加酶量(X1)、料液比(X2)、pH(X3)為自變量,火麻油中總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)為響應(yīng)值,進(jìn)行響應(yīng)面實(shí)驗(yàn),結(jié)果見表2。通過軟件Design-Expert 8.0對(duì)表2的數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析,得到的回歸方程為:

      表2 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Table 2 Experimental design and results for response surface analysis

      由表3可知,模型F為9.27,P<0.05(差異顯著),自變量與響應(yīng)值之間有顯著的線性關(guān)系,模型選擇合適。該模型R2=0.965 3,R2Adj=0.861 2,說明模型與實(shí)驗(yàn)擬合性較好。實(shí)驗(yàn)的變異系數(shù)為5.80%,模型置信度較好,說明該方程能很好地反映實(shí)驗(yàn)值的真實(shí)性。各因素對(duì)火麻油總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響大小為:X1>X3>X2,即加酶量>pH>料液比。

      加酶量與料液比、加酶量與酶解pH、料液比與酶解pH的交互作用對(duì)火麻油中總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響見圖4。利用Design-Expert軟件對(duì)模型進(jìn)一步分析,得到最優(yōu)響應(yīng)結(jié)果:加酶量為4.57%(質(zhì)量分?jǐn)?shù)),料液比為1 g∶4.79 mL,pH為8.24,在此條件下,火麻油中總酚的理論預(yù)測(cè)值為67.29 mg/kg。

      在響應(yīng)面分析法求得的最佳條件下,進(jìn)行3次平行實(shí)驗(yàn),測(cè)得火麻油中總酚的3次平均值為65.78 mg/kg,與理論值差距較小,說明實(shí)驗(yàn)結(jié)果與回歸方程的預(yù)測(cè)值吻合性較好。

      表3 回歸方程與方差分析Table 3 Variance analysis for regression equation

      圖4 各因素的交互作用對(duì)火麻油總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響Fig.4 Response surface plots for the interactive effects of different hydrolysis parameters on the total phenol content of hemp seed oil

      2.3 火麻油對(duì)線蟲行為能力的影響

      線蟲的運(yùn)動(dòng)行為能力主要包括頭部擺動(dòng)頻率和身體彎曲頻率,運(yùn)動(dòng)頻率越高,能量消耗越多,機(jī)體代謝加速,會(huì)使脂質(zhì)積累的程度降低[1,14]。實(shí)驗(yàn)采用5 mmol/mL的H2O2溶液處理裂解后同步生長(zhǎng)到L1期的幼蟲,建立運(yùn)動(dòng)缺陷模型,分別用4種加工方式處理的火麻油喂養(yǎng),探究對(duì)線蟲行為能力的影響。培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分組見表4。

      由圖5可知,對(duì)比4種不同加工方式處理后的火麻油可以發(fā)現(xiàn),水酶法和熱榨法制油能夠保持較高的總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù),且明顯高于其他兩組油樣,冷榨法油樣次之,浸出法油樣最低;制備的油樣中,水酶法和浸出法得油色澤較淺,冷榨油顏色較深,熱榨油最深。

      火麻油及其活性成分可以提高大腦組織中多種酶的活性,增加大腦組織的總抗氧化能力,降低神經(jīng)細(xì)胞膜的脂質(zhì)過氧化水平,保護(hù)細(xì)胞膜和腦組織形態(tài)的完整性,增強(qiáng)神經(jīng)系統(tǒng)的功能[1,4]。由圖6可知,H2O2處理組線蟲的行為能力都比正常線蟲低一些。添加火麻油之后,由于油中活性物質(zhì)的影響,可以改善線蟲的行為能力,改善效果依次為:水酶法>熱榨法>冷榨法>浸出法。根據(jù)不同加工方式下火麻油總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定結(jié)果可以得出,火麻油中的多酚活性物質(zhì)確實(shí)可以改善線蟲的行為能力,即使是經(jīng)過H2O2處理的運(yùn)動(dòng)缺陷型線蟲,受到油液中活性物質(zhì)的作用之后,其頭部擺動(dòng)頻率和身體彎曲頻率也有所提高,可見線蟲受到了油及其活性成分的影響,行為能力得到了改善。

      表4 線蟲培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)分組Table 4 Different experimental groups for C.elegans culture

      3 結(jié)語

      選用Alacalase 2.4 L蛋白酶對(duì)火麻子水解,利用響應(yīng)面法進(jìn)行優(yōu)化,得到水酶法提油最佳工藝條件:加酶量為4.57%(質(zhì)量分?jǐn)?shù)),料液比為1 g∶4.79 mL,pH為8.24,在此條件下,火麻油中總酚為65.78 mg/kg。由F檢驗(yàn)可得各因素對(duì)火麻油總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的貢獻(xiàn)順序?yàn)椋篨1>X3>X2,即加酶量>pH>料液比。火麻油中的多酚物質(zhì)可以改善線蟲的運(yùn)動(dòng)行為能力。不同加工方式處理的火麻油總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)依次為:水酶法>熱榨法>冷榨法>浸出法。受到火麻油中活性成分的影響,線蟲行為能力的改善效果也不同,其順序?yàn)椋核阜?熱榨法>冷榨法>浸出法。

      圖5 不同加工方式下火麻油的總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)Fig.5 Total phenol content of different processed hemp seed oils

      圖6 不同加工方式下火麻油對(duì)線蟲行為能力的影響Fig.6 Effects of different processing hemp seed oils on the motor behavior of C.elegans

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