李立恒 王蕊 王芹 張智軼 安峰 張璇 王曉明 張凡

河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院1口腔科，2病理科（河北張家口 075000）

口腔鱗狀細(xì)胞癌（oral squamous cell carcinoma，OSCC）是頭頸部最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，且癌細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移是OSCC 患者死亡的主要原因［1-2］。因此，闡明OSCC 的潛在分子機(jī)制有助于為OSCC 患者確定新的治療策略。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)［3-4］，MicroRNA（miRNA）在包括OSCC 在內(nèi)的人類(lèi)癌癥中異常表達(dá)，且在腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展和轉(zhuǎn)移中起著至關(guān)重要的作用。有研究顯示［5］，位于染色體19q13.41 上的miR-498 在三陰性乳腺癌細(xì)胞中高表達(dá)，下調(diào)miR-498 可抑制三陰性乳腺癌細(xì)胞的增殖；而磷酸烯醇丙酮酸羧激酶1（phosphoenolpyruvate carboxykinase 1，PCK1）作為糖異生途徑中的一個(gè)限速酶，在肝癌細(xì)胞中低表達(dá)，過(guò)表達(dá)PCK1 可抑制肝癌細(xì)胞的增殖［6］。但miR-498 及PCK1 對(duì)OSCC 細(xì)胞生長(zhǎng)的影響尚未見(jiàn)報(bào)道，基于此，本研究主要探討miR-498 對(duì)OSCC 細(xì)胞增殖、凋亡、遷移及侵襲的作用以及內(nèi)部的分子機(jī)制，以期為OSCC 的臨床診治提供新的分子靶標(biāo)。

1 材料與方法

1.1 OSCC 組織和細(xì)胞系 收集2019年2月至2021年2月期間，在本院采用外科切除術(shù)進(jìn)行手術(shù)治療的OSCC 患者的OSCC 組織及與之匹配的癌旁組織，共150 對(duì)。將所有組織標(biāo)本置于液氮中冷凍保存?zhèn)溆茫谢颊呔炇鹬橥鈺?shū)。人OSCC 細(xì)胞系HSC-3、SCC-15、SCC-9 及人正?？谇唤琴|(zhì)細(xì)胞HOK 均購(gòu)自美國(guó)典型菌種保藏中心。

1.2 主要試劑與儀器 miR-498 模擬物（miR-498 mimics）及其陰性對(duì)照（miR-NC）、miR-498 抑制物（anti-miR-498）及其陰性對(duì)照（anti-miR-NC）、siRNA PCK1（si-PCK1）及其陰性對(duì)照（si-NC）、PCK1過(guò)表達(dá)物（OE-PCK1）及其陰性對(duì)照（OE-NC）均購(gòu)自美國(guó)ThermoFisher 公司；LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染試劑盒、胎牛血清（FBS）、DMEM 培養(yǎng)基、BCA試劑盒均購(gòu)自美國(guó)Bio-Rad 公司；PrimeScriptTMRT Master Mix、TransStart?Green qPCR SuperMix 均 購(gòu)自TaKaRa公司；Trizol試劑、ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒均購(gòu)自美國(guó)Sigma 公司；PCK1、GAPDH 兔多克隆抗體（anti-PCK1、anti-GAPDH）、辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的羊抗兔二抗均購(gòu)自美國(guó)Abcam 公司；熒光定量PCR 儀購(gòu)自美國(guó)ABI 公司；CO2培養(yǎng)箱均購(gòu)自德國(guó)SIGMA 公司。

1.3 細(xì)胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染 人OSCC 細(xì)胞系HSC-3、SCC-15、SCC-9 及人正?？谇唤琴|(zhì)細(xì)胞HOK 均在含有10% FBS 的DMEM 培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為37 ℃、5% CO2。收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SCC-15 細(xì)胞，嚴(yán)格按照LipofectamineTM2000 轉(zhuǎn)染試劑盒操作說(shuō)明書(shū)操作步驟對(duì)SCC-15 細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染，并分組為：對(duì)照組（細(xì)胞未轉(zhuǎn)染）、miR-NC 組（miR-NC 轉(zhuǎn)染細(xì)胞）、miR-498 mimics 組（miR-498 mimics 轉(zhuǎn)染細(xì)胞）、anti-miR-NC 組（anti-miR-NC 轉(zhuǎn)染細(xì)胞）、antimiR-498 組（anti-miR-498 轉(zhuǎn)染細(xì)胞）、miR-NC+OENC 組（miR-NC 和OE-NC 共轉(zhuǎn)染細(xì)胞）、miR-NC+OE-PCK1 組（miR-NC 和OE-PCK1 共轉(zhuǎn)染細(xì)胞）、miR-498 mimics+OE-NC 組（miR-498mimics 和OENC 共轉(zhuǎn)染細(xì)胞）、miR-498 mimics+OE-PCK1 組（miR-498 mimics 和OE-PCK1 共轉(zhuǎn)染細(xì)胞）、antimiR-NC+si-NC 組（anti-miR-NC 和si-NC 組共轉(zhuǎn)染細(xì)胞）、anti-miR-NC+si-PCK1 組（anti-miR-NC 和si-PCK1 共轉(zhuǎn)染細(xì)胞）、anti-miR-498+si-NC 組（antimiR-498 和si-NC 共轉(zhuǎn)染細(xì)胞）、anti-miR-498+si-PCK1 組（anti-miR-498 和si-PCK1 共轉(zhuǎn)染細(xì)胞）。

1.4 qRT-PCR 檢測(cè)OSCC 組織及細(xì)胞中miR-498表達(dá)水平 Trizol 試劑用于從OSCC 組織及細(xì)胞中提取總RNA。使用PrimeScriptTMRT Master Mix 合成cDNA，利用TransStart?Green qPCR SuperMix 在ABI 7500 熒光定量PCR 系統(tǒng)上進(jìn)行PCR 擴(kuò)增反應(yīng)，并使用以下引物：miR-498 正向：5′-GGTTTGAAGCCAGGCGGTTTC-3′，反向：5′-CAGTGCAGGGTCCGAGGTAT-3′；U6 正向：5′-CTCGCTTCGGGCAGCACA-3′，反向：5′-AACGCTTTCACGAATTTGCGT-3′。使用2-ΔΔCt方法以U6 作為內(nèi)部對(duì)照計(jì)算miR-498 相對(duì)表達(dá)水平。

1.5 CCK-8 法檢測(cè)細(xì)胞增殖 將各組SCC-15 細(xì)胞以2×104個(gè)/孔的密度接種在96 孔板中，并在補(bǔ)充有10% FBS 的DMEM 中孵育過(guò)夜。在轉(zhuǎn)染后24、48、72 h，分別向每孔中加10 μL CCK-8 溶液，在37 ℃下孵育2 h 后，利用酶標(biāo)儀檢測(cè)450 nm 波長(zhǎng)處的吸光度。

1.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡 將各組SCC-15細(xì)胞經(jīng)胰蛋白酶消化后，用PBS 洗滌，并用20 μL 膜聯(lián)蛋白V 結(jié)合緩沖液將細(xì)胞重懸，然后將10 μL 膜聯(lián)蛋白V 異硫氰酸熒光素（Annexin V-FITC）加入細(xì)胞重懸液中，37 ℃下孵育15 min，并在黑暗中加入5 μL 碘化丙啶（PI）復(fù)染30 min。使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。

1.7 Transwell 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲與遷移 對(duì)于細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)，將細(xì)胞以3×104個(gè)/mL 的密度接種到Transwell 上腔室中，并將500 μL 含有10% FBS的DMEM 培養(yǎng)液作為化學(xué)引誘劑添加到Transwell下腔室。在5%CO2、37 ℃條件下孵育24 h 后，用棉簽刮去上腔室中的細(xì)胞，并用100%甲醇固定，0.4%結(jié)晶紫染色20 min。然后，漂洗細(xì)胞并干燥。在倒置顯微鏡下隨機(jī)選擇6 個(gè)視圖觀察，并統(tǒng)計(jì)細(xì)胞遷移數(shù)目。

對(duì)于細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)，將基質(zhì)膠預(yù)先涂在Transwell 上腔室中，待其自然干燥后，將細(xì)胞以5×104個(gè)/mL 的密度接種到預(yù)先涂有基質(zhì)膠的上腔室中，其余步驟同細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)。

1.8 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證miR-498 與PCK1靶向關(guān)系 使用targetscan 網(wǎng)站預(yù)測(cè)miR-498與PCK1 的結(jié)合位點(diǎn)。分別構(gòu)建PCK1 的野生型（WT）和突變型（MUT）3′-UTR 區(qū)質(zhì)粒，標(biāo)記為WTPCK1、MUT-PCK1。按照LipofectamineTM2000 轉(zhuǎn)染試劑盒說(shuō)明書(shū)將WT-PCK1 和MUT-PCK1 分別與miR-NC 或miR-498 mimics 共轉(zhuǎn)染于SCC-15 細(xì)胞，每組設(shè)置6 個(gè)復(fù)孔，轉(zhuǎn)染48 h 后，使用雙重?zé)晒馑孛笀?bào)告基因分析系統(tǒng)評(píng)估相對(duì)熒光素酶活性。

1.9 Western blot檢測(cè)PCK1蛋白表達(dá) 使用總蛋白提取試劑盒從細(xì)胞中提取總蛋白，并通過(guò)BCA蛋白測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白質(zhì)濃度。使用10%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺（SDS-PAGE）凝膠進(jìn)行電泳以分離等量的蛋白質(zhì)，然后將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上，將膜用5%脫脂牛奶在37 ℃下封閉2 h，然后與一抗anti-PCK1、anti-GAPDH在4 ℃下孵育過(guò)夜。第二天用TBST 將膜洗滌后，加入HRP 標(biāo)記的羊抗兔二抗于室溫下孵育1 h，利用ECL 發(fā)光試劑盒可視化蛋白，Image 軟件對(duì)灰度值進(jìn)行量化分析。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 25.0版進(jìn)行，數(shù)據(jù)用（）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 miR-498 在OSCC 組織及細(xì)胞中的表達(dá)OSCC 組織中miR-498 的表達(dá)水平明顯高于癌旁組織［（2.65 ± 0.34）vs.（1.04 ± 0.15），P＜0.05］；與人正?？谇唤琴|(zhì)細(xì)胞HOK（1.03±0.14）比較，人OSCC細(xì)胞系HSC-3（2.05 ± 0.21）、SCC-15（2.75 ± 0.31）、SCC-9（2.31 ± 0.28）中miR-498 的表達(dá)水平顯著升高（F= 53.639，P＜0.001），且SCC-15 細(xì)胞中miR-498 的表達(dá)水平最高，因此選擇SCC-15 細(xì)胞作為后續(xù)的研究對(duì)象。

2.2 miR-498對(duì)SCC-15細(xì)胞增殖與凋亡的影響與對(duì)照組和miR-NC 組比較，miR-498 mimics 組SCC-15、OD450值（24、48、72 h）顯著升高，細(xì)胞凋亡率顯著降低（P＜0.05）；與對(duì)照組和anti-miR-NC 組比較，anti-miR-498 組SCC-15 細(xì)胞OD450值（24、48、72 h）顯著降低，細(xì)胞凋亡率顯著升高（P＜0.05），見(jiàn)圖1。

圖1 miR-498 對(duì)SCC-15 細(xì)胞細(xì)胞凋亡率及OD450值的影響Fig.1 Effects of miR-498 on apoptosis rate and OD450 value of SCC-15 cells

2.3 miR-498 對(duì)SCC-15 細(xì)胞遷移與侵襲的影響 miR-498 mimics 組SCC-15 細(xì)胞遷移與侵襲數(shù)目顯著高于對(duì)照組和miR-NC 組（P＜0.05）；antimiR-498 組SCC-15 細(xì)胞遷移與侵襲數(shù)目顯著低于對(duì)照組和anti-miR-NC 組（P＜0.05），見(jiàn)表1、圖2。

表1 miR-498 對(duì)SCC-15 細(xì)胞遷移數(shù)目及侵襲數(shù)目的影響Tab.1 Effect of mir-498 on migration number and invasion number of scc-15 cells ±s

表1 miR-498 對(duì)SCC-15 細(xì)胞遷移數(shù)目及侵襲數(shù)目的影響Tab.1 Effect of mir-498 on migration number and invasion number of scc-15 cells ±s

注：與對(duì)照組比較，aP ＜0.05；與miR-NC 組比較，bP ＜0.05；與anti-miR-NC 組比較，cP ＜0.05

分組對(duì)照組miR-NC 組miR-498 mimics 組anti-miR-NC 組anti-miR-498 組F 值P 值遷移細(xì)胞數(shù)目（個(gè)）132.46±15.37 130.56±14.67 160.68±18.63ab 135.12±16.29 65.42±6.33ac 34.048＜0.001侵襲細(xì)胞數(shù)目（個(gè)）85.52±7.39 87.82±8.16 125.54±12.81ab 86.32±8.46 30.49±4.35ac 91.956＜0.001

圖2 Transwell 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移及侵襲Fig.2 Transwell assay for cell migration and invasion

2.4 miR-498 靶向調(diào)控PCK1 的表達(dá) 使用targetscan 預(yù)測(cè)miR-498 與PCK1 存在結(jié)合位點(diǎn)，見(jiàn)圖3。雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果表明，與miR-NC+WT-PCK1 組（1.07 ± 0.13）比較，miR-498 mimics+WT-PCK1 組（0.36±0.08）熒光素酶相對(duì)活性顯著降低（P＜0.05），而miR-498 mimics+MUT-PCK1 組（1.08 ± 0.11）熒光素酶相對(duì)活性與miR-NC+MUTPCK1組（1.10±0.14）差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。Western blot 結(jié)果顯示，miR-498 mimics 組（0.23 ±0.02）SCC-15 細(xì)胞中PCK1 蛋白表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組（0.51±0.08）和miR-NC 組（0.49±0.06）（P＜0.05）；anti-miR-498 組（1.03 ± 0.05）SCC-15 細(xì)胞中PCK1 蛋白表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組（0.51 ± 0.08）和anti-miR-NC 組（0.48±0.07）（P＜0.05），見(jiàn)圖4。

圖3 使用targetscan 網(wǎng)站預(yù)測(cè)miR-498 與PCK1 的結(jié)合位點(diǎn)Fig.3 Predicted the binding site of mir-498 to PCK1 using targetscan website

圖4 Western blot 檢測(cè)各組細(xì)胞中PCK1 蛋白表達(dá)Fig.4 The expression of PCK1 protein in cells of each group was detected by western blot

2.5 共轉(zhuǎn)染miR-498 和PCK1 對(duì)SCC-15 細(xì)胞增殖、凋亡、遷移及侵襲的影響 PCK1 上調(diào)可顯著減弱miR-498 mimics 對(duì)SCC-15 細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的增強(qiáng)作用，并顯著減弱miR-498 mimics對(duì)SCC-15 細(xì)胞凋亡的抑制作用，見(jiàn)表2、圖5-6；PCK1 下調(diào)可顯著減弱anti-miR-498 對(duì)SCC-15 細(xì)胞增殖、遷移及侵襲能力的抑制作用，并顯著減弱anti-miR-498 對(duì)SCC-15 細(xì)胞凋亡的促進(jìn)作用，見(jiàn)表3、圖7-8。

表2 miR-498 mimics 和OE-PCK1 共轉(zhuǎn)染對(duì)SCC-15 細(xì)胞增殖、凋亡、遷移及侵襲的影響Tab.2 Effects of CO transfection of miR-498 mimics and OE-PCK1 onproliferation，apoptosis，migration and invasion of SCC-15 cells ±s

表2 miR-498 mimics 和OE-PCK1 共轉(zhuǎn)染對(duì)SCC-15 細(xì)胞增殖、凋亡、遷移及侵襲的影響Tab.2 Effects of CO transfection of miR-498 mimics and OE-PCK1 onproliferation，apoptosis，migration and invasion of SCC-15 cells ±s

注：與miR-NC+OE-NC 組比較，aP ＜0.05；與miR-NC+OE-PCK1 組比較，bP ＜0.05；與miR-498mimics+OE-NC 組比較，cP ＜0.05

分組miR-NC+OE-NC 組miR-NC+OE-PCK1 組miR-498mimics+OE-NC 組miR-498mimics+OE-PCK1 組F 值P 值OD450值24 h 0.41±0.06 0.18±0.04a 0.61±0.07a 0.39±0.05bc 58.841＜0.001 48 h 0.99±0.14 0.35±0.06a 1.23±0.16a 0.91±0.12bc 52.658＜0.001 72 h 1.33±0.24 0.54±0.09a 1.76±0.30a 1.30±0.22bc 30.255＜0.001細(xì)胞凋亡率（%）13.96±1.72 46.35±5.23a 7.25±1.36a 16.87±2.65bc 183.395＜0.001遷移細(xì)胞數(shù)目（個(gè)）125.51±15.33 62.56±6.56a 168.15±18.78a 120.36±16.74bc 49.577＜0.001侵襲細(xì)胞數(shù)目（個(gè)）84.36±8.36 32.25±4.67a 123.66±12.36a 77.56±8.21bc 107.994＜0.001

表3 anti-miR-498 和si-PCK1 共轉(zhuǎn)染對(duì)SCC-15 細(xì)胞增殖、凋亡、遷移及侵襲的影響Tab.3 Effects of anti-miR-498 and si-PCK1 co transfection on proliferation，apoptosis，migration and invasion of SCC-15 cells x±s

圖5 miR-498 mimics 和OE-PCK1 共轉(zhuǎn)染對(duì)SCC-15 細(xì)胞凋亡的影響Fig.5 Effect of CO transfection of miR-498 mimics and OE-PCK1 on the apoptosis of SCC-15 cells

圖6 miR-498 mimics 和OE-PCK1 共轉(zhuǎn)染對(duì)SCC-15 細(xì)胞遷移及侵襲的影響Fig.6 Effect of CO transfection of miR-498 mimics and OE-PCK1 on migration and invasion of SCC-15 cells

圖7 anti-miR-498 和si-PCK1 共轉(zhuǎn)染對(duì)SCC-15 細(xì)胞凋亡的影響Fig.7 Effects of anti-miR-498 and si-PCK1 co transfection on apoptosis of SCC-15 cells

圖8 anti-miR-498 和si-PCK1 共轉(zhuǎn)染對(duì)SCC-15 細(xì)胞遷移及侵襲的影響Fig.8 Effects of anti-miR-498 and si-PCK1 co transfection on migration and invasion of SCC-15 cells

3 討論

OSCC 的特點(diǎn)是局部侵襲性強(qiáng)、頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，其發(fā)生發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，受多種因素影響，多種基因參與并協(xié)同作用，不同基因發(fā)揮不同作用［7］。盡管近年來(lái)在OSCC 的診斷和治療方面已經(jīng)取得了較大的進(jìn)步，但OSCC 患者的5年生存率仍然低于50%［8］。因此，確定OSCC 的發(fā)病機(jī)制對(duì)于開(kāi)發(fā)新的治療策略具有重要的意義。

miRNAs 是一類(lèi)沒(méi)有蛋白質(zhì)編碼能力的內(nèi)源性單鏈RNAs，且miRNA 可以通過(guò)互補(bǔ)作用與其靶mRNA 的3′非翻譯區(qū)結(jié)合，從而在轉(zhuǎn)錄后水平的基因表達(dá)中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用［9-10］。miR-498 是一種在腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、侵襲與轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用的miRNA［11］。據(jù)報(bào)道，miR-498 可促進(jìn)腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞的增殖，下調(diào)miR-498 表達(dá)后，腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞增殖明顯下降［12］；下調(diào)miR-498 在OSCC 細(xì)胞SCC-15 中的表達(dá)可顯著降低細(xì)胞侵襲和遷移［13］；miR-498 在乳腺癌細(xì)胞中高表達(dá)，其通過(guò)抑制PTEN 促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖和遷移［14］；miR-498 在轉(zhuǎn)移性甲狀腺髓樣癌中的表達(dá)水平顯著高于原發(fā)性甲狀腺髓樣癌［15］。以上研究表明miR-498 在多種腫瘤中發(fā)揮著癌基因的作用。本研究結(jié)果與其是一致的，本研究結(jié)果顯示，miR-498 在OSCC 組織和細(xì)胞HSC-3、SCC-15、SCC-9 中高表達(dá)，且SCC-15 細(xì)胞中miR-498 的表達(dá)水平最高，因此，選擇SCC-15 細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)；本研究還發(fā)現(xiàn)，過(guò)表達(dá)miR-498 可促進(jìn)SCC-15 細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲，抑制細(xì)胞凋亡，而下調(diào)miR-498 可抑制SCC-15 細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，提示miR-498 在SCC-15 細(xì)胞中具有促癌的作用。

為了進(jìn)一步探究miR-498 在SCC-15 細(xì)胞中促進(jìn)細(xì)胞增殖、遷移及侵襲，抑制細(xì)胞凋亡的內(nèi)部機(jī)制，本研究通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告基因證實(shí)了PCK1為miR-498 的靶基因，且miR-498 可靶向負(fù)調(diào)控PCK1 的表達(dá)。PCK1 是調(diào)節(jié)糖異生過(guò)程中的限速酶，其能夠廣泛參與糖代謝、脂代謝、衰老、糖尿病以及腫瘤細(xì)胞增殖和凋亡等代謝和生物學(xué)進(jìn)

程［16］。相關(guān)研究表明，PCK1 在腎透明細(xì)胞癌組織中的表達(dá)水平顯著低于癌旁組織，PCK1 高表達(dá)組患者的總體生存率明顯高于低表達(dá)組［17］；PCK1 過(guò)表達(dá)后可明顯抑制肝癌細(xì)胞的遷移能力，而敲除后促進(jìn)其遷移，說(shuō)明PCK1 作為抑癌基因參與肝癌的發(fā)生和發(fā)展［18］；沉默PCK1 通過(guò)誘導(dǎo)氧化應(yīng)激和轉(zhuǎn)錄因子Nrf2 的激活促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖［19］；過(guò)表達(dá)PCK1 通過(guò)激活糖異生和抑制糖酵解途徑來(lái)降低肝癌細(xì)胞的活力，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并抑制細(xì)胞遷移［20］；circC3P1 通過(guò)海綿miR-4641 在肝癌細(xì)胞中促進(jìn)PCK1 表達(dá)，進(jìn)而抑制細(xì)胞的增殖、遷移與侵襲［21］。上述研究成果揭示了PCK1 在腫瘤中發(fā)揮著抑癌基因的作用，本研究結(jié)果與上述研究也是一致的，本研究結(jié)果顯示，過(guò)表達(dá)或敲低miR-498 可引起PCK1 蛋白表達(dá)水平的顯著下調(diào)或上調(diào)；PCK1 上調(diào)可顯著減弱miR-498 mimics 對(duì)SCC-15 細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的增強(qiáng)作用及對(duì)細(xì)胞凋亡的抑制作用；PCK1 下調(diào)可顯著減弱antimiR-498 對(duì)SCC-15 細(xì)胞增殖、遷移及侵襲能力的抑制作用及對(duì)細(xì)胞凋亡的促進(jìn)作用。提示miR-498 通過(guò)靶向抑制PCK1 的表達(dá)促進(jìn)SCC-15 細(xì)胞增殖、遷移及侵襲，并抑制細(xì)胞凋亡。然而本研究?jī)H僅在體外細(xì)胞水平上進(jìn)行了探究，miR-498 對(duì)PCK1 的調(diào)控作用在體內(nèi)水平上是否還具有類(lèi)似的趨勢(shì)，有待進(jìn)一步探究。

綜上所述，miR-498 通過(guò)靶向抑制PCK1 的表達(dá)促進(jìn)SCC-15 細(xì)胞增殖、遷移及侵襲，并抑制細(xì)胞凋亡。但關(guān)于miR-498 調(diào)控PCK1 涉及的作用機(jī)制較為復(fù)雜，這將是本研究后續(xù)研究的重點(diǎn)。