俞方毅，寧波，葉勁超，梁一鳴，陳家祥，許智蕾

（廣州市紅十字會醫(yī)院 神經外科，廣東 廣州 510220）

膠質母細胞瘤（glioblastoma，GBM）是中樞神經系統(tǒng)常見的惡性程度高、預后差的腫瘤，其中位生存期大約只有12個月。目前的治療方法以個體化的綜合治療為主，包括腫瘤切除、輔助放射療法和化學療法等［1］。迄今為止，通過多種機制殺傷腫瘤細胞并且能夠跨越血腦屏障的以蛋白酶體為靶點的藥物可能是一種很有前途的治療靶標。癌細胞比正常細胞更容易受到蛋白酶體抑制，可以通過抑制蛋白酶體活性來選擇性誘導癌細胞凋亡。馬利佐米是一種新型蛋白酶體類藥物，表現(xiàn)出強大的蛋白酶體抑制特性，并且最重要的是，它能透過血腦屏障，使其成為潛在的非常有效的可治療腦腫瘤的新型藥物［2］。與其他治療策略結合利用蛋白酶體抑制劑的生物學效應可能代表其臨床應用的關鍵一步。為此，本研究利用馬利佐米和替莫唑胺兩種藥物聯(lián)合治療裸鼠，探討是否縮小腫瘤、延長生存時間，為惡性膠質瘤的化療方案提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 顱內移植膠質瘤模型在32只NU／NU裸鼠顱內移植入人類神經膠質瘤細胞系U-251，4天后隨機分為四組，每組8只。馬利佐米組第1天、第4天、第8天、第11天、第15天尾靜脈靜注馬利佐米，質量分數為200μg·kg-1·d-1；替莫唑胺組第1天、第4天、第8天、第11天、第15天尾靜脈給替莫唑胺，質量分數為25 mg·kg-1·d-1；聯(lián)合藥物組第1天、第4天、第8天、第11天、第15天尾靜脈給質量分數為200μg·kg-1·d-1馬利佐米及質量分數為25 mg·kg-1·d-1替莫唑胺；空白組第1天、第4天、第8天、第11天、第15天尾靜脈給相同劑量的體積分數為0.9%氯化鈉溶液。

1.2 觀察指標使用IVIS影像系統(tǒng)及Living image軟件記錄移植瘤影像并計算移植后20 d的移植瘤體積，記錄裸鼠的生存期。

1.3 統(tǒng)計學方法應用SPSS 25.0軟件處理數據。計量資料以均數±標準差（±s）表示，比較采用單因素方差分析，組內進一步兩兩比較采用LSD-t檢驗。采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，Log-rank檢驗比較小鼠的生存率。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 裸鼠移植膠質瘤體積移植后20 d，馬利佐米和替莫唑胺聯(lián)合藥物組小鼠的移植瘤體積小于對照組、馬利佐米組和替莫唑胺組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 不同治療方案對四組裸鼠移植瘤體積的影響

2.2 生存曲線采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，聯(lián)合藥物組、馬利佐米組、替莫唑胺組和對照組小鼠的中位生存時間分別為66天、32天、33天和23天；Log-rank檢驗顯示，聯(lián)合藥物組小鼠的生存率高于馬利佐米組、替莫唑胺組和對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.000）。見圖1。

圖1 四組顱內移植膠質瘤模型裸鼠的生存曲線比較

3 討論

目前，盡管包括替莫唑胺在內的通過鳥嘌呤O6堿基來誘導DNA損傷和抑制DNA轉錄的烷化劑廣泛應用于惡性膠質瘤的綜合治療中，但膠質瘤患者仍然存在非常差的預后和很短的中位生存期，并且單一藥物的治療活性可能會隨著時間的流逝而降低，因為腫瘤細胞可能會變得耐藥，故需要對合適的替莫唑胺藥物伴侶進行進一步的探索研究。蛋白酶體是細胞維持各種功能的關鍵調節(jié)劑，負責細胞內蛋白質的降解，因此可以防止變性、錯誤折疊以及老化的蛋白質積聚導致細胞凋亡［3］。蛋白酶體抑制劑通過多種途徑抑制腫瘤細胞增殖和促進其凋亡，比如抑制蛋白酶會影響細胞質中NF-κB復合物的穩(wěn)定，然而，許多腫瘤細胞（例如多發(fā)性骨髓瘤細胞）需要完整的NF-κB信號傳導來維持增殖和生存能力［4］。另外，蛋白酶體的抑制還可以增加腫瘤抑制蛋白（如p27和p53）的穩(wěn)定性，從而減少腫瘤細胞的增殖［5］?？傊蓴_泛素-蛋白酶體途徑活性的藥物通過多種途徑破壞細胞，并導致增殖停止或誘導細胞死亡。

最初的體外研究［6］顯示，暴露于抑制蛋白酶體的藥物會導致廣泛的源自血液學和實體瘤的癌細胞增殖停止并誘導凋亡。馬利佐米是一種不可逆的β-內酯類抑制劑，與其他蛋白酶體抑制劑相似，馬利佐米在體外和臨床前腫瘤模型中均顯示出強大的抗癌活性。與其他蛋白酶體抑制劑相反，馬里佐米能透過血腦屏障，從而使其成為中樞神經系統(tǒng)腫瘤的一種極具潛能的治療選擇。進一步的研究［7］顯示，膠質瘤細胞暴露于馬利佐米會導致含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶依賴性細胞死亡。為此本研究設計了這兩種不同作用機制的藥物對膠質瘤細胞顱內移植小鼠療效的活體實驗，結果顯示，移植后20 d，馬利佐米和替莫唑胺聯(lián)合藥物組小鼠的移植瘤體積小于對照組、馬利佐米組和替莫唑胺組（P＜0.05）；另外，Kaplan-Meier生存曲線提示聯(lián)合藥物組、馬利佐米組、替莫唑胺組和對照組小鼠的中位生存時間分別為66天、32天、33天和23天；Logrank檢驗顯示，聯(lián)合藥物組小鼠的生存率高于對照組、馬利佐米組和替莫唑胺組小鼠，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），并且較馬利佐米和替莫唑胺單藥治療的生存時間顯著延長。上述結果表明，馬利佐米聯(lián)合替莫唑胺可能是延長膠質瘤患者生存時間的理想化療方案；同時，馬利佐米聯(lián)合替莫唑胺能延長生存時間的原因之一可能是兩藥聯(lián)合協(xié)同縮小膠質瘤體積。但小鼠模型不能完全復制人體對藥物的反應，因此，還需進一步的臨床前實驗及臨床實驗以驗證馬利佐米聯(lián)合替莫唑胺對神經膠質瘤的療效以及藥物的安全性。