共轉(zhuǎn)染
- 長鏈非編碼RNA PCAT19對胰腺癌細(xì)胞增殖與侵襲的影響及其作用機(jī)制
PCAT19（共轉(zhuǎn)染組），并分成si-PCAT19組、si-NC組及共轉(zhuǎn)染組，待各組細(xì)胞系培養(yǎng)至對數(shù)期后行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。1.3 RNA提取和qRT-PCR使用TRIzol 試劑從細(xì)胞系中提取總RNA。用逆轉(zhuǎn)錄酶將分離的RNA轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)DNA（cDNA）。使用 SYBR Green實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增成cDNA產(chǎn)物。使用 SYBR Green RT-PCR檢測PCAT19及miR-195-5p的表達(dá)。PCAT19的表達(dá)以GAPDH為內(nèi)參，標(biāo)準(zhǔn)化為GAPDH的對
中國普通外科雜志 2023年9期2023-11-02
- lncRNA SNHG1靶向miR-145-5p/PDCD4軸對缺氧/復(fù)氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡的影響
5pmimic共轉(zhuǎn)染于H9c2細(xì)胞，48 h后觀察熒光素酶活性變化。分別構(gòu)建PDCD4野生型質(zhì)粒 （PDCD4-WT） 和突變型質(zhì)粒 （PDCD4-MUT），將PDCD4-WT和PDCD4-MUT分別與mimic NC或miR-145-5pmimic共轉(zhuǎn)染于H9c2細(xì)胞，48 h后觀察熒光素酶活性變化。1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 22.0軟件處理數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以x-±s表示，多組數(shù)據(jù)的比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步2組數(shù)據(jù)的比較采用SNK-q檢驗(yàn)。P<
中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào) 2023年10期2023-11-01
- LncRNA NORAD通過miR-199a-3p調(diào)控ZNF217對非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞增殖、凋亡及化療敏感性的影響
or NC組（共轉(zhuǎn)染si-NORAD和inhibitor NC）、si-NORAD+miR-199a-3p inhibitor組（共轉(zhuǎn)染si-NORAD和miR-199a-3p inhibitor），各組加入2 μg/mL的DDP處理24 h，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。1.6 CCK-8法檢測細(xì)胞增殖 將各組H460/DDP細(xì)胞接種于96孔板中，按照1.5中分組處理，培養(yǎng)48 h，每孔各加入10 μL CCK-8溶液，37oC孵育30 min，酶標(biāo)儀測量各孔的吸光度（
中國肺癌雜志 2023年7期2023-09-04
- lncRNA HCG18靶向miR-34b-5p/FOXP1軸促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的機(jī)制研究
b-5p組)、共轉(zhuǎn)染si-HCG18與anti-miR-NC(si-HCG18+anti-miR-NC組)、si-HCG18與anti-miR-34b-5p(si-HCG18+anti-miR-34b-5p組)、miR-34b-5p mimics與pcDNA(miR-34b-5p+pcDNA組)、miR-34b-5p mimics與pcDNA-FOXP1(miR-34b-5p+pcDNA-FOXP1組)。轉(zhuǎn)染12 h后,更換為含10% FBS的RPMI 1
蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào) 2023年6期2023-08-02
- LncRNA XIST調(diào)節(jié)miR-545-3p/SMAD5軸對人成骨細(xì)胞增殖、遷移及成骨分化的影響
和miR-NC共轉(zhuǎn)染)、pcDNA-XIST+ miR-545-3p mimic組(pcDNA3.1-XIST和 miR-545-3p mimic共轉(zhuǎn)染)。對hOB細(xì)胞先進(jìn)行上述轉(zhuǎn)染24 h,再在分化培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)分化培養(yǎng)7 d,然后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。1.5 qRT-PCR檢測XIST、miR-545-3p表達(dá) 使用Trizol試劑提取細(xì)胞中的總RNA,將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后,以cDNA為模板進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增。分別以GAPDH、U6為內(nèi)參,使用2-
河北醫(yī)藥 2023年4期2023-04-08
- LINC00342調(diào)控miR-384對肺鱗癌細(xì)胞增殖侵襲遷移的影響研究
itor-NC共轉(zhuǎn)染)、si-LINC00342+ miR-384 inhibitor組(si-LINC00342和 miR-384 inhibitor共轉(zhuǎn)染)。轉(zhuǎn)染嚴(yán)格按照LipofectamineTM2000 Transfection Reagent操作步驟進(jìn)行。1.3.3RT-qPCR法檢測LINC00342、miR-384表達(dá)：使用Trizol提取各組細(xì)胞中的總RNA，將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后，以cDNA為模板上RT-qPCR儀進(jìn)行擴(kuò)增。LINC
河北醫(yī)學(xué) 2023年2期2023-03-13
- circ-BRWD1靶向調(diào)控作用miR-132-3p介導(dǎo)FOXO1成骨
-132-3p共轉(zhuǎn)染入BMSCs后檢測FOXO1的表達(dá)水平：RT-qPCR分析檢測control、agomiR-NC、agomiR-132-3p、agomiR-132-3p+pcDNA3.1、agomiR-132-3p+pc-circ-BRWD1轉(zhuǎn)染的BMSCs細(xì)胞中FOXO1的相對表達(dá)。將pc-circ-BRWD1與agomiR-132-3p或sh-FOXO1共轉(zhuǎn)染BMSCs后檢測特異性成骨分化相關(guān)因子Runx2的表達(dá)水平：RT-qPCR檢測在contr
醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐 2023年2期2023-02-04
- 長鏈非編碼RNA(LncRNA)母系表達(dá)基因3(MEG3)對糖尿病視網(wǎng)膜病變大鼠模型視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響△
gomir組、共轉(zhuǎn)染組、共轉(zhuǎn)染陰性對照組，每組分配12只大鼠，再取12只大鼠按照10 mL·kg-1劑量自腹腔注入0.1 mol·L-1檸檬酸緩沖液，作為對照組。1.2.2 大鼠分組給藥及視網(wǎng)膜血管通透性檢測參照文獻(xiàn)[11] 給予大鼠藥物：LncRNA MEG3過表達(dá)組大鼠玻璃體內(nèi)注射LncRNA MEG3過表達(dá)質(zhì)粒(濃度參照說明書設(shè)定)；miR-145-5p agomir組大鼠玻璃體內(nèi)注射miR-145-5p agomir(濃度參照說明書設(shè)定)；共轉(zhuǎn)染組
眼科新進(jìn)展 2023年1期2023-02-01
- 缺氧誘導(dǎo)因子-1α、Notch1和Jagged1共轉(zhuǎn)染對急性心肌梗死模型大鼠心功能的改善作用
鼠分為模型組、共轉(zhuǎn)染組和對照組，每組10只。①模型組：通過腹腔注射40 mg/kg 1%戊巴比妥鈉對大鼠進(jìn)行麻醉。氣管插管后，所有大鼠使用小動物呼吸機(jī)接受正壓有氧通氣，并在左側(cè)第4肋間打開胸部，切開心包后將心臟外化。使用6-0絲線縫合冠狀動脈左前降支，距主動脈根部約3～5 mm。通過梗死區(qū)域的局部發(fā)紺驗(yàn)證AMI模型的制備成功。②共轉(zhuǎn)染組：在冠狀動脈左前降支結(jié)扎過程中將HIF-1α、Notch1、Jagged1共轉(zhuǎn)染慢病毒注射到大鼠心臟的胸前組織中，即在梗死
陜西醫(yī)學(xué)雜志 2022年11期2022-11-11
- lncRNA FOXD2-AS1對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞增殖和凋亡的機(jī)制研究
位點(diǎn)（表3）。共轉(zhuǎn)染 WT-lncRNA FOXD2-AS1+miR-331-3p mimics的細(xì)胞熒光素酶活性較共轉(zhuǎn)染WT-lncRNA FOXD2-AS1+miR-NC的 細(xì) 胞 低（0.46±0.03 vs 1.00±0.08，t=18.961，P＜0.05），而共轉(zhuǎn)染 MUT-lncRNA FOXD2-AS1+miR-331-3p mimics的細(xì)胞熒光素酶活性與共轉(zhuǎn)染MUT-lncRNA FOXD2-AS1+miR-NC的細(xì)胞差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（
現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué) 2022年8期2022-10-10
- 動脈炎病毒PRRSV和EAV的Nsp4蛋白對mTANK蛋白的降解
NK-HA質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞，轉(zhuǎn)染24 h后收取細(xì)胞裂解液，于4 ℃、12 000×g離心10 min，取上清加入1 μg小鼠IgG和20 μL Protein A+G，于4 ℃緩慢搖晃4 h，去除非特異性吸附.于4 ℃、1 000×g離心5 min，取上清加入1 μg Flag單抗，于4 ℃緩慢搖晃12 h，加入40 μL蛋白A+G繼續(xù)搖晃4 h，于4 ℃、1 000×g離心5 min，棄上清，用預(yù)冷的PBS洗滌3次，最后用100 μL PBS
- 非洲豬瘟病毒MGF360-14L靶向MAVS抑制Ⅰ型干擾素的產(chǎn)生
MAVS或空載共轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染24 h后收集細(xì)胞，進(jìn)行雙熒光素酶檢測，具體操作步驟參見雙熒光素酶說明書(北京全式金生物技術(shù)股份有限公司)。1.2.3 免疫共沉淀試驗(yàn)(Co-IP) HEK293T細(xì)胞傳代培養(yǎng)于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，待細(xì)胞密度達(dá)到70%左右，依據(jù)具體試驗(yàn)轉(zhuǎn)染p3×Flag-MGF360-14L、p-CMV-eGFP-MGF360-14L、pcDNA3.1-Myc-TRIM21、pcDNA3.1-HA-MAVS、p3×Flag-MAVS、pCDEF-H
畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào) 2022年9期2022-09-30
- lncRNA SNHG6通過microRNA-26b-5p對三陰性乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲的作用機(jī)制研究*
-5p抑制組、共轉(zhuǎn)染組。對照組采用空載質(zhì)粒進(jìn)行轉(zhuǎn)染，SNHG6 敲減組采用si-SNHG6 慢病毒載體進(jìn)行轉(zhuǎn)染，miR-26b-5p 抑制組采用空載質(zhì)粒及miR-26b-5p-inhibitor 進(jìn)行轉(zhuǎn)染，共轉(zhuǎn)染組同時(shí)采用si-SNHG6慢病毒載體及miR-26b-5p-inhibitor 進(jìn)行轉(zhuǎn)染。1.5 方法1.5.1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)染過程按照Lipofectamine 2000 試劑盒說明書進(jìn)行操作，參照細(xì)胞分組的干預(yù)內(nèi)容進(jìn)行轉(zhuǎn)染，于二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志 2022年16期2022-08-31
- 長鏈非編碼RNA ENST00000415964調(diào)控miR-214/DKK3對急性白血病細(xì)胞增殖、凋亡的影響
iR-NC組(共轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-ENST-00000415964和miR-NC)，pcDNA3.1-ENST00000-415964+miR-214組(共轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-ENST00-000415964和miR-214)，pcDNA3.1-ENST00000415-964+si-NC組(共轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-ENST00000415964和si-NC)，pcDNA3.1-ENST00000415964+si-DKK3組(共轉(zhuǎn)染pcDNA3.1
中國老年學(xué)雜志 2022年8期2022-07-25
- miR-498靶向磷酸烯醇丙酮酸羧激酶1對口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞生長的影響
和OE-NC 共轉(zhuǎn)染細(xì)胞）、miR-NC+OE-PCK1 組（miR-NC 和OE-PCK1 共轉(zhuǎn)染細(xì)胞）、miR-498 mimics+OE-NC 組（miR-498mimics 和OENC 共轉(zhuǎn)染細(xì)胞）、miR-498 mimics+OE-PCK1 組（miR-498 mimics 和OE-PCK1 共轉(zhuǎn)染細(xì)胞）、antimiR-NC+si-NC 組（anti-miR-NC 和si-NC 組共轉(zhuǎn)染細(xì)胞）、anti-miR-NC+si-PCK1 組（an
實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志 2022年11期2022-07-18
- miR-133a-3p靶向BMP9調(diào)控人頜骨骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖、分化和凋亡的研究
i-con組（共轉(zhuǎn)染anti-miR-133a-3p和si-con后進(jìn)行成骨誘導(dǎo)）、anti-miR-133a-3p＋si-BMP9組（共轉(zhuǎn)染anti-miR-133a-3p和si-BMP9后進(jìn)行成骨誘導(dǎo)）。1.2.3 RT-qPCR檢測成骨分化過程中miR-133a-3p和BMP9 mRNA的表達(dá) 收集成骨誘導(dǎo)7 d的hOBMSCs，采用Trizol法提取hOBMSCs總RNA，以紫外分光光度計(jì)測定總RNA的純度。按cDNA第一鏈合成試劑盒、SYBR G
實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志 2022年2期2022-05-05
- lncRNA HOTAIRM1與miR-125b對肝細(xì)胞癌生物學(xué)行為影響
或miR-NC共轉(zhuǎn)染。將重組載體與miR-NC或miR-125b模擬物共轉(zhuǎn)染HEK293 細(xì)胞。共轉(zhuǎn)染48 h后，棄掉原培養(yǎng)基，用100 μL PBS洗滌培養(yǎng)孔1遍，吸盡剩余的PBS；使用去離子水將5×PLB稀釋成l×PLB；向96孔板中加入50 μL 1×PLB，裂解細(xì)胞15 min；96孔酶標(biāo)板中(白色不透光的)每孔加上步驟的上清液10 μL，再加入100 μL LARII，靜止2 s；每孔加入Stop&Glo Reagent終止反應(yīng)，靜止2 s后，進(jìn)
錦州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào) 2022年1期2022-03-30
- EIAV Rev 核輸出活性檢測系統(tǒng)的建立
DDV-HA）共轉(zhuǎn)染HEK293T 細(xì)胞，利用western blot 在細(xì)胞裂解液中可檢測到Gag 的表達(dá)，通過檢測Gag 的表達(dá)來評估Rev 的核輸出活性。1 材料與方法1.1 質(zhì)粒、菌株和細(xì)胞pLGFD3-8、pcDNA-HA、pcDNA-RevFDDV-HA、pEGFP-N1 質(zhì)粒、HEK293T 細(xì)胞均由本實(shí)驗(yàn)室保存；pcDNA-RevL36A-HA 是在pcDNARevFDDV-HA 的基礎(chǔ)上獲得的L36A 突變質(zhì)粒；pcDNARevUK-HA
中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào) 2022年1期2022-03-22
- circ_0091581靶向miR-136對皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響
miR-NC(共轉(zhuǎn)染)、si-circ_0091581與anti-miR-136(共轉(zhuǎn)染)分別轉(zhuǎn)染至融合至70%的SCL-1細(xì)胞，分別記為si-NC組、si-circ_0091581組、miR-NC組、miR-136組、si-circ_0091581+anti-miR-NC組、si-circ_0091581+anti-miR-136組。1.2.2qRT-PCR檢測基因的表達(dá)水平CSCC組織、癌旁組織與各組SCL-1細(xì)胞的總RNA通過Trizol試劑提取，反
醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào) 2022年12期2022-02-02
- LncRNA H19通過miR-370-3p/RAF1軸對腦膠質(zhì)瘤T98G細(xì)胞增殖侵襲和放療敏感性的影響及機(jī)制
：T98G細(xì)胞共轉(zhuǎn)染2μg H19 wt質(zhì)粒和miR-370-3p mimics；mimics NC+H19 wt組：T98G細(xì)胞共轉(zhuǎn)染2μg H19 wt質(zhì)粒和mimics NC；H19 mut+miR-370-3p mimics組：T98G細(xì)胞共轉(zhuǎn)染2μg H19 mut質(zhì)粒和miR-370-3p mimics；mimics NC+H19 mut組：T98G細(xì)胞共轉(zhuǎn)染2μg H19 mut質(zhì)粒和mimics NC；③inhibitor NC組：T98G
河北醫(yī)學(xué) 2021年12期2022-01-04
- circ_0084927靶向miR-623調(diào)控喉癌TU177細(xì)胞增殖和凋亡的機(jī)制研究
0084927共轉(zhuǎn)染TU177細(xì)胞，孵育48 h后用雙熒光素酶檢測系統(tǒng)檢測熒光素酶活性。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。將螢火蟲熒光素酶活性歸一化為海腎熒光素酶活性表示相對熒光素酶活性。2 結(jié)果2.1circ_0084927和miR-623在喉癌組織中的表達(dá) 與癌旁組織比較，喉癌組織中circ_0084927相對表達(dá)水平升高，miR-623相對表達(dá)水平降低(P表1 喉癌組織和癌旁組織circ_0084927和miR-623的表達(dá)水平比較2.2干擾circ_0084927表達(dá)
解放軍醫(yī)藥雜志 2021年12期2022-01-03
- miR-206靶向FAM83A影響Wnt/β-catenin通路調(diào)控胰腺癌放療敏感性
pcDNA組(共轉(zhuǎn)染miR-206 mimics和陰性對照pcDNA)、miR-206+FAM83A組(共轉(zhuǎn)染miR-206 mimics和過表達(dá)FAM83A質(zhì)粒pcDNA FAM83A)。1.3qPCR實(shí)驗(yàn) 使用Trizol提取細(xì)胞中總RNA，通過cDNA合成試劑盒將RNA樣本轉(zhuǎn)變?yōu)閏DNA。以GAPDH為內(nèi)參，2-ΔΔCt法計(jì)算miR-206/FAM83A mRNA的相對表達(dá)水平。其中，miR-206的上游引物為5′-CAGATCCGATTGGAATG
中國老年學(xué)雜志 2021年23期2021-12-08
- GAS5靶向miR-222-3p對牙周膜干細(xì)胞成骨分化的影響機(jī)制
iR-NC組：共轉(zhuǎn)染GAS5-siRNA和antimiR-NC；GAS5-siRNA+antimiR-222-3p組：共轉(zhuǎn)染GAS5-siRNA和antimiR-222-3p，其中，每組設(shè)3 個(gè)復(fù)孔。將hPDLSCs接種至6 孔板，培養(yǎng)至70%匯合度時(shí)，按照脂質(zhì)體3000說明書對hPDLSCs進(jìn)行瞬時(shí)轉(zhuǎn)染；轉(zhuǎn)染6 h后換液，培養(yǎng)48 h收集各組細(xì)胞，RT-PCR檢測GAS5和miR-223-3p表達(dá)水平評價(jià)轉(zhuǎn)染效率后，再以成骨誘導(dǎo)液培養(yǎng)。1.4 茜素紅染色
實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志 2021年2期2021-04-27
- LncRNA-MEG3和KLF4在鼻咽癌發(fā)生發(fā)展中的作用及可能機(jī)制
模擬或陰性對照共轉(zhuǎn)染C666-1細(xì)胞，36 h后雙熒光素酶報(bào)告分析系統(tǒng)（Promega公司，美國）分析螢火蟲和雷尼拉信號。熒光素酶活性用微量平板閱讀器定量。1.7 Western blot法檢測蛋白表達(dá)用RIPA緩沖液分離總蛋白、10%SDS-PAGE分離并轉(zhuǎn)移到聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上，蛋白質(zhì)定量分析采用Bradford法，用皮爾斯ECL試劑盒顯示PVDF膜上的靶蛋白條帶?？贵w稀釋如下：抗KLF（1:1000）、抗Bcl-2（1:1000）和抗bax
腫瘤防治研究 2021年3期2021-04-12
- 過表達(dá)蛋白合成與分泌相關(guān)蛋白提高CHO細(xì)胞anti- hLAG3產(chǎn)量
G3的抗體質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染入ExpiCHO- S細(xì)胞中，檢測轉(zhuǎn)染后72 h培養(yǎng)物上清中抗體產(chǎn)量的變化。僅轉(zhuǎn)染了pCAG- Hygro- IRES2- EGFP載體和anti- hLAG3輕重鏈的細(xì)胞上清中抗體的產(chǎn)量為24.21 μg/mL。為了更直觀地體現(xiàn)各蛋白對ExpiCHO- S細(xì)胞生產(chǎn)anti- hLAG3的影響，將轉(zhuǎn)染了各蛋白表達(dá)載體的細(xì)胞上清的抗體產(chǎn)量用相對產(chǎn)量(Cr)表示(式(2))。Cr=Cm/24.21×100%(2)式中，Cm為實(shí)測產(chǎn)量(μg/
- 長鏈非編碼RNA-ATB對瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞增殖和凋亡的影響及其機(jī)制研究
tors 組、共轉(zhuǎn)染sh-ATB+miR-200c inhibitors 組、共轉(zhuǎn)染o/e-ATB+miR-200c inhibitors 組、共轉(zhuǎn)染miR-200c inhibitors+sh-DNMT3B 組、共轉(zhuǎn)染miR-200c mimics+sh-DNMT3B 組。1.3.2 qRT-PCR采用miRNeasy Mini Kit 提取miRNA，使用TaqMan MicroRNA Assay 試劑盒檢測miR-200c 的相對表達(dá)量，并使用App
中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志 2021年4期2021-03-16
- MEK5α 和MEK5β 調(diào)控Beclin 1 啟動子
與p-354 共轉(zhuǎn)染至C2C12細(xì)胞.雙熒光素酶報(bào)告基因檢測實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,MEK5αCA 顯著上調(diào)熒光素酶活性,而MEK5αDN 顯著下調(diào)熒光素酶活性(見圖2(a)),表明MEK5α能夠正向調(diào)控Beclin 1 啟動子活性.然后分別轉(zhuǎn)染不同量的MEK5αCA,結(jié)果表明少量MEK5αCA(0.3 μg)對Beclin 1啟動子活性無顯著作用,中量MEK5αCA(0.8 μg)可顯著上調(diào)Beclin 1 啟動子活性,而多量MEK5αCA(2.4 μg)可進(jìn)一步
- LncRNA UCA1靶向miR-206/CLOCK對神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長和侵襲的影響
W1783細(xì)胞共轉(zhuǎn)染慢病毒質(zhì)粒，與LncRNA UCA1序列shRNA一同構(gòu)建。LV-con為對照組。將慢病毒載體加入LncRNA UCA1片段構(gòu)建LV-LncRNA UCA1。miR-206模擬或陰性對照(NC)通過Lipo- fectamine 2000(Invitrogen，美國)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。1.2.4蛋白質(zhì)印跡法 通過10%十二烷基硫酸鈉凝膠電泳提取蛋白質(zhì)，并轉(zhuǎn)移至聚偏氟乙烯膜(Millipore，美國)?？笶-鈣粘蛋白抗體(1:500，ab4077
貴州醫(yī)藥 2020年12期2021-01-19
- MicroRNA-212-3p與靶基因轉(zhuǎn)化生長因子-β2基因3'UTR的關(guān)系研究*
β2-Luc 共轉(zhuǎn)染Saos-2細(xì)胞37℃水浴復(fù)蘇Saos-2 細(xì)胞，加入DMEM 培養(yǎng)基（含10% FBS）后置于37℃、50%二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。用DMEM 培養(yǎng)基（含10% FBS）制備Saos-2 單細(xì)胞懸液，按照2×105個(gè)/孔的密度將細(xì)胞均勻地接種到細(xì)胞培養(yǎng)板（12 孔），置于37℃、5%二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞密度達(dá)1.8×105個(gè)/孔時(shí)，使用無血清DMEM 培養(yǎng)基培養(yǎng)2 h 后進(jìn)行轉(zhuǎn)染。使用LipofectamineTM2000 進(jìn)行
中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志 2020年24期2021-01-04
- miR-203a-3p抗彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤的作用及機(jī)制研究
C-mimic共轉(zhuǎn)染，24 h后使用雙熒光素酶測定系統(tǒng)測定熒光素酶活性。1.2.7免疫印跡 收集細(xì)胞并用RIPA裂解液提取總蛋白，使用BCA試劑盒測定蛋白濃度。上樣后用轉(zhuǎn)膜儀將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜，用5%脫脂牛奶封閉1 h，洗膜后一抗孵育4 ℃過夜，加二抗室溫孵育2 h，ECL試劑檢測蛋白。2 結(jié) 果2.1miR-203a-3p在DLBCL組織中的表達(dá)水平 與RH組織比較，DLBCL組織中miR-203a-3p的表達(dá)水平顯著降低(P2.2過表達(dá)miR-20
福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào) 2020年5期2020-12-15
- LncRNA SOX2OT海綿吸附miR-34a促進(jìn)SOX2表達(dá)增強(qiáng)大腸癌多藥耐藥
mimic(共轉(zhuǎn)染SOX2OT、NC mimic)、SOX2OT+miR-34a(共轉(zhuǎn)染SOX2OT、miR-34a mimic)。取對數(shù)生長期HCT-116細(xì)胞，0.25%胰蛋白酶消化，以5×103個(gè)/孔的濃度接種于96孔板中，每孔加入100 μL完全培養(yǎng)基。過夜貼壁后加入5個(gè)濃度梯度的5-FU、VCR、CDDP和TAXOL，每孔設(shè)3個(gè)復(fù)孔，孵育48 h后，每孔加入10 μL CCK-8溶液，待其完全混勻，放入孵箱中繼續(xù)培養(yǎng)2 h。用酶標(biāo)儀測定各孔OD
實(shí)用腫瘤學(xué)雜志 2020年5期2020-11-13
- 利用同源重組技術(shù)構(gòu)建Hoxa5、BMP6真核表達(dá)載體及共轉(zhuǎn)染成纖維細(xì)胞表達(dá)
載體通過與單、共轉(zhuǎn)染比較基因表達(dá)量的變化來研究Hoxa5和BMP6之間的作用關(guān)系，旨在為更深層次上研究毛囊功能基因奠定基礎(chǔ)。1 材料和方法1.1 試驗(yàn)材料健康的30日齡胎羊由青島畜牧所奧特種羊場提供；TRIzol、KpnⅠ、倒置顯微鏡、熒光定量PCR等均購自Bio-Rad公司[9]。1.2 試驗(yàn)方法1.2.1 引物設(shè)計(jì) 選取綿羊Hoxa5基因(GenBank登錄號為NM-001009431.1)CDS區(qū) 和BMP6基因(GenBank登錄號為NM-0011
華北農(nóng)學(xué)報(bào) 2020年4期2020-08-31
- 利用同源重組構(gòu)建Chordin、BMP6 真核表達(dá)載體及共轉(zhuǎn)染成纖維細(xì)胞表達(dá)的研究
、BMP6質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染成纖維細(xì)胞后在細(xì)胞水平上驗(yàn)證兩基因間的相互作用，為進(jìn)一步的分子育種工作提供依據(jù)。1 材料與方法1.1 實(shí)驗(yàn)材料 選取40 日齡的健康胎羊（由青島奧特種羊場提供）并及時(shí)消毒處理。TRIZol（Roche）試劑、蛋白裂解液、EcoRI 限制性內(nèi)切酶、KpnI 限制性內(nèi)切酶、T4 DNA 連接酶、pcDNA3.1 質(zhì)粒、DH5α感受態(tài)細(xì)胞、DMEM（基礎(chǔ)培養(yǎng)基）、胰蛋白酶、標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清、DPBS（磷酸緩沖鹽溶液）、Lipofectamine
中國畜牧雜志 2020年7期2020-07-24
- EIAV Rev 蛋白拮抗eqTRIM5α介導(dǎo)的AP-1 信號通路的機(jī)制研究
性對照；第二組共轉(zhuǎn)染450 ng peqTRIM5α-HA+450 ng pcDNA3.1質(zhì)粒；第3 組共轉(zhuǎn)染450 ng peqTRIM5α-HA+450 ngpEIAV-Rev-HA 質(zhì)粒；第4 組共轉(zhuǎn)染450 ng pEIAVRev-HA+450 ng pcDNA3.1 質(zhì)粒，上述各組均同時(shí)轉(zhuǎn)染100 ng pGL3-AP-1-Luc（報(bào)告質(zhì)粒）和5 ng pRL-TK（內(nèi)參質(zhì)粒）。每組分別做3 個(gè)重復(fù)。轉(zhuǎn)染24 h 后，兩個(gè)重復(fù)組棄去上清液，每孔加
中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào) 2020年1期2020-06-05
- CARMA3和MMP-9在乳腺癌細(xì)胞增殖侵襲中的作用
行下一步檢測。共轉(zhuǎn)染pCMV6-CARMA3+MMP-9 siRNA，方法按上述步驟轉(zhuǎn)染pCMV6-CARMA3，36小時(shí)后收集細(xì)胞檢測。實(shí)驗(yàn)分為pCMV6-CARMA3組、空載體組、control siRNA組、MMP-9 siRNA組和共轉(zhuǎn)染pCMV6-CARMA3+MMP-9 siRNA組。1.2.3 CARMA3與MMP-9蛋白的表達(dá) 采用Western blot法對比乳腺癌細(xì)胞系與乳腺正常上皮細(xì)胞系中CARMA3與MMP-9蛋白的表達(dá)。收集乳腺癌
浙江實(shí)用醫(yī)學(xué) 2020年6期2020-05-08
- siRNA下調(diào)VEGF基因沉默對人舌癌細(xì)胞株Tca8113的生物學(xué)作用
式細(xì)胞術(shù)結(jié)果在共轉(zhuǎn)染Tea8113細(xì)胞培養(yǎng)24 h后，進(jìn)行流式細(xì)胞儀分析，結(jié)果顯示，G0/G1期細(xì)胞增多，S期細(xì)胞減少， G2/M期細(xì)胞相對增多，且細(xì)胞凋亡率升高與脂質(zhì)體空載組及正常對照組相比差異非常顯著。見表2。表1 siRNA正義組與其他各組對Teag8113細(xì)胞增殖抑制率表2 轉(zhuǎn)染siRNA24 h后細(xì)胞周期進(jìn)程及凋亡率2.5 VEGF含量表達(dá)siRNA轉(zhuǎn)染Teag8113細(xì)胞上清液中VEGF含量檢測明顯低于各對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表3。表3
中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué) 2019年11期2019-11-26
- 流感病毒NS1蛋白與宿主蛋白DOK6的相互作用研究
5-DOK6 共轉(zhuǎn)染至6 孔板中密度為80 %的293T 細(xì)胞，同時(shí)分別轉(zhuǎn)染pCAGGS-Flag-NS1+pCAGGS 和 pCAGGS-V5-DOK6+pCAGGS 作 為對照，每種質(zhì)粒各1 g。轉(zhuǎn)染48 h 后，按200 μL/孔加入NP40 (含PMSF)，裂解細(xì)胞30 min，離心，收集上清全細(xì)胞裂解液(Whole cell lysates，WCL)，取20 μL 作為對照 ，剩余的樣品加入20 μL Anti-Flag M2 親和瓊脂糖珠過夜結(jié)
中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào) 2019年10期2019-11-22
- miR-195過表達(dá)對人口腔鱗癌細(xì)胞增殖的影響及機(jī)制
5 mimic共轉(zhuǎn)染組(轉(zhuǎn)染FGF7-wt+miR-195)、FGF7-wt與對照共轉(zhuǎn)染組(轉(zhuǎn)染FGF7-wt+vector)、FGF7-mut與miR-195 mimic共轉(zhuǎn)染組(轉(zhuǎn)染FGF7-mut+miR-195)、FGF7-mut與對照共轉(zhuǎn)染組(轉(zhuǎn)染FGF7-mut+vector)，分別完成轉(zhuǎn)染48 h后收集細(xì)胞，根據(jù)雙熒光素酶活性檢測試劑盒說明書，檢測熒光素酶活性，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。1.5 SCC-4細(xì)胞內(nèi)miR-195、FGF7 mRNA表達(dá)檢測
山東醫(yī)藥 2019年25期2019-09-18
- miR-105靶向調(diào)控FUT4影響骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞增殖和凋亡的研究
si-NC組；共轉(zhuǎn)染miR-105模擬物和FUT4 cDNA的細(xì)胞記為miR-105 mimic+pc-FUT4組，共轉(zhuǎn)染miR-105模擬物和FUT4 cDNA對照的細(xì)胞記為miR-105 mimic+pc-NC組；共轉(zhuǎn)染miR-105抑制劑和FUT4 siRNA的細(xì)胞記為miR-105 inhibitor+si-FUT4組，共轉(zhuǎn)染miR-105抑制劑和FUT4 siRNA對照的細(xì)胞記為miR-105 inhibitor+si-NC組。1.6 雙熒光素酶
中華骨與關(guān)節(jié)外科雜志 2019年6期2019-07-22
- miR-130b對宮頸癌細(xì)胞修復(fù)TNF-α誘導(dǎo)性基因組雙鏈DNA斷裂作用的影響及機(jī)制
酸(NC組)，共轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-CDKN1A和miR-130b mimics (CDKN1A+miR-130b組)、pcDNA3.1和miR-130b mimics (pcDNA3.1+miR-130b組)。轉(zhuǎn)染4 h，更換新鮮培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。1.3 miR-130b、CDKN1A影響細(xì)胞修復(fù)雙鏈DNA斷裂觀察1.3.1 細(xì)胞干擾處理 CDKN1A組、pcDNA3.1組細(xì)胞轉(zhuǎn)染培養(yǎng)24 h后，分別用終濃度為100 ng/mL TNF-α或PBS處理細(xì)
山東醫(yī)藥 2019年2期2019-02-15
- miR-9對人胃癌細(xì)胞株活化白細(xì)胞黏附分子基因表達(dá)的靶向調(diào)控作用
μg質(zhì)粒進(jìn)行共轉(zhuǎn)染。實(shí)驗(yàn)分組如下：(1)未轉(zhuǎn)染的空白對照組；(2)共轉(zhuǎn)染miR-NC、psiCHECK-2-ALCAM或psiCHECK-2-ALCAM-mut；(3)共轉(zhuǎn)染miR-9 mimics、psiCHECK-2-ALCAM或psiCHECK-2-ALCAM-mut；(4)共轉(zhuǎn)染miR-9 inhibitor、psiCHECK-2-ALCAM或psiCHECK-2-ALCAM-mut；每組設(shè)4個(gè)復(fù)孔。轉(zhuǎn)染24 h后，每孔用PBS洗2次，加入100
胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志 2019年1期2019-01-24
- 慢病毒介導(dǎo)miR-34a表達(dá)對視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤自噬的影響及機(jī)制研究△
MGB1載體及共轉(zhuǎn)染miR-34a+HMGB1的慢病毒載體及培養(yǎng)液接種至Y79細(xì)胞。按照接種載體分組，將Y79細(xì)胞株分為4組，分別為轉(zhuǎn)染miR-34a組、轉(zhuǎn)染HMGB1組、共轉(zhuǎn)染miR-34a+HMGB1組及陰性對照組。1.2.2miR-34a慢病毒載體的構(gòu)建及cDNA轉(zhuǎn)染獲取的人miR-34a序列，從Genbank中查閱HMGB1的cDNA序列，設(shè)計(jì)合成miR-34a及HMGB1前體引物，采用PCR方法擴(kuò)增含miR-34a及HMGB1前體片段，并克隆至慢
眼科新進(jìn)展 2019年1期2019-01-10
- miR-26a靶向HMGA1基因?qū)Y(jié)腸癌細(xì)胞生長、侵襲和遷移的影響
建好的質(zhì)粒進(jìn)行共轉(zhuǎn)染并分為3組，即miR-NC+miR-26a mimics組、Wt-HMGA1+miR-26a mimics組和Mut-HMGA1+miR-26a mimics組。置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后收集細(xì)胞，采用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測試劑盒檢測各組SW480細(xì)胞中雙熒光素酶活性。1.5 CCK8法檢測人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞增殖活力 取轉(zhuǎn)染后生長至對數(shù)期的 miR-NC組、miR-26a mimics組和miR-26a inhib
- miR-581對結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖與侵襲的影響及機(jī)制
miR-581共轉(zhuǎn)染到HEK293細(xì)胞中，質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后48 h據(jù)Promega公司操作說明，裂解細(xì)胞，加入熒光素酶底物，檢測熒光素酶活性，驗(yàn)證miR-581能否與PRDX1 3′UTR結(jié)合，證明miR-581是否能直接調(diào)控PRDX1。1.7 SW620細(xì)胞中PRDX1蛋白表達(dá)檢測 采用Western blotting法。根據(jù)PRDX1蛋白相對分子質(zhì)量大小，配制凝膠，根據(jù)所測蛋白濃度適量加入蛋白樣品及每孔5 μL的蛋白Marker；跑膠，首先加壓80 V，保證
山東醫(yī)藥 2018年25期2018-07-20
- 基于miRNA-10b調(diào)控宮頸癌LncRNA-H19網(wǎng)絡(luò)通路機(jī)制的研究
RNA-10b共轉(zhuǎn)染組比較，pDNA-H19和miR-10b 共轉(zhuǎn)染組的miR-10b表達(dá)量下降(P0.05),說明H19 抑制miRNA-10b的表達(dá)，見圖1。向過表達(dá)H19的HeLa細(xì)胞轉(zhuǎn)染miRNA-10b或miRNA-10 inhibitor共轉(zhuǎn)染組細(xì)胞增長明顯高于pcDNA-mut-H19和miRNA-10b共轉(zhuǎn)染組(P圖1H19可抑制miRNA-10b的表達(dá)2.2H19促進(jìn)IGF1R表達(dá)用Western blot檢測IGF1R蛋白表達(dá)量顯示，p
中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué) 2018年3期2018-03-26
- miR—1203和HOTAIRrs7958904位點(diǎn)對乳腺癌細(xì)胞生長的影響
1203模擬物共轉(zhuǎn)染細(xì)胞，檢測熒光素酶的表達(dá)。過表達(dá)載體、miR-1203模擬物或抑制物單獨(dú)或共轉(zhuǎn)染乳腺癌細(xì)胞，熒光定量PCR檢測HOTAIR表達(dá)，BrdU檢測細(xì)胞增殖，Annexin V-FITC/PI檢測細(xì)胞凋亡，Transwell法檢測細(xì)胞侵襲。 結(jié)果 HOTAIR突變型增強(qiáng)了miR-1203對其的靶向結(jié)合；miR-1203可以下調(diào)突變型HOTAIR的表達(dá)，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）；但對野生型HOTAIR影響不顯著（P > 0.05）
中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào) 2018年3期2018-03-07
- 何首烏中THSG和蒽醌類成分對人孕烷X受體介導(dǎo)的CYP3A4的調(diào)控作用
的報(bào)告基因載體共轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，10 μmol·L-1利福平（RIF）為陽性對照，10 μmol·L–1酮康唑（TKZ）為陰性對照，用THSG（2.5，5，10 μmol·L-1）和蒽醌類成分（2.5，5，10 μmol·L-1）分別處理24 h，進(jìn)行雙熒光素酶活性檢測。結(jié)果表明，空載質(zhì)粒pcDNA3.1與pGL4.17-CYP3A4共轉(zhuǎn)染時(shí)，THSG、大黃酚、大黃素甲醚、大黃酸、蘆薈大黃素對CYP3A4的調(diào)控多為抑制效應(yīng)，大黃素對CYP3A4產(chǎn)生誘導(dǎo)
中國中藥雜志 2017年24期2018-01-29
- miR-125b靶向Smad4調(diào)控非創(chuàng)傷性股骨頭壞死骨髓基質(zhì)干細(xì)胞成骨分化與增殖的相關(guān)性
好的質(zhì)粒做三組共轉(zhuǎn)染，即Wt-Smad4與miR-125b mimics、Mut-Smad4和miR-125b mimics以及 miR-NC與miR-125b mimics，檢測熒光素酶的活性；BMP-2誘導(dǎo)HMSC-bm分化，將miR-125b mimics和si-Smad4轉(zhuǎn)染到分化的細(xì)胞內(nèi)，以不轉(zhuǎn)染的細(xì)胞作為參照，檢測miR-125b靶向Smad4對細(xì)胞分化的影響；將miR-125b mimics、miR-125b inhibitor和miR-NC
中國老年學(xué)雜志 2017年2期2017-02-14
- 綿羊肺腺瘤病毒SU蛋白與Hyal-2蛋白的結(jié)合域研究
-hyal-2共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，運(yùn)用激光共聚焦方法結(jié)合免疫共沉淀方法確定SU蛋白和Hyal-2蛋白可能結(jié)合區(qū)域。激光共聚焦顯微鏡觀察結(jié)果表明,SU1-SU5與Hyal-2均存在細(xì)胞內(nèi)共定位。免疫共沉淀方法檢測缺失型蛋白SU1-SU5與綿羊Hyal-2均不存在相互作用。su基因所缺失區(qū)域238 bp～867 bp對于SU蛋白與受體的結(jié)合都是必不可少的。關(guān)鍵詞：綿羊肺腺瘤病毒；SU蛋白；Hyal-2蛋白；結(jié)合區(qū)域綿羊肺腺瘤病(OPA)是由綿羊肺腺瘤病毒(Ov
動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展 2016年4期2016-05-10
- SOCS3通過PYK2信號通路調(diào)控小細(xì)胞肺癌的HI F-1α表達(dá)及增殖潛能△
-HIF-1α共轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。1.2..22免疫熒光檢測 使用紅色熒光標(biāo)記，在倒置熒光顯微鏡下，分別檢測已轉(zhuǎn)染細(xì)胞株及未轉(zhuǎn)染細(xì)胞株中SOCS3的表達(dá)水平。1.2..33細(xì)胞生長曲線的繪制 將人小細(xì)胞肺癌株NCI-H446細(xì)胞、Ad5轉(zhuǎn)染細(xì)胞株、Ad5-SOCS3轉(zhuǎn)染細(xì)胞株和Ad5-SOCS3-HIF-1α共轉(zhuǎn)染細(xì)胞株分別移至培養(yǎng)基中培養(yǎng)，于第4、8、12、16、20、24、28天使用細(xì)胞計(jì)數(shù)板分別計(jì)算細(xì)胞增殖數(shù)。檢測SOCS3單獨(dú)轉(zhuǎn)染及SOCS3與HIF-1
癌癥進(jìn)展 2015年1期2015-12-22
- 靶向豬ATGL 基因的miRNA預(yù)測及鑒定
iRNA模擬物共轉(zhuǎn)染HEK 293T細(xì)胞，最終利用雙熒光素酶報(bào)告基因法來檢測熒光素酶活性。試驗(yàn)成功構(gòu)建了含豬ATGL基因3′UTR序列的重組載體pMIR-ATGL-3′UTR，雙熒光素酶報(bào)告基因試驗(yàn)顯示ssc-miR-769-3p、ssc-miR-1343、ssc-miR-7137-3p、ssc-miR-671-5p、ssc-miR-149能下調(diào)293T細(xì)胞中pMIR-ATGL-3′UTR的熒光素酶活性，而點(diǎn)突變試驗(yàn)證實(shí)了ssc-miR-1343與ssc-
畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào) 2015年8期2015-03-22
- CBF-β 輔助SIVagm Vif 蛋白誘導(dǎo)限制因子APOBEC3G 的降解
A3.1 質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T 細(xì)胞；實(shí)驗(yàn)組將3 μg pcDNA-SIVVif-HA 與CBF-β 質(zhì)?；蛘呦鄳?yīng)量的pcDNA3.1 質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染進(jìn)293T 細(xì)胞。轉(zhuǎn)染24 h 之后換成含有終濃度100 μg/mL CHX(放線菌酮)的完全培養(yǎng)液，分別在加入CHX 后的0 h、1 h、2 h、6 h 和12 h 收 獲細(xì)胞，并將細(xì)胞裂解。進(jìn)行SDS-PAGE，將轉(zhuǎn)印蛋白的PVDF 膜用5 %的脫脂乳封閉，分別以HA 抗體(1∶10 000)、Flag 抗體(
中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào) 2015年10期2015-03-09
- 乙型肝炎病毒前S2蛋白激活人?；鞍琢蝓ッ?啟動子*
)-preS2共轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞系HepG2，然后通過檢測細(xì)胞熒光素酶活性來評價(jià)preS2對人APT1基因啟動子的作用。數(shù)據(jù)用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析。結(jié)果測序結(jié)果證實(shí)pcDNA3.1(-)-preS2與pGL3-APT1與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)相符。pGL3-APT1的熒光素酶活性是陽性對照質(zhì)粒pGL3-Control的熒光素酶活性的1.2倍(P肝炎病毒,乙型;病毒蛋白類；蛋白質(zhì)前體；?；鞍琢蝓ッ?；啟動子；反式激活乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)
重慶醫(yī)學(xué) 2015年29期2015-01-07
- CD14對生殖支原體LAMPs激活NF-κB的影響
g。1.2.5共轉(zhuǎn)染及NF-kB活性的測定 ①以pcDNA-CD14，pFLAG-TLR2， pNF-kB-luc及pRL-TK質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞24 h后，再用LAMPs刺激8 h；②LAMPs用10 μg/mL sCD14 37℃共孵育30 min后，再刺激0.1 μg/mL pFLAG-TLR2，0.05 μg/mL pNF-kB-luc，0.005 μg/mL pRL-TK共轉(zhuǎn)染的Hela細(xì)胞8 h。分別消化收集HeLa細(xì)胞，加入細(xì)胞裂解液20
中國人獸共患病學(xué)報(bào) 2014年8期2014-04-02
- 雙分子熒光互補(bǔ)系統(tǒng)的構(gòu)建及其在病毒學(xué)中的初步應(yīng)用
00 ng進(jìn)行共轉(zhuǎn)染。具體步驟參照Fugene HD試劑說明書執(zhí)行。待轉(zhuǎn)染16 h后，棄去部分培養(yǎng)基，然后將細(xì)胞置于熒光倒置顯微鏡下觀察熒光并拍照保存。2 結(jié)果2.1 Venus突變體的構(gòu)建根據(jù)突變體Venus與EYFP序列比較結(jié)果顯示，Venus共存在5個(gè)特異的氨基酸位點(diǎn)突變，分別為:F46L、F64L、M153T、V163A、S175G。構(gòu)建示意圖如圖1所示。在突變PCR過程中，為便于以后插入目的基因，在其N端分別引物了EcoRI，BamHI和XhoI
中國動物傳染病學(xué)報(bào) 2013年3期2013-07-04
- 小鼠DUSP1 3'-UTR雙熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)系統(tǒng)的建立及功能鑒定
作為陽性對照)共轉(zhuǎn)染，0.2μg LuDP/RL分別與0.1μg HuR表達(dá)載體(pcDNA 3.1-HuR-FLAG)和pCDNA3.1(作為對照)共轉(zhuǎn)染，0.2μg LuDP/RL分別與50nmol/L mmu-miR101a和Control dsRNA(作為對照)共轉(zhuǎn)染，48h后收獲細(xì)胞，采用Dual-Luciferase?Reporter Assay System檢測試劑盒檢測熒光素酶活性，具體操作按說明書進(jìn)行。圖1 小鼠DUSP1 3'-UTR序
解放軍醫(yī)學(xué)雜志 2013年4期2013-04-01
- 豬繁殖與呼吸綜合征病毒相關(guān)豬microRNA的初步篩選
K－utr質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染SUVEC，設(shè)立空載體對照，依照LipofectamineTM2000試劑說明轉(zhuǎn)染96孔板，各自設(shè)置6個(gè)復(fù)孔，轉(zhuǎn)染設(shè)置組如下：1：psiCHECKTM－2vector，2：psiCHECK－utr，3：miRNA control；psiCHECK－utr，4：inhibitor control；psiCHECK－utr，5：miR－323；psiCHECK－utr，6：miR－323inhibitor；psiCHECK－utr，7：mi
中國獸醫(yī)雜志 2012年3期2012-11-23
- pBIFC-VN173-CXCR4 和pBIFC-VC155-NT21MP 真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及其在活細(xì)胞內(nèi)的作用
.6 重組載體共轉(zhuǎn)染COS-7 細(xì)胞 將COS-7 細(xì)胞接種于24 孔板，每孔105個(gè)細(xì)胞，于500μl 無抗生素DMEM 完全培養(yǎng)液(含10%胎牛血清)中37℃、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)，待細(xì)胞融合度達(dá)80%至90%且細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染分組:①pBIFC-VN173 和pBIFCVC155 共轉(zhuǎn)染組;②pBIFC-VN173-CXCR4 轉(zhuǎn)染組;③pBIFC-VC155-NT21MP 轉(zhuǎn)染組;④pBIFCVN173-CXCR4 和pBIFC-V
- hTPO和hNIS共轉(zhuǎn)染肺癌細(xì)胞系H460介導(dǎo)放射性碘攝取的研究
增高，我們同時(shí)共轉(zhuǎn)染入人甲狀腺過氧化物酶（human thyroperoxidase, hTPO）基因，從而達(dá)到提高治療效果的目的。1 材料與方法1.1 材料和儀器 H460人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所惠贈，pcDNA3.1/hNIS質(zhì)粒由本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建并保存。G418硫酸鹽、DMEM高糖型培養(yǎng)基和脂質(zhì)體（LipofectamineTM2000）購自美國Invitrogen公司；實(shí)驗(yàn)用酶類均購自日本Takara（寶生物）公司。125I購自中
中國肺癌雜志 2010年6期2010-09-11
- TMD2前斷裂CFTR翻譯后的連接及氯離子通道功能
真核表達(dá)載體，共轉(zhuǎn)染培養(yǎng)的真核細(xì)胞，瞬時(shí)表達(dá)觀察CFTR的剪接，膜片鉗記錄細(xì)胞的 CI?電流和通道開放活性，為運(yùn)用雙AAV載體轉(zhuǎn)CFTR基因的CF基因治療研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1 材料與方法1.1 實(shí)驗(yàn)材料質(zhì)粒pMST (含split Ssp DnaB intein編碼序列)由加拿大Dalhousie大學(xué)醫(yī)學(xué)院Paul Liu教授實(shí)驗(yàn)室提供。含CFTR的質(zhì)粒pIRES2-EGFP-CFTR和幼年倉鼠腎臟細(xì)胞 (Baby hamster kidney，BHK)
生物工程學(xué)報(bào) 2010年12期2010-02-09